HPLC法同時測定小建中湯中肉桂酸和桂皮醛的含量

陳海清

(郯城縣第一人民醫(yī)院，山東郯城276100)

小建中湯來源于漢代《傷寒論》，由桂枝、白芍、甘草(蜜炙)、生姜和大棗五味中藥組成，具有溫中補虛、和里緩急之功效［1］。其中桂枝中所含主要成分桂皮醛及肉桂酸具有抗癌及抗?jié)?、加強胃、腸道運動等作用［2］。小建中合劑收載與《中國藥典》2010年版(一部)，原標準中并無肉桂酸及桂皮醛的含量測定方法，本文采用HPLC法同時測定小建中湯中肉桂酸及桂皮醛的含量，為該制劑的質(zhì)量控制提供有效的方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent1100高效液相色譜儀;SB3200型超聲波清洗儀;XS205型微量分析天平。

1.2 試藥 肉桂酸及桂皮醛對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號分別為 110786－200503與 110710－200513);乙腈(迪馬，色譜純);甲醇(山東禹王，色譜純)，其他試劑均為分析純，水為娃哈哈純凈水，小建中湯為本院實驗室自制(批號110912、110913、110914)。各味藥材為本院自購。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱Phenomenex ODS3柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流動相:乙腈－0.1%的磷酸水溶液(35∶65);流速:1.0 mL·min－1;柱溫:30℃;檢測波長:280 nm;進樣量: 10 μL。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取肉桂酸、桂皮醛對照品各適量，分別置于10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，配制成單組分對照品溶液，其中肉桂酸濃度為1.0 mg· mL－1、桂皮醛濃度為2.0 mg·mL－1。分別精密量取上述肉桂酸對照品溶液1.0 mL，桂皮醛對照品溶液0.5 mL，置同一10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為混合對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 按處方準確稱取白芍9 g，生姜4.5 g，桂枝4.5 g，炙甘草3.0 g，大棗4.5 g(去核)，置于250 mL圓底燒瓶中，乙醇濃度為80%，加入6倍量溶劑，浸泡30 min，加熱回流0.5 h，過濾，重復(fù)提取2次，合并濾液置干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干得浸膏，用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至離心管中，超聲振蕩15 min，離心10 min，上清液移至100 mL量瓶中，再以甲醇洗滌殘渣，合并洗液入量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，取1 mL至100 mL量瓶中，甲醇定容至刻度，用0.45μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液在上述色譜條件下進樣，外標法計算含量。

陰性對照液的制備:按小建中湯處方比例精密稱取全方中除桂枝外的其他藥材，按“供試品溶液的制備”條件制備成陰性溶液。

2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗 取供試品溶液，在“2.1”色譜條件下進樣分析，理論塔板數(shù)按肉桂酸計算不低于5 000，按桂皮醛計算不低于3 000。各色譜峰與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5。拖尾因子均在0.95～1.05之間。

圖1 系統(tǒng)性試驗譜圖

2.5 標準曲線的制備 分別稱取肉桂酸和桂皮醛對照品適量，精密稱定，分別置于10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，配制成單組分對照品溶液，其中含肉桂酸1.0 mg ·mL－1、桂皮醛2.0 mg·mL－1。精密量取各單組分對照品儲備液適量，置2 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成系列濃度的混合對照品溶液，分別進樣10 μL，記錄色譜圖。以各色譜峰的峰面積A為縱坐標，質(zhì)量濃度C(μg ·mL－1)為橫坐標，繪制標準工作曲線。肉桂酸和桂皮醛分別在2.0～50.0 μg·mL－1與2.0～25.0 μg·mL－1范圍內(nèi)峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。所得回歸方程分別為:

肉桂酸回歸方程為A=79.84×102C－5.317，r=0.999 9;

桂皮醛回歸方程為A=82.74C+4.15，r=0.999 4。

2.6 精密度試驗 精密吸取肉桂酸和桂皮醛對照溶液10 μL，分別進樣6次，以“2.1”色譜條件測定，以峰面積計算，測定肉桂酸和桂皮醛的RSD分別為0.7%、1.1%，表明儀器的精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗 取同一批號樣品6份，按“2.3”項下的方法制得供試液，以“2.1”色譜條件進行測定，樣品中肉桂酸和桂皮醛含量的RSD分別為0.5%、0.9%。

2.8 穩(wěn)定性試驗 精密吸取供試品溶液，分別在0，1，2，4， 8，12，24 h測定，肉桂酸和桂皮醛的 RSD分別為0.6%、0.8%。表明樣品在24 h內(nèi)的穩(wěn)定性良好。

2.9 加樣回收率實驗 取已知含量的同一批(批號: 110912)小建中湯樣品9份，分別按其處方1/10比例稱取藥材，精密稱定，按照低、中、高濃度精密加入一定量對照品溶液，制成加標樣品各3份，按“2.3”項下方法處理，進樣10 μL分析測定，肉桂酸和桂皮醛平均回收率分別為99.8%，RSD =0.7%(n=9);101.0%，RSD=1.1%(n=9)結(jié)果見表1。

表1 回收率實驗

2.10 樣品測定 取不同批號的自制樣品3批，按“2.3”項下制得供試品溶液。分別吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL，依次注入液相色譜儀，按“2.1”色譜條件測定，計算肉桂酸和桂皮醛含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品測定結(jié)果(n=3)

3 討論

方法學研究表明，采用HPLC法對處方中桂枝的有效成分肉桂酸和桂皮醛進行含量測定，方法簡便、靈敏、準確，重復(fù)性好，能有效地控制該品種的質(zhì)量并彌補了質(zhì)量控制方面信息的不足。

［1］ 許濟群.方劑學［M］.上海:上?？茖W技術(shù)出版社，1994:80.

［2］ 張榮發(fā).桂皮醛的藥理作用研究進展［J］.中國藥業(yè)，2008，17(10):75－76.