硫氧還蛋白在凋亡途徑中的作用機(jī)制

徐 濤，于 濤

（東北林業(yè)大學(xué)鹽堿地生物資源環(huán)境研究中心/東北油田鹽堿植被恢復(fù)與重建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，哈爾濱150040）

硫氧還蛋白（Trx）是一種小分子蛋白質(zhì)，它廣泛存在于原核和真核生物中。1964年，Trx在大腸桿菌中首次被定義為氧化還原蛋白［1］。隨后，1967年，Moore EC［2］在大鼠的肝癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了硫氧還蛋白，1977年，Pigiets.P［3］在大腸桿菌中提取純化得到硫氧還蛋白，并發(fā)現(xiàn)它參與到一系列的氧化還原途徑中。1995年，Gasdaska.PY［4］成功克隆出胞漿中的Trx1和線粒體中的Trx2。至此，一系列有關(guān)Trx的研究相繼展開(kāi)。近些年，人體內(nèi)癌細(xì)胞中Trx的含量，以及Trx1和Trx2在體內(nèi)參與的代謝途徑成為研究的熱點(diǎn)。

1 Trx的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)

Trx的分子量約是12×103，是由4個(gè)β折疊和3個(gè)α螺旋組成的球狀蛋白。4個(gè)β折疊構(gòu)成一個(gè)疏水核心，核心的終末端被3個(gè)α螺旋包繞。這種折疊結(jié)構(gòu)普遍存在于氧化還原蛋白家族中。Trx參與氧化還原反應(yīng)的重要活性位點(diǎn)是Cys-Gly-Pro-Cys，它相對(duì)來(lái)說(shuō)比較保守，可以與二硫鍵相互作用，還原被氧化的多種蛋白，而其自身從還原態(tài)（SH2 -）變成氧化態(tài)（S-），又可以通過(guò)TrxR的作用，恢復(fù)到還原態(tài)［5］。

目前Trx主要分為Trx1和Trx2兩種類型，Trx1位于細(xì)胞漿和細(xì)胞核中，包含105個(gè)氨基酸，而Trx2僅位于線粒體中，不同于Trx1，Trx2由166個(gè)氨基酸構(gòu)成，除了保守的還原結(jié)構(gòu)外，還包含了60個(gè)氨基酸組成的N末端延伸（圖1），這段引導(dǎo)序列對(duì)于Trx2存在于線粒體內(nèi)部起關(guān)鍵作用［6］。Trx1和Trx2由于存在的位置不同，所以他們介導(dǎo)的氧化還原途徑也有所不同。

圖1 Trx1和Trx2氨基酸序列示意圖Fig.1 The amino acid sequence of Trx1 and Trx2

2 Trx在凋亡途徑中的功能

2.1細(xì)胞凋亡

細(xì)胞凋亡是一種程序性壞死過(guò)程，它是體內(nèi)進(jìn)行正常新陳代謝時(shí)所必須的，正常情況下，體內(nèi)會(huì)根據(jù)機(jī)體自身的情況以及對(duì)外界的應(yīng)激情況做出相應(yīng)的調(diào)整，包括細(xì)胞的遷徙，增殖，分化和凋亡［7］。細(xì)胞凋亡整體分為兩大途徑，一是受體配體結(jié)合的外源途徑，一是線粒體參與的內(nèi)源途徑。外源途徑是通過(guò)死亡配體與相應(yīng)受體（主要是腫瘤壞死因子：tumor necrosis factor：TNF）結(jié)合，活化半胱天冬酶家族成員，致使細(xì)胞凋亡。內(nèi)源途徑則是通過(guò)線粒體為中心引發(fā)的凋亡途徑。當(dāng)外源途徑中的半胱氨酸天冬酶8（caspase8）活化后，會(huì)切割促凋亡因子Bid，促使促凋亡因子Bax從胞漿中轉(zhuǎn)移到線粒體的膜上，改變線粒體膜的通透性，釋放細(xì)胞色素C（cytc），最終導(dǎo)致細(xì)胞的凋亡［8-9］。

引發(fā)凋亡途徑的起始因子有很多，而其中最為重要的是TNF家族成員TNF-а和活性氧簇（reactive oxygen species：ROS），TNF-а也是引發(fā)ROS產(chǎn)生的重要途徑之一［10］，所以兩條途徑并不是獨(dú)立存在而是相互聯(lián)系相互調(diào)節(jié)的，內(nèi)源途徑對(duì)外源途徑起到級(jí)聯(lián)放大的作用［9.11］，兩條途徑中涉及的許多凋亡因子都與Trx有一定的相關(guān)性，研究他們之間的關(guān)系對(duì)于進(jìn)一步了解細(xì)胞凋亡有著重要的意義（圖3）。

2.2 Trx在凋亡途徑中的作用

2.2.1 Trx的抗氧化作用

在細(xì)胞凋亡的過(guò)程中，會(huì)產(chǎn)生引發(fā)凋亡的關(guān)鍵因子ROS，它會(huì)誘發(fā)凋亡途徑，致使細(xì)胞凋亡。這時(shí)體內(nèi)的還原系統(tǒng)Trx會(huì)直接清理ROS，起到抗氧化的作用［12］。

作為體內(nèi)的還原系統(tǒng)，Trx具有對(duì)抗自由氧基的功能，主要源于以下兩個(gè)因素，第一：它包含保守序列-Cys-Gly-Pro-Cys-，可以與巰基作用，還原已氧化蛋白的巰基基團(tuán)，自身形成二硫鍵，恢復(fù)蛋白的生理功能，維持細(xì)胞的生理活性，這段保守的氨基酸序列是Trx還原氧化物的關(guān)鍵活性位點(diǎn)。32位的半胱氨酸（C32）和35位的半胱氨酸（C35）對(duì)于Trx1的還原起重要作用，當(dāng)受到氧化作用時(shí)，C32和C35內(nèi)部會(huì)形成二硫鍵，這時(shí)Trx會(huì)暫時(shí)失去還原功能，再由硫氧還蛋白還原酶（thioredoxin reductase：TrxR）還原成本身的狀態(tài)［13］，參與體內(nèi)可逆的氧化還原反應(yīng)（圖2）。人體正常代謝會(huì)導(dǎo)致許多自由氧基的產(chǎn)生，一般情況下，體內(nèi)通過(guò)還原系統(tǒng)進(jìn)行清理，但如果電子傳遞的過(guò)程中出現(xiàn)電子鏈的斷裂，產(chǎn)生大量的ROS，體內(nèi)的還原系統(tǒng)不足以清除，就會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。清理ROS的功能，體現(xiàn)了Trx的抗氧化作用，而這種抗氧化作用也間接的抑制了由ROS介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。第二，Trx對(duì)于各種還原酶系統(tǒng)都有顯著的調(diào)節(jié)作用，例如超氧化物歧化酶（super oxidase dimutase：SOD），SOD對(duì)于治療因超氧離子引起的各種疾病均有一定的療效，Trx1可以上調(diào)SOD的mRNA，間接地活化SOD［10，14］（圖3），從而抵抗體內(nèi)的氧化反應(yīng)。又如谷胱甘肽還原系統(tǒng)，Trx是人體內(nèi)谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的電子供體，所以它的上調(diào)和下調(diào)都對(duì)谷胱甘肽系統(tǒng)有很大的調(diào)節(jié)作用［15-16］。所以Trx除了自身具有還原的作用外，對(duì)于其他的還原酶系統(tǒng)也起到了一定的上調(diào)作用，通過(guò)各種酶的相互協(xié)作，共同抵抗體內(nèi)的氧化反應(yīng)。

在Trx系統(tǒng)中，由于Trx2存在于線粒體內(nèi)部，而線粒體是進(jìn)行氧化呼吸的重要場(chǎng)所也是引發(fā)內(nèi)源途徑的發(fā)生場(chǎng)所，所以Trx2的抗氧化作用就顯的尤其的突出，從而對(duì)線粒體引發(fā)的凋亡有重要的調(diào)節(jié)作用［17］。在整個(gè)氧化磷酸化的過(guò)程中，會(huì)有0.4％-4％的氧被釋放到線粒體中，也就是ROS［10］。線粒體中包含三大復(fù)合體，Ⅰ和Ⅲ對(duì)于ROS的產(chǎn)生是必要的，但機(jī)制并不清楚，而Trx2對(duì)于呼吸鏈的復(fù)合體Ⅰ有抑制的作用，可以提高線粒體的膜電位，使活性氧逆轉(zhuǎn)線粒體膜電位產(chǎn)生困難，從而抑制細(xì)胞的凋亡［18］。事實(shí)上，ROS的產(chǎn)生途徑有很多，生理?xiàng)l件下的呼吸鏈以及病理?xiàng)l件下都會(huì)產(chǎn)生ROS。在病理?xiàng)l件下產(chǎn)生的ROS會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞的過(guò)度凋亡，致使疾病的發(fā)生，所以Trx表現(xiàn)出來(lái)的抗氧化作用對(duì)于維持體內(nèi)正常的生理?xiàng)l件是至關(guān)重要的。

圖2 Trx氧化還原過(guò)程Fig.2 The redox processes of Trx

2.2.2 Trx調(diào)節(jié)凋亡轉(zhuǎn)錄因子的作用

Trx除了可以起到抗氧化的作用外，還可以調(diào)節(jié)一些凋亡轉(zhuǎn)錄因子，例如轉(zhuǎn)錄因子NF-κB（nuclear factor-k-gene binding）和AP-1（activator protein-1）等［19］。

Trx對(duì)于NF-κB有一定的調(diào)節(jié)作用（圖3），NF-κB屬于Rel家族的轉(zhuǎn)錄因子，參與調(diào)節(jié)與機(jī)體免疫、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞分化有關(guān)的基因轉(zhuǎn)錄，進(jìn)一步對(duì)凋亡和腫瘤的發(fā)生進(jìn)行調(diào)節(jié)。在有氧化劑存在的情況下，NF-κB與DNA的連接會(huì)受到抑制，還原型的Trx可以抑制氧化劑，提高DNA和NF-κB的連接，活化NF-κB，并且這種還原作用比L-Cys和還原型的谷胱甘肽的作用更為強(qiáng)烈［17，20］。同時(shí)Trx可以通過(guò)c-Jun氨基末端激酶（Jun N-term inal Kinase：JNK）途徑調(diào)節(jié)NF-κB。但若過(guò)量的表達(dá)Trx2也會(huì)有效地抑制NF-κB的活性［11］。NF-κB的活化在炎癥誘發(fā)的腫瘤形成中發(fā)揮重要作用，同時(shí)發(fā)現(xiàn)NF-κB除了可以促進(jìn)細(xì)胞存活外也可發(fā)揮促凋亡的作用，抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展。由于NF-κB在腫瘤形成中存在兩方面的作用，因此了解Trx對(duì)NF-κB兩方面的調(diào)節(jié)機(jī)制，可以為腫瘤臨床治療提供理論依據(jù)［21-23］。

Trx還可以調(diào)節(jié)Ap-1，AP-1會(huì)對(duì)各種刺激如應(yīng)激、輻射或生長(zhǎng)信號(hào)等作出生理或病理應(yīng)答，同時(shí)參與細(xì)胞的增殖、分化和轉(zhuǎn)化等過(guò)程，在腫瘤的形成、轉(zhuǎn)移和侵襲中發(fā)揮重要作用，研究發(fā)現(xiàn)AP-1與腫瘤的轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，Trx可以通過(guò)JNK途徑調(diào)節(jié)Ap-1，提高AP-1的表達(dá)，從而促進(jìn)細(xì)胞的存活［24］。

2.2.3 Trx的抗凋亡作用

Trx對(duì)細(xì)胞的存活有重要的作用，若在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染Trx1SiRNA或Trx2SiRNA，都會(huì)造成細(xì)胞的凋亡。在凋亡過(guò)程中，凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1（apoptosis signal-regulating kinase：ASK1）參與了細(xì)胞的凋亡過(guò)程［12］。

ASK1是凋亡途徑中的重要的蛋白，C末端為調(diào)節(jié)性結(jié)構(gòu)域，此結(jié)構(gòu)域可以與調(diào)節(jié)TNF受體家族的成員因子（TNF receptor associated factor：TRAF）結(jié)合［25］，當(dāng)TNF與其受體結(jié)合之后，會(huì)募集接頭蛋白（TRAF2），TRFA2會(huì)連接ASK1和MEKK1［7］，使信號(hào)得到傳遞，TRAF對(duì)于ASK1結(jié)合活化促分裂素原活化蛋白激酶（m itogen-activated protein kinase：MAPKs）起重要作用。ASK1的N末端為功能性結(jié)構(gòu)域，有648個(gè)氨基酸組成，N末端對(duì)于MAPKs起到活化作用，MAPKs是ASK1可活化多種下游信號(hào)中最為重要的一個(gè)，許多內(nèi)源性的刺激，包括生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子和應(yīng)激反應(yīng)都會(huì)活化MAPKs的三級(jí)聯(lián)反應(yīng)，即MAP3K-MAP2K-MAPK，MAPKs家族的成員共有3個(gè)，其中應(yīng)激激活的蛋白激酶p38 （p38MAPKs），c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-term inal kinase：JNK），胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（extracellular signal-reg-ulated kinase：ERK）是細(xì)胞凋亡的重要信號(hào)途徑，參與不同的應(yīng)激反應(yīng)。在ASK1缺失的細(xì)胞中，可以抵抗TNF和ROS誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡［26］，說(shuō)明ASK1在細(xì)胞凋亡途徑起著中間樞紐的作用。ASK1可以通過(guò)絲裂原活化蛋白激酶MKK4/絲裂原活化蛋白激酶MKK7活化p38MAPKs，也可以通過(guò)絲裂原活化蛋白激酶MKK3/絲裂原活化蛋白激酶MKK6途徑活化p38［27］。體內(nèi)存在許多的抑制因子可以抑制ASK1介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，在哺乳動(dòng)物中，Trx則是ASK1的直接抑制劑［28］，而Trx/ASK1-MAPKs也成為引發(fā)細(xì)胞凋亡的經(jīng)典途徑［29］。

Trx一般會(huì)與ASK1的N末端相連，在體內(nèi)抑制ASK1的活性，同時(shí)也就抑制了ASK1下游的MAPKs家族的活性，但當(dāng)機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生某種氧化劑的時(shí)候，例如：TNF-а，氧化應(yīng)激導(dǎo)致的ROS的產(chǎn)生等，就會(huì)阻斷Trx-ASK1復(fù)合體的連接，氧化Trx（使C32和C35之間形成分子內(nèi)的二硫鍵），釋放ASK1（圖2），在TRAF2的作用下活化下游的MAPKs家族成員，啟動(dòng)凋亡程序，調(diào)節(jié)MAPKs的TRAF2必須在Trx和ASK1分離之后，才會(huì)與ASK1結(jié)合［30］，啟動(dòng)下游MAPKs的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，所以Trx對(duì)于ASK1引發(fā)的凋亡途徑起到了重要的調(diào)節(jié)作用。

Trx，由于存在的位置不同，導(dǎo)致抑制凋亡的途徑也不同。Trx1主要抑制外源途徑的凋亡，Trx2則阻止內(nèi)源途徑的凋亡。已經(jīng)證實(shí)ASK1即存在于胞漿中，又存在于線粒體中，Trx1和Trx2分別抑制胞漿和線粒體內(nèi)的ASK1，以阻斷不同途徑的細(xì)胞凋亡。但胞漿和線粒體中的ASK1啟動(dòng)的凋亡途徑并不相同，在TNF誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中，若在細(xì)胞中加入JNK的抑制劑，則可以完全的抑制TNF誘導(dǎo)的JNK途徑以及Bid的切割和Bax的轉(zhuǎn)位，但在存在JNK抑制劑的線粒體中發(fā)現(xiàn)ASK1大量的活化，而且cytc的釋放也沒(méi)有完全被阻斷，說(shuō)明胞漿中的ASK1介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡包含了JNK途徑，但在線粒體中ASK1并沒(méi)有通過(guò)JNK途徑致使細(xì)胞凋亡［31］，但也有一些學(xué)者認(rèn)為JNK對(duì)于cytc的釋放必不可少，他們認(rèn)為JNK可以使Bcl-2磷酸化，改變線粒體的膜電位同時(shí)改變線粒體膜的通透性，釋放cytc，啟動(dòng)cytc介導(dǎo)的凋亡途徑，JNK對(duì)于線粒體誘發(fā)的細(xì)胞凋亡起到信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用［7，32］。綜合以上兩種說(shuō)法可以推測(cè)TNF促使了Trx1/ASK1的分離，導(dǎo)致ASK1活化了JNK途徑，進(jìn)而JNK在外源途徑切割Bid，活化Bax，以促進(jìn)內(nèi)源途徑的凋亡。而內(nèi)源途徑中ROS引發(fā)的Trx2/ASK1引起的凋亡也是細(xì)胞損傷的重要途徑［33］，雖然這條途徑并沒(méi)有完全被了解清楚，但是可以確定Trx2對(duì)于ROS起到清理作用，同時(shí)抑制線粒體中的ASK1，對(duì)線粒體介導(dǎo)的凋亡途徑起到一定的抑制作用。Trx1和Trx2都是通過(guò)錨定凋亡信號(hào)分子，從而抑制細(xì)胞的凋亡（圖3）。

由于線粒體膜的通透性與Bcl-2家族的成員有密切的關(guān)系，所以在研究細(xì)胞凋亡時(shí)，Bcl-2家族成員也常常成為研究焦點(diǎn)。在研究肺缺血再灌注損傷時(shí)，發(fā)現(xiàn)Trx干預(yù)組的Bax和ASK1表達(dá)顯著下降，說(shuō)明Trx可以對(duì)Bax起到抑制的作用，阻止了Bax對(duì)于線粒體膜通透性的改變，抑制細(xì)胞的凋亡［34］。

圖3 Trx與凋亡相關(guān)因子之間的關(guān)系Fig.3 Trx relate to apoptotic factors

3 Trx與疾病

許多疾病的產(chǎn)生都是由于凋亡途徑受損而引起的，而Trx廣泛表達(dá)在各種細(xì)胞中，在凋亡途徑中也起到了上游調(diào)控調(diào)因子的作用，因此在與凋亡引起的相關(guān)疾病中起著重要的調(diào)控作用。而由于Trx具有生長(zhǎng)因子，抗凋亡，抗氧化的作用，因此許多腫瘤細(xì)胞中Trx的含量都會(huì)高于正常細(xì)胞，其中包括肺癌細(xì)胞，結(jié)腸癌細(xì)胞，胰腺癌細(xì)胞，乳腺癌細(xì)胞，胃癌細(xì)胞等。所以利用Trx在凋亡途徑中的重要作用來(lái)治療疾病也成了現(xiàn)在的研究熱點(diǎn)。

Trx參與到許多的肺部疾病中，Trx-ASK1-JNK在吸煙引起的細(xì)胞凋亡中經(jīng)常見(jiàn)到，Lee YC［31］等人發(fā)現(xiàn)吸煙會(huì)導(dǎo)致大量的ROS產(chǎn)生，而Trx的高表達(dá)可以抑制JNK的表達(dá)從而減少細(xì)胞的凋亡；同時(shí)Sato A［36］等人發(fā)現(xiàn)提高Trx1可以改善吸煙引起的肺部炎癥；在臨床實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)如果提高Trx的表達(dá)可以保護(hù)肺部組織免受損傷，暗示著未來(lái)Trx可能作為關(guān)鍵因素來(lái)治療肺部疾?。?7］。

某些病毒的作用機(jī)制包含了Trx-ASK1-MAPKs這條途徑，Yang TC發(fā)現(xiàn)日本腦炎病毒又稱為乙型腦炎病毒進(jìn)入體內(nèi)，引起氧化應(yīng)激的發(fā)生，Trx的含量下降，ASK1-MAPKs途徑啟動(dòng)，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡引發(fā)神經(jīng)性的疾?。?8］。

同樣，許多藥物的作用機(jī)制也包含Trx-ASK1-MAPKs途徑，Lim PLK在研究曲格列酮的副作用時(shí)，發(fā)現(xiàn)曲格列酮破壞了電子傳遞鏈，導(dǎo)致線粒體內(nèi)產(chǎn)生ROS，Trx2被氧化，從而引發(fā)ASK1-JNK途徑，最終引起肝損傷［33］。YH Ma［39］等人發(fā)現(xiàn)，人重組的Trx1對(duì)腦缺血有治療作用，由于腦缺血會(huì)導(dǎo)致ONOO-引起的氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡，而人重組的Trx1可稀釋ONOO-并抵抗氧化/氮化引起的細(xì)胞凋亡。

4 展望

由于Trx在許多腫瘤細(xì)胞中的含量都比正常的細(xì)胞高，而且在凋亡途徑中又起著至關(guān)重要的作用，所以透徹的了解Trx在凋亡途徑中的作用機(jī)制，可對(duì)預(yù)防和治療疾病開(kāi)辟一條新的道路，相信Trx將成為腫瘤治療中有前景的又一靶點(diǎn)分子。

［1］Moore EC，Reichard P.Enzymatic synthesis of deoxyribonucleotides VI.Isolation and characterization of thioredoxin，the hydrogen donor from Escherichia coli B［J］.J.Biol.Chem.，1964，239：3453-3456.

［2］Moore EC，Reichard P.A thioredoxin-thioredoxin reductase system from rat tumor［J］.Biochem.Biophys.Res.Commun.，1967，29（3）：264-8.

［3］Pigiets PV，Conley RR.Purification of Thioredoxin，Thioredoxin Reductase，and Glutathione Reductase by Affinity Chromatography［J］.The Journal of Biological Chemistry.1977，252（18）：6367-6372.

［4］Gasdaska PY，Gasdaska JR，Cochran S，et al.Cloning and sequencing of human thioredoxin reductase［J］.FEBS Lett.，1995，373（1）：5-9.

［5］Holmgren A.Thioredoxin structure and mechanism：conformational changes on oxidation of the active-site sulfhydryls to a disulfide［J］.Structure，1995，3：239-243.

［6］Powis G，Montfort WR.Properties and biological activities of thioredoxins［J］.Annu Rev Pharmacol Toxicol.2001，41：261-95.

［7］Davis RJ.Signal transduction by the JNK group of MAP kinases［J］.Cell，2000，103（2）：239-252.

［8］Hatai T，Matsuzawa A，Inoshita S，et al.Execution of apoptosis signal-regulating kinase1（ASK1）induced apoptosis by the mitochondria-de-pendent caspase activation［J］.Biol Chem，2000，275（34）：26576-26581.

［9］Fulda，S.Betulinic acid：a natural product with anticancer activity［J］.Mol Nutr Food Res，2009，53（1）：140-146.

［10］Nonn L，W illiams RR，Erickson RP，et al.The absence of mitochondrial thioredoxin 2 causes massive apoptosis，exencephaly，and early embryonic lethality in homozygous mice［J］.Mol Cell Biol，2003，23（3）：916-922.

［11］Hansen JM，Zhang H，Jones DP.Mitochondrial thioredoxin-2 has a key role in determining tumor necrosis factor-alpha-induced reactive oxygen species generation，NF-kappa B activation，and apoptosis［J］.Toxicol Sci，2006，91（2）：643-650.

［12］Yang L，Wu D，Wang X，et al.Depletion of cytosolic or mitochondrial thioredoxin increases CYP2E1-induced oxidative stress via an ASK-1-JNK1 pathway in HepG2 cells［J］.Free Radic Biol Med.2011，51（1）：185-196.

［13］Holmgren A，Lu J.Thioredoxin and thioredoxin reductase：Current research with special reference to human disease［J］.Biochem.Biophys.Res.Commun.，2010，396（1）：120-124.

［14］Das KC，Lewis-MY，White，CW.Elevation of manganese superoxide dismutase gene expression by thioredoxin［J］.Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.，1997，17（6）：713-726.

［15］Bjornstedt M，Xue J，Huang W，et al.The thioredoxin and glutaredoxin systems are efficient electron donors to human plasma glutathione peroxidase［J］.Biol.Chem.，1994，269：29382-29384.

［16］Maulik N，Das DK.Emerging potential of thioredoxin and thioredoxin interacting proteins in various disease conditions［J］.Biochim Biophys Acta，2008，1780（11）：1368-1382.

［17］Circu ML，Aw TY.Reactive oxygen species，cellular redox systems and apoptosis［J］.Free Radic Biol Med.2010，48（6）：749-762.

［18］Chen Q，Vazquez EJ，Moghaddas S，et al.Production of reactive oxygen species by mitochondria：central role of complex III［J］.Biol Chem，2003，278（38）：36027-36031.

［19］Powis G，Mustacich D，Coon A.The role of the redox protein thioredoxin in cell growth and cancer［J］.Free Radic.Biol.Med.，2000（3-4），29：312-322.

［20］Heilman JM，Burke TJ，McClain CJ，et al.Transactivation of gene expression by NF -κB is dependent on thioredoxin reductase activity［J］.Free Radical Biol.Med.，2011，51（8）：1533-1542.

［21］Zhang LQ，Blackwell K ，Altaeva A，et al.TRAF2 phosphorylation promotes NF-κB-dependent gene expression and inhibits oxidative stress-induced cell death［J］.Mol Biol Cell，2011，22（1）：128-140.

［22］Das KC.c-Jun NH2-terminal kinase-mediated redoxdependent degradation of IkappaB：role of thioredoxin in NF-kappaB activation［J］.JBiol Chem，2001，276（7）：4662-4670.

［23］Deng YB，Ren XY，Yang L，et al.A JNK-Dependent Pathway Is Required for TNFа-Induced Apoptosis［J］.Cell Press，2003，115（1）：61-70.

［24］Das KC，Muniyappa H.c-Jun-NH2 terminal kinase（JNK）-mediates AP-1 activation by thioredoxin：phosphorylation of cJun，JunB，and Fra-1［J］.Mol Cell Biochem，2010，337（1 -2）：53-63.

［25］Liu H，Nishitoh H，Ichijo H，et al.Activation of Apoptosis Signal-Regulating Kinase 1（ASK1）by Tumor Necrosis Factor Receptor-Associated Factor 2 Requires Prior Dissociation of the ASK1 Inhibitor Thioredoxin［J］.Mol.Cell.Biochem.，2000，20（6）：2198-2208.

［26］Tobiume K，Matsuzawa A，Takahashi T，et al.ASK1 is required for sustained activations of JNK/p38 MAP kinases and apoptosis.EMBO Rep，2001，2（3）：222-228.

［27］Nagai H，Noguchi T，Takeda K，et al.Pathophysiological Roles of ASK1-MAP Kinase Signaling Pathways［J］.Biochem.Mol.Biol.，2007，40（1）：1-6.

［28］Saitoh M，Nishitoh H，Makiko Fujii M，et al.Mammalian thioredoxin is a direct inhibitor of apoptosis signal-regulating kinase（ASK）1［J］.EMBO J，1998，17（9）：2596-2606.

［29］Wu DF，Cederbaum A.Activation of ASK-1 and downstream MAP kinases in cytochrome P4502E1 potentiated tumor necrosis factorαliver injury［J］.Free Radical Biol.Med.，2010，49 （3）：348-360.

［30］Jun Matsukawa，Matsuzawa A，Takeda K.The ASK1-MAP Kinase Cascades in Mammalian Stress Response［J］.Biochem.2004，136（3）：261-265.

［31］Zhang R，Lamki RA，Bai LF，et al.Thioredoxin-2 Inhibits Mitochondria-Located ASK1-Mediated Apoptosis in a JNKIndependent Manner［J］.Circ Res.2004，94：1483-1491.

［32］Tournier C，Hess P，Yang DD，et al.Requirement of JNK for Stress-Induced Activation of the Cytochrome c-Mediated Death Pathway［J］.Science，2000，288（5467）：870-874.

［33］Lim PLK，Liu JC，Go ML，et al.The Mitochondrial Superoxide/ Thioredoxin-2/Ask1 Signaling Pathway is Critically Involved in Troglitazone-Induced Cell Injury to Human Hepatocytes［J］.Toxicol.Sci.，2008，101（2），341-349.

［34］Damdimopoulos AE，Vizuete AM，Huikko MP，et al.Human Mitochondrial Thioredoxin［J］.J.Biol.Chem，2002，277 （36）：33249-33257.

［35］Lee YC，Chuang CY，Lee PK，et al.TRX-ASK1-JNK signaling regulation of cell density-dependent cytotoxicity in cigarette smoke-exposed human bronchial epithelial cells［J］.Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol，2008，294（5）：921-931.

［36］Sato A，Hoshino Y，Hara T，et al.Thioredoxin-1 Ameliorates Cigarette Smoke-Induced Lung Inflammation and Emphysema in Mice［J］.J.Pharmacol.Exp.Ther.，2008，325（2）：380 -388.

［37］Xu J，Li TP，Wu HQ，et al.Role of thioredoxin in lung disease.Pulm Pharmacol Ther.2012，25（2）：154-162.

［38］Yang TC，Lai CC，Shiu SL et al.Japanese encephalitis virus down-regulates thioredoxin and induces ROS-mediated ASK1-ERK/p38 MAPK activation in human promonocyte cells［J］.Microbes Infect.，2010，12（8-9）：643-651.

［39］Ma YH，Su N，Chao XD et al.Thioredoxin-1 attenuates postischemic neuronal apoptosis via reducing oxidative/nitrative stress［J］.Neurochem.Int.，2012，60（5）：475-483.