乙型肝炎患者外周血T細(xì)胞亞群的分析及意義

李秀梅，梁樹人，李順天，李 萍，戴晨陽(yáng)，徐 健，蘇 瑞，劉 莉

(天津市傳染病醫(yī)院，天津300192)

乙型肝炎(乙肝)是一種免疫相關(guān)疾病，機(jī)體感染乙肝病毒(HBV)后并不直接對(duì)肝細(xì)胞造成損傷，而是通過誘發(fā)機(jī)體的免疫反應(yīng)間接損傷肝細(xì)胞。其中細(xì)胞免疫在肝細(xì)胞損害的發(fā)生中起主導(dǎo)作用，中心環(huán)節(jié)是通過T細(xì)胞對(duì)抗原的識(shí)別和激活，其中比較重要的T細(xì)胞亞群有CD3(總T細(xì)胞)，CD4(輔助/誘導(dǎo)T細(xì)胞)，CD8(抑制/細(xì)胞毒T細(xì)胞)。同時(shí)，機(jī)體產(chǎn)生的免疫反應(yīng)又發(fā)揮著清除病毒的作用。機(jī)體感染HBV后外周血各淋巴細(xì)胞亞群間的平衡被打破，主要表現(xiàn)為T細(xì)胞亞群絕對(duì)細(xì)胞數(shù)和功能的改變，這種變化可反映機(jī)體的細(xì)胞免疫狀態(tài)。由于乙肝的免疫機(jī)制復(fù)雜，因此對(duì)各型乙肝患者外周血T細(xì)胞亞群的絕對(duì)細(xì)胞數(shù)進(jìn)行觀察，以深入了解各型乙肝患者T細(xì)胞亞群的特點(diǎn)，進(jìn)而探討其與e抗原、病毒載量、乙肝病毒YMDD變異的關(guān)系，為乙肝患者的臨床診斷提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 228例不同乙肝患者均來自天津傳染病醫(yī)院2008年4月～2009年12月住院患者，其中包括:急性乙型肝炎(AHB)患者42例，男32例、女10例，年齡(32.45±11.38)歲;慢性乙型肝炎(CHB)患者88例，男62例、女26例，年齡(38.17 ±13.15)歲;乙肝肝硬化(LC)患者63例，男50例、女13例，年齡(40.64±12.80)歲;原發(fā)性肝癌(PHC)患者35例，男28例、女7例，年齡(43.69± 13.45)歲。臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)參照2005年全國(guó)病毒性肝炎會(huì)議修訂的《慢性乙型肝炎防治指南》［1］。正常對(duì)照組35例，男22例、女13例，年齡(37.58± 14.41)歲，均為門診健康體檢者。

1.2 方法

1.2.2 標(biāo)本處理 入院第2周清晨采患者空腹靜脈血3 mL，乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝。在樣品測(cè)定管(Trucount管)中首先加入50 μL抗凝全血，然后加入20 μL TritestCD4-FIYC/CD8-PE/CD3-PerCP抗體，振蕩混勻，室溫避光放置20 min。取出后再加入450 μL溶血素(1X)，振蕩混勻，室溫避光放置15 min，準(zhǔn)備上流式細(xì)胞儀進(jìn)行T細(xì)胞亞群絕對(duì)細(xì)胞數(shù)及比值的檢測(cè)。剩余血離心后取出血漿置于－20℃冰箱保存，用于HBeAg、HBV-DNA含量、YMDD變異的檢測(cè)。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11.5軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料以s表示，多組資料比較采用單因素方差分析，各組間比較采用SNK-q檢驗(yàn)。以P≤0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 各組乙肝患者外周血T細(xì)胞亞群絕對(duì)細(xì)胞數(shù)的比較 見表1。

2.2 HBeAg(+)/(－)患者T細(xì)胞亞群絕對(duì)細(xì)胞數(shù)比較 見表2。

2.3 HBV-DNA(+)/(－)患者T細(xì)胞亞群絕對(duì)細(xì)胞數(shù)比較 見表3。

2.4 YMDD變異組與野生組T細(xì)胞亞群絕對(duì)細(xì)胞數(shù)比較 見表4。

表1 不同乙肝患者T細(xì)胞亞群絕對(duì)細(xì)胞數(shù)與正常對(duì)照組的比較(s)

表1 不同乙肝患者T細(xì)胞亞群絕對(duì)細(xì)胞數(shù)與正常對(duì)照組的比較(s)

注:與對(duì)照組比較，*P＜0.01

組別 n CD+3(cells/μL) CD+4(cells/μL) CD+8(cells/μL) CD+4/CD+8 AHB組 42 2 094.19±414.35* 1 084.67±353.49* 953.10±283.87*1.34±0.63 CHB組 88 1 124.58±332.47 625.89±225.51 453.16±177.64 1.55±0.76 LC組 63 564.80±146.14* 334.69±127.92* 194.20±69.56* 2.01±0.92* PHC組 35 454.48±150.50* 275.34±97.37* 156.86±79.04* 2.02±0.68*對(duì)照組 35 1208.52±199.97 645.40±132.64 514.96±111.22 1.30±0.34

表2 HBeAg(+)/(－)患者T細(xì)胞亞群絕對(duì)細(xì)胞數(shù)比較(s)

表2 HBeAg(+)/(－)患者T細(xì)胞亞群絕對(duì)細(xì)胞數(shù)比較(s)

注:與對(duì)照組比較，*P＜0.05，△P＜0.01;與HBeAg(－)組比較，#P＜0.05，▲P＜0.01

組別 n CD+3(cells/μL) CD+4(cells/μL) CD+8(cells/μL) CD+4/CD+8 HBeAg(+)組 139 882.27±235.86△▲ 548.23±175.18*# 325.49±109.14△▲ 1.99±0.78△# HBeAg(－)組 89 1 043.21±340.57△ 609.19±203.09 423.69±149.32△ 1.64±0.71*對(duì)照組 35 1 208.52±199.97 645.40±132.64 514.96±111.22 1.30±0.34

表3 HBV-DNA(+)/(－)患者T細(xì)胞亞群絕對(duì)細(xì)胞數(shù)比較(s)

表3 HBV-DNA(+)/(－)患者T細(xì)胞亞群絕對(duì)細(xì)胞數(shù)比較(s)

注:與對(duì)照組比較，*P＜0.05，△P＜0.01;與HBV-DNA(－)組比較，▲P＜0.01

組別 n CD+3(cells/μL) CD+4(cells/μL) CD+8(cells/μL) CD+4/CD+8 HBV-DNA(+)組 156 930.03±253.41△▲ 545.41±117.71* 390.54±147.23△▲ 1.88±0.81△HBV-DNA(－)組 72 1 089.37±301.59 589.23±201.19 461.87±198.89 1.74±0.59△對(duì)照組 35 1 208.52±199.97 645.40±132.64 514.96±111.22 1.30±0.34

表4 YMDD變異組與野生組T細(xì)胞亞群絕對(duì)細(xì)胞數(shù)與正常對(duì)照組的比較(s)

表4 YMDD變異組與野生組T細(xì)胞亞群絕對(duì)細(xì)胞數(shù)與正常對(duì)照組的比較(s)

注:與對(duì)照組比較，*P＜0.05，△P＜0.01;與YMDD野生組比較，▲P＜0.01

組別 n CD+3(cells/μL) CD+4(cells/μL) CD+8(cells/μL) CD+4/CD+8 YMDD野生組 108 1 071.88±313.13*605.31±187.79 452.27±184.41 1.54±0.71 YVDD變異組 15 746.83±204.41△▲ 401.24±145.59△▲ 285.17±93.21△▲ 1.79±0.85＊▲YIDD變異組 33 703.28±201.19△▲ 427.34±163.39△▲ 261.65±101.37△▲ 1.85±0.93＊▲對(duì)照組 35 1 208.52±199.97 645.40±132.64 514.96±111.22 1.30±0.34

3 討論

乙肝的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，目前認(rèn)為宿主免疫系統(tǒng)功能紊亂是其病理?yè)p傷的主要機(jī)制或主要原因。其中大量證據(jù)表明，在HBV的清除和發(fā)病機(jī)制中，細(xì)胞免疫起著重要作用，細(xì)胞免疫機(jī)制是乙肝感染的發(fā)病機(jī)制之一［2］，而T淋巴細(xì)胞是人體主要的免疫細(xì)胞，是免疫系統(tǒng)發(fā)揮功能的重要組成部分。因此保證T淋巴細(xì)胞的正常免疫生理功能及各亞群間的數(shù)、質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定是非常重要的。

本研究結(jié)果還表明HBeAg(+)感染組和HBVDNA(+)復(fù)制組T細(xì)胞亞群數(shù)量顯著下降，說明體內(nèi)病毒水平越高，T細(xì)胞數(shù)量越低。原因可能是由于HBeAg(+)感染者和HBV-DNA(+)復(fù)制者體內(nèi)病毒復(fù)制活躍，破壞了外周血單個(gè)核細(xì)胞，其中對(duì)T細(xì)胞破壞較多，引起細(xì)胞免疫功能降低，不能清除病毒，使病毒在慢性肝炎患者體內(nèi)持續(xù)存在［6］。另外由于近年來抗HBV藥物的應(yīng)用，許多患者出現(xiàn)了耐藥性，最為常見的即發(fā)生YMDD變異。本研究顯示發(fā)生YMDD變異的乙肝患者的T細(xì)胞亞群數(shù)明顯低于未發(fā)生變異的患者。在機(jī)體的免疫應(yīng)答中，T細(xì)胞對(duì)多肽的識(shí)別主要集中在一個(gè)殘基，它是T細(xì)胞反應(yīng)的關(guān)鍵，僅僅單個(gè)氨基酸的改變，便可以影響抗原與HLA-I類分子的結(jié)合力，或改變T細(xì)胞受體(TCR)的識(shí)別效率。變異的HBV可能通過各種途徑改變機(jī)體的免疫應(yīng)答，引起HBV的持續(xù)感染或肝細(xì)胞損傷，甚至肝衰竭［7］。因此同時(shí)監(jiān)測(cè)HBV變異情況及機(jī)體免疫狀況，有助于了解二者之間的關(guān)系。比值是反映機(jī)體細(xì)胞免疫狀態(tài)的重要指標(biāo)，它可以一定程度反映機(jī)體細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)功能，比值失衡可以導(dǎo)致細(xì)胞免疫系統(tǒng)紊亂及一系列免疫病理改變［8］。本研究結(jié)果顯示各組比值都高于正常對(duì)照組，說明患者體內(nèi)出現(xiàn)了不同程度的細(xì)胞免疫功能紊亂。

總之，T細(xì)胞亞群數(shù)量的改變可大致反應(yīng)出肝病患者的免疫狀態(tài)，AHB、CHB、LC及PHC發(fā)病機(jī)制各不相同，但或多或少存在著一定的內(nèi)在聯(lián)系。通過測(cè)定T細(xì)胞亞群數(shù)量，一方面我們可以了解到患者機(jī)體的細(xì)胞免疫狀態(tài)，以便于實(shí)施有效的治療;另一方面還可以監(jiān)測(cè)肝炎患者是否有發(fā)生肝硬變甚至癌變的趨勢(shì)。因此在乙肝患者中通過應(yīng)用適當(dāng)方法提高機(jī)體細(xì)胞免疫功能和應(yīng)答，重建有效的T細(xì)胞免疫，有可能阻止或延緩乙肝的慢性化及病情的進(jìn)展，為進(jìn)一步探討HBV感染者細(xì)胞免疫狀態(tài)與免疫損傷之間的確切關(guān)系提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

［1］中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)、感染病學(xué)分會(huì).慢性乙型肝炎防治指南［J］.中華肝臟病雜志，2005，13(12):881-891.

［2］Zhang SJ，Chen ZX，Lao SX，et al.Effect of Hejie decoction on T cell immune state of chronic hepatitis B patients［J］.World J Gastroenterol，2004，10(10):1436-1439.

［3］翁彭劍，應(yīng)豪，洪玲珍，等.慢性乙型肝炎患者淋巴細(xì)胞及其表型與病情的關(guān)［J］.中華肝臟病雜志，2008，16(9): 654-656.

［4］范振平，張玲霞，楊斌，等.乙型肝炎患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的特點(diǎn)和意義［J］.世界華人消化雜志，2005，13(2):194-197.

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［6］You J，Sriplung H，Geater A，et al.Effect of viral load on T-lymphocyte failure in patients with chronic hepatitis B［J］.World J Gastroenterol，2008，14(7):1112-1119.

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