乳桿菌抑制金黃色葡萄球菌對(duì)HeLa細(xì)胞的粘附

王江，張瑞芬，周莉，蘇小虎，胡春紅，朱寶利，馮濤

1 重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室，重慶 400016

2 中國科學(xué)院微生物研究所，北京 100101

3 惠斯康健康科技 (北京) 有限公司，北京 100086

4 中國科學(xué)院大氣物理研究所，北京 100029

細(xì)菌性泌尿生殖道感染好發(fā)于育齡期婦女，腸道細(xì)菌是引起泌尿生殖道感染的主要病原菌，腸道細(xì)菌上行容易引起陰道、尿道和膀胱感染[1]。金黃色葡萄球菌 (以下簡稱為金葡菌) 是一種常見條件致病菌，是引起院內(nèi)感染和社區(qū)感染的主要病原菌。金葡菌與尿路感染關(guān)系密切[2]，也是引起女性生殖道感染較為常見的一種病原菌[3]。金葡菌還能夠引起關(guān)節(jié)軟組織手術(shù)感染、敗血癥、侵襲性心內(nèi)膜炎及中毒性休克綜合癥等局部及全身感染性疾病，中毒性休克綜合癥主要發(fā)生于育齡期婦女，尤其是衛(wèi)生棉條使用者[4-5]。由于抗生素的濫用，泌尿生殖道病原菌 (包括金葡菌) 耐藥較普遍，許多抗生素治療已不起作用，抗生素治療面臨巨大挑戰(zhàn)，迫切需要從生物抑菌角度方面尋找一種有效的抗生素替代治療法。

乳桿菌是健康陰道微環(huán)境中的主要菌群(107~108CFU/g)。它能抑制病源微生物的侵入和過度生長，調(diào)節(jié)微生態(tài)平衡，對(duì)維護(hù)女性生殖道健康起著重要作用[6]。陰道乳桿菌通過競爭營養(yǎng)物質(zhì)，產(chǎn)生乳酸、過氧化氫和抗菌肽樣等活性物質(zhì)，調(diào)節(jié)陰道微生態(tài)平衡、抑制病原菌生長[7]。陰道乳桿菌減少或缺失直接增加陰道、尿道感染的幾率。因而，人們對(duì)乳桿菌作為益生菌開發(fā)用于維持陰道微生態(tài)平衡，防治泌尿生殖道感染產(chǎn)生了濃厚興趣[8]。目前，乳桿菌制品在調(diào)節(jié)免疫性疾病，降低膽固醇，治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、皮炎，預(yù)防癌癥等各方面都有一定療效[9]。乳桿菌制品臨床上用于預(yù)防感染性疾病有一個(gè)很好的基礎(chǔ)理論，而且安全性能高，但僅少部分乳桿菌制品在臨床應(yīng)用中發(fā)揮作用[10]，因此，仍需繼續(xù)尋找抑菌效果更好的菌株。

無論是益生菌發(fā)揮防御調(diào)控功能還是病原菌致病，粘附定植是關(guān)鍵[11]。乳桿菌與上皮細(xì)胞粘附結(jié)合，在細(xì)胞表面形成菌膜，增大上皮細(xì)胞表面的空間位阻，阻止外源菌在陰道環(huán)境中定植并釋放抑菌物質(zhì)，實(shí)現(xiàn)其抑菌作用。于是，我們嘗試選擇一株粘附性能較強(qiáng)的乳桿菌來抑制病原菌在上皮細(xì)胞表面粘附定植，游離的病菌容易被抗菌物質(zhì)殺死，隨陰道分泌物排出體外[12]。前期實(shí)驗(yàn)我們對(duì)健康育齡期婦女陰道中分離乳桿菌菌株產(chǎn)酸、產(chǎn)H2O2能力等相關(guān)性能作了相應(yīng)評(píng)估[13]。該實(shí)驗(yàn)在此基礎(chǔ)上，擴(kuò)大分離、篩選菌株，并將得到的 4株產(chǎn)酸、產(chǎn)H2O2能力較高的乳桿菌進(jìn)行粘附定植以及抑制金葡菌相關(guān)方面研究。

1 材料與方法

1.1 菌株和細(xì)胞

菌株L. crispatus T79-3、L. crispatus T90-1、L. jensenii T118-3、L. jensenii T231-1由實(shí)驗(yàn)室從健康育齡期婦女陰道中分離。金葡菌從北京306醫(yī)院胃腸道疾病患者糞便中分離。HeLa細(xì)胞由實(shí)驗(yàn)室保存。陰道上皮細(xì)胞分離于健康育齡期婦女。

1.2 主要試劑和儀器

Mann-Rogosa-Sharpe (MRS) 培養(yǎng)基購自美國 OXID公司，LB培養(yǎng)基、特級(jí)胎牛血清、Dulbecco modified Eagle’s minimal essential medium (DMEM) 培養(yǎng)基購自美國 Hyclone公司，革蘭氏染液購自北京索萊寶科技有限公司，0.22 μm、0.8 μm濾膜購自美國Millipore公司，酶標(biāo)儀購自美國BIO-TEK公司，離心機(jī)購自美國Beckman公司，顯微鏡購自日本Olympus公司，細(xì)胞培養(yǎng)箱等。

1.3 乳桿菌抑菌活性檢測(cè)及有效成分分析

將活化過夜培養(yǎng)的 4株乳桿菌按 10%的比例分別接種于10 mL MRS液體培養(yǎng)基中并置于37 ℃培養(yǎng)8~16 h，然后再于37 ℃、220 r/min搖床上培養(yǎng)3 h，發(fā)酵液過濾除菌后存于4 ℃?zhèn)溆谩＝鹌暇?(OD600=0.208) 100倍稀釋后取100 μL均勻涂布于MRS固體平板上于4 ℃?zhèn)溆谩Ｒ志钚詸z測(cè)：取250 μL過濾除菌的發(fā)酵液分別加入放置在涂有指示菌平板上的牛津杯中，37 ℃、5% CO2孵箱中過夜培養(yǎng)。抑菌成分分析：有機(jī)酸抑菌作用檢測(cè)，過濾除菌的發(fā)酵液用蛋白酶K (終濃度0.1 g/L) 和過氧化氫酶 (終濃度0.5 g/L)處理。H2O2抑菌作用檢測(cè)，中和發(fā)酵液pH (pH 6.3)并用蛋白酶K (終濃度0.1 g/L) 處理。細(xì)菌素樣復(fù)合物抑菌作用檢測(cè)，中和發(fā)酵液 pH (pH 6.3)并用過氧化氫酶 (終濃度0.5 g/L) 處理。將處理好的發(fā)酵液各取250 μL分別加入置于涂有指示菌平板上的牛津杯中，置于37 ℃、5% CO2孵箱中過夜培養(yǎng)，觀察照相[14]。

1.4 不同酸性緩沖介質(zhì)對(duì)乳桿菌粘附陰道上皮細(xì)胞的影響

PBS (pH 7.4) 緩沖介質(zhì)組：500 μL陰道上皮細(xì)胞濃度為105個(gè)/mL的PBS與500 μL乳桿菌濃度為 108CFU/mL的 PBS等比例混合。Mcilvaine 緩沖液 (pH 4.4) 緩沖介質(zhì)組：500 μL陰道上皮細(xì)胞濃度為105個(gè)/mL的Mcilvaine緩沖液與 500 μL乳桿菌濃度為 108CFU/mL的Mcilvaine緩沖液等比例混合。細(xì)胞與細(xì)菌混合后置于37 ℃搖床100 r/min孵育1 h，然后用0.8 μm濾膜過濾清洗游離乳桿菌并將濾膜輕壓于蓋玻片上，固定細(xì)胞進(jìn)行革蘭氏染色后油鏡觀察，分別計(jì)數(shù)20個(gè)細(xì)胞粘附細(xì)菌數(shù)，計(jì)算每個(gè)細(xì)胞粘附細(xì)菌數(shù)[15-16]。

1.5 乳桿菌對(duì)HeLa細(xì)胞的粘附作用

500 μL 濃度為105個(gè)/mL HeLa細(xì)胞接種于24孔培養(yǎng)板中，置于37 ℃、5% CO2孵箱中過夜培養(yǎng)，將過夜培養(yǎng)的HeLa細(xì)胞用PBS清洗3次并加入500 μL DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基。取500 μL，濃度為108CFU/mL活化過夜培養(yǎng)的乳桿菌加入含有500 μL DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基的24孔培養(yǎng)板中，置于37 ℃、5% CO2環(huán)境中孵育2 h，然后用PBS清洗4次，0.25%的胰酶消化4~5 min，再用350 μL DMEM培養(yǎng)基終止消化，并吹打混勻，取100 μL，104倍稀釋菌液涂布MRS平板，37 ℃培養(yǎng)計(jì)數(shù)。取3次平行測(cè)定的平均值[17]，同時(shí)進(jìn)行革蘭氏染色觀察。

1.6 不同濃度乳桿菌對(duì)金葡菌粘附 HeLa細(xì)胞的抑制實(shí)驗(yàn)

活化過夜培養(yǎng)的乳桿菌L. crispatus T79-3、L. crispatus T90-1菌液經(jīng)梯度稀釋后，取106~109CFU/mL 4個(gè)濃度梯度菌液分別與活化過夜培養(yǎng)的金葡菌 (108CFU/mL) 等體積混合，然后再將 500 μL混合菌液加入含有 500 μL DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基的HeLa細(xì)胞中，37 ℃、5% CO2孵育2 h，用PBS清洗4次，0.25%的胰酶消化4~5 min，再用350 μL DMEM培養(yǎng)基終止消化，并吹打混勻，取100 μL，104倍稀釋菌液涂布LB平板，37 ℃培養(yǎng)計(jì)數(shù)，取3次平行測(cè)定的平均值。將金葡菌直接加入HeLa細(xì)胞中孵育、清洗后進(jìn)行革蘭氏染色作對(duì)照[18]。

1.7 乳桿菌不同作用方式對(duì)金葡菌粘附HeLa細(xì)胞的抑制實(shí)驗(yàn)

將活化過夜培養(yǎng)的乳桿菌和金葡菌離心、棄上清，并用PBS清洗菌液沉淀2次，再用DMEM溶解沉淀，調(diào)整菌液濃度為108CFU/mL備用。實(shí)驗(yàn)分為4組：1) 空白對(duì)照組，向HeLa細(xì)胞中加入250 μL金葡菌，置于37 ℃、5% CO2環(huán)境中孵育2 h；2) 排除實(shí)驗(yàn)組，向HeLa細(xì)胞中加入250 μL乳桿菌，在37 ℃、5% CO2環(huán)境中孵育1 h后加入250 μL金葡菌，再孵育1 h；3) 競爭實(shí)驗(yàn)組，乳桿菌液與金葡菌液按 1∶1比例混合后取500 μL加入500 μL由24孔板培養(yǎng)的單層HeLa細(xì)胞培養(yǎng)基中，37 ℃、5% CO2孵育條件下2 h；4) 置換實(shí)驗(yàn)組，向HeLa細(xì)胞中加入250 μL金葡菌，37 ℃、5% CO2孵育1 h后加入250 μL乳桿菌再孵育1 h。孵育結(jié)束后，用PBS清洗細(xì)胞4次，將游離細(xì)菌洗凈，滴加150 μL胰酶消化細(xì)胞 4~5 min，再用 350 μL DMEM培養(yǎng)基終止消化，并吹打混勻，取100 μL，104倍稀釋菌液涂布LB平板，37 ℃培養(yǎng)計(jì)數(shù)，取3次平行測(cè)定的平均值[19]。

1.8 統(tǒng)計(jì)分析

在SPSS中利用單因素方差分析統(tǒng)計(jì)方法，比較4株乳桿菌粘附HeLa細(xì)胞的能力以及抑制金葡菌粘附 HeLa細(xì)胞能力是否具有顯著性差異，同時(shí)在方差齊性的基礎(chǔ)上兩兩比較，比較排除、競爭和置換3種作用方式之間是否存在顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 乳桿菌的抑菌活性及抑菌成分分析

抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本研究中分離到的4株乳桿菌對(duì)金葡菌皆有不同程度抑制作用，其中T79-3、T118-3對(duì)金葡菌的抑菌圈直徑明顯大于T90-1和T231-1，說明T79-3、T118-3具有較強(qiáng)的抑菌能力 (圖1A)。分別對(duì)4株乳桿菌的抑菌成分進(jìn)行分析，將乳桿菌發(fā)酵液用蛋白酶K和過氧化氫酶處理后，僅保留有機(jī)酸性物質(zhì)，其抑菌效果與初始發(fā)酵液的抑菌效果幾乎一致 (圖1B-a和1B-b)，而未用蛋白酶K和過氧化氫酶處理，僅調(diào)整發(fā)酵液pH時(shí)乳桿菌發(fā)酵液對(duì)金葡菌無抑菌作用 (圖1B-c和1B-d)，表明4株乳桿菌抑制金葡菌生長的主要成分是有機(jī)酸。

2.2 不同酸性緩沖介質(zhì)對(duì)乳桿菌粘附陰道上皮細(xì)胞的影響

不同pH緩沖介質(zhì)中乳桿菌粘附上皮細(xì)胞能力不同。PBS (pH 7.4) 緩沖介質(zhì)中上皮細(xì)胞粘附細(xì)菌數(shù)為 13.6 CFU/個(gè) (圖 2A)；Mcilvaine (pH 4.4) 緩沖介質(zhì)中上皮細(xì)胞粘附細(xì)菌數(shù)為59.5 CFU/個(gè) (圖2B)。酸性環(huán)境有利于乳桿菌與陰道上皮細(xì)胞的粘附。

2.3 乳桿菌對(duì)HeLa細(xì)胞的粘附作用

圖1 乳桿菌的抑菌活性比較及抑菌成分分析Fig. 1 Comparison of the inhibition ability and determination of the bioactive substances of the four Lactobacillus. (A) Comparison of the inhibition ability of the four Lactobacillus to Staphylococcus aureus. (B) Determination of the bioactive substances of the four Lactobacillus that inhibit Staphylococcus aureus. a, b, c and d represent the cell-free supernatant activity, acids-dependent activity, bacteriocin-like compound-dependent activity and H2O2-dependent activity, respectively.

圖2 不同酸性緩沖介質(zhì)對(duì)乳桿菌粘附陰道上皮細(xì)胞的影響Fig. 2 Effect of different pH buffer on the probiotic vaginal Lactobacillus on in vitro adhesion of vaginal epithelial cells. (A) The number of adhered Lactobacillus to vaginal epithelial cell in PBS (pH 7.4) as observed by light microscope after Gram staining. (B) The number of adhered Lactobacillus to vaginal epithelial cell in Mcilvaine buffer (pH 4.4) as observed by light microscope after Gram staining.

圖3 四株乳桿菌與HeLa細(xì)胞粘附作用比較Fig. 3 Comparison of the adhesive ability of the four Lactobacillus to HeLa cells. (A) Adhered Lactobacillus on HeLa cell in one random microscopic field. (B) The number of bacterial cells adhered to HeLa cell.

粘附實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明4株乳桿菌對(duì)HeLa細(xì)胞均具有一定的粘附作用 (圖3)。計(jì)數(shù)粘附細(xì)菌數(shù)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析可知4株乳桿菌粘附HeLa細(xì)胞的能力具有顯著性差異 (P=0.002<0.05)，其中L. crispatus T79-3粘附能力最強(qiáng)，L. jensenii T118-3次之，而L. crispatus T90-1和L. jensenii T231-1較弱。此外，細(xì)胞形態(tài)觀察表明 (圖 2) L. crispatus T79-3菌體較 L. crispatus T90-1、L. jensenii T231-1大，皆為短桿菌，而L. jensenii T118-3菌體最小，似球桿菌。

2.4 不同濃度乳桿菌對(duì)金葡菌粘附 HeLa細(xì)胞作用的影響

金葡菌對(duì) HeLa細(xì)胞有較強(qiáng)的粘附能力(圖4A)，為了確定不同濃度乳桿菌對(duì)金葡菌粘附HeLa細(xì)胞的影響，我們對(duì)4株菌中的T97-3和T90-1進(jìn)行了粘附抑制實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示這2株乳桿菌對(duì)金葡菌粘附HeLa細(xì)胞的抑制作用均具有濃度依賴性 (圖 4B)。隨著乳桿菌濃度增加，對(duì)金葡菌的抑制作用逐漸增強(qiáng)，粘附HeLa細(xì)胞的金葡菌數(shù)量減少。菌株L. crispatus T90-1在濃度為108CFU/mL時(shí)抑制作用達(dá)到飽和，此時(shí)乳桿菌濃度增加，對(duì)金葡菌的抑菌作用變化不明顯。

2.5 乳桿菌不同作用方式對(duì)金葡菌粘附HeLa細(xì)胞作用的影響

為了確證乳桿菌抑制金葡菌粘附HeLa細(xì)胞的最佳作用方式，我們對(duì)排除、競爭和置換3種不同作用方式的效果進(jìn)行了評(píng)價(jià)。結(jié)果表明3種不同作用方式對(duì)金葡菌粘附HeLa細(xì)胞抑制效果各不相同，但無論哪種方式下，與對(duì)照組相比，乳桿菌對(duì)金葡菌粘附HeLa細(xì)胞均具有明顯抑制作用 (P＜0.05) (圖5)。不同作用方式之間的比較表明，競爭和置換兩種方式間抑菌效果無顯著性差異 (P＞0.05)，而排除實(shí)驗(yàn)組抑菌效果與競爭實(shí)驗(yàn)組和置換實(shí)驗(yàn)組之間具有顯著性差異 (P值分別為0.001和0.011，均小于0.05)，其中排除實(shí)驗(yàn)組對(duì)金葡菌的粘附抑制能力最強(qiáng)，置換實(shí)驗(yàn)組的抑制能力最弱。

圖4 不同濃度乳桿菌對(duì)抑制金葡菌粘附HeLa細(xì)胞的影響Fig. 4 Inhibition of adherence of Staphylococcus aureus to HeLa by the different concentration of Lactobacillus. (A) Adhered Staphylococcus aureus on HeLa cell in one random microscopic field. (B) Each value shown is the ±s from four independent experiments.

圖5 四株乳桿菌不同作用方式對(duì)金葡菌粘附HeLa細(xì)胞的影響Fig. 5 Influence of different interactive manners of Lactobacillus on adhesion of Staphylococcus aureus to HeLa. Inhibition of adhesion to HeLa of Staphylococcus aureus. *Significantly different from the respective control (P<0.05).

3 討論

本研究首先驗(yàn)證了乳桿菌能夠抑制金葡菌生長，乳酸發(fā)揮了主要抑菌作用。結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，乳桿菌主要通過分解環(huán)境中的碳水化合物產(chǎn)生乳酸，提供一個(gè)酸性環(huán)境 (pH值＜4.5) 來抑制病原菌生長[20]。模擬酸性內(nèi)環(huán)境，探討不同pH值環(huán)境對(duì)乳桿菌粘附陰道上皮細(xì)胞的影響，發(fā)現(xiàn)在相同孵育條件下，不同pH環(huán)境中粘附結(jié)果不同，酸性環(huán)境有利于乳桿菌與上皮細(xì)胞結(jié)合，在該理論基礎(chǔ)支持下本研究選擇用PBS作緩沖介質(zhì)進(jìn)行乳桿菌抑制金葡菌與HeLa細(xì)胞粘附體外實(shí)驗(yàn)，對(duì)生殖道來源乳桿菌株篩選有意義。在此基礎(chǔ)上，我們對(duì)分離篩選到的4株乳桿菌做了抑制相關(guān)體外實(shí)驗(yàn)，簡單評(píng)估了乳桿菌抑制金葡菌生長的能力，初步分析了有效抑菌成分并比較了不同作用方式乳酸桿菌抑制金黃色葡萄球菌粘附HeLa細(xì)胞的能力。其次，觀察了乳桿菌粘附HeLa細(xì)胞的能力，發(fā)現(xiàn)這種粘附能力大小除了跟自身粘附性能相關(guān)外還受外界因素影響，如實(shí)驗(yàn)中涉及到的細(xì)菌濃度，于是推斷出108CFU/mL乳桿菌濃度用于抑制金葡菌粘附定植試驗(yàn)較合適。最后，比較了不同作用方式粘附抑制效果差異，采用排除抑制的方式 (即先定植乳桿菌)，乳桿菌定植成功后對(duì)金葡菌的粘附抑制能力最強(qiáng)，而置換清除實(shí)驗(yàn)組 (即先定植金葡菌) 乳桿菌的抑制能力最弱。一方面可能是由于預(yù)先成功定植的乳桿菌產(chǎn)生了抑菌物質(zhì)，從而抑制了金葡菌的外源細(xì)菌生長，而表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑菌效果。主要原因可能是由于在排除作用方式中乳桿菌占位結(jié)合，預(yù)先占用了 Hela細(xì)胞的結(jié)合位點(diǎn)，增大了空間位阻，從而抑制了金葡菌的粘附作用；而在置換清除方式中，金葡菌優(yōu)先與HeLa細(xì)胞表面相關(guān)受體結(jié)合，占據(jù)了有限的細(xì)胞表面結(jié)合受體，降低了乳桿菌與細(xì)胞結(jié)合的機(jī)率，因此容易導(dǎo)致部分乳桿菌流失，表現(xiàn)為其抑菌作用減弱。這也部分解釋了為什么在競爭方式下，不同的乳桿菌株表現(xiàn)出不同的抑制能力：即乳桿菌與金葡菌同時(shí)作用時(shí)，二者競爭結(jié)合細(xì)胞表面結(jié)合受體，而由于不同細(xì)菌表面蛋白表達(dá)具有差異性，因此導(dǎo)致不同細(xì)菌的粘附能力不同[19]。例如，有的乳桿菌種屬細(xì)菌細(xì)胞壁能夠表達(dá)S-layer蛋白，這是一種關(guān)鍵的細(xì)胞粘附蛋白，能夠促進(jìn)自身粘附，抑制某些病原菌的侵襲，同時(shí)還具有抑菌活性，通過調(diào)節(jié)MAPK、ERK1/2等信號(hào)通路介導(dǎo)病原菌凋亡，實(shí)現(xiàn)抑菌作用[20-22]。

本研究選擇生殖道來源乳桿菌作為治療預(yù)防泌尿生殖道感染菌劑產(chǎn)品開發(fā)的主要研究對(duì)象，是因?yàn)槿闂U菌是健康陰道微環(huán)境中的優(yōu)勢(shì)菌群，對(duì)維持陰道微生態(tài)平衡起著重要作用[23]。乳桿菌為優(yōu)勢(shì)菌的陰道環(huán)境不易受到腸道來源的厭氧菌及皮膚表面的金黃色葡萄球菌的侵襲，相反，乳桿菌比例明顯減少或以非乳桿菌為優(yōu)勢(shì)菌的陰道環(huán)境很容易感染各種致病菌，并進(jìn)一步引起泌尿系統(tǒng)的炎癥[24]。選擇金葡菌作指示菌，是由于金葡菌是我們實(shí)驗(yàn)室常用病原指示菌，它廣泛存在于自然界中，引起的細(xì)菌性感染疾病僅次于大腸桿菌，而且金葡菌容易產(chǎn)生不同程度的耐藥性，為抗生素的臨床治療帶來了極大的挑戰(zhàn)，因此研究生殖道來源乳桿菌對(duì)金葡菌粘附定植的影響顯得更有意義。此外，HeLa細(xì)胞來源于生殖道，與生殖道上皮細(xì)胞關(guān)系較為密切并能在體外連續(xù)傳代培養(yǎng)，其來源與培養(yǎng)比陰道上皮細(xì)胞方便容易，為乳桿菌與病原菌相互關(guān)系的體外研究帶來方便，同時(shí)為體內(nèi)試驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。

宿主自身免疫系統(tǒng)具有調(diào)節(jié)微生態(tài)平衡的功能，它與微生物之間的相互調(diào)控功能機(jī)制還不明確[25]，我們有必要將乳桿菌與宿主免疫相關(guān)性作一些相應(yīng)的機(jī)制研究，這有利于我們更好地篩選與人體依存性較好的菌株?？傊狙芯繉?duì)分離自女性生殖道的4株乳桿菌進(jìn)行了抑菌活性檢測(cè)、抑菌成分分析，對(duì)HeLa細(xì)胞的黏附作用和金黃色葡萄球菌黏附HeLa細(xì)胞的抑制作用等進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。結(jié)果表明，我們篩選到的4株乳桿菌能夠有效抑制金葡菌生長及粘附定植，乳桿菌對(duì)金葡菌粘附抑制可能是二者競爭、空間位阻和抑菌等共同作用的結(jié)果。粘附定植是乳桿菌實(shí)現(xiàn)生物調(diào)控的關(guān)鍵步驟，而實(shí)驗(yàn)菌株T79-3粘附能力及對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用較強(qiáng)，因此，初步判定T79-3可作為防治女性泌尿道生殖道感染的候選有益菌。

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