柴胡皂苷D對(duì)老年膜性腎炎大鼠模型的治療作用

王 虹 敖弟書 張勝志 (遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腎內(nèi)科，貴州 遵義 563000)

柴胡皂苷D對(duì)老年膜性腎炎大鼠模型的治療作用

王 虹 敖弟書1張勝志 (遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腎內(nèi)科，貴州 遵義 563000)

目的 觀察柴胡有效成分柴胡皂苷D對(duì)老年膜性腎炎大鼠模型的治療作用。方法 通過(guò)尾靜脈注射兔抗鼠血清建立大鼠被動(dòng)型Heymann腎炎模型，連續(xù)腹腔注射柴胡皂苷D 30 d，觀察柴胡皂苷D對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物尿蛋白和血清總蛋白、白蛋白、肌酐、尿素氮等生化指標(biāo)的影響。結(jié)果 柴胡皂苷D可以降低被動(dòng)型Heymann腎炎大鼠模型的尿蛋白，并對(duì)其生化指標(biāo)具有改善作用。結(jié)論 柴胡皂苷D對(duì)老年常見(jiàn)腎小球腎炎(膜性腎炎)大鼠模型(被動(dòng)型Heymann腎炎模型)的腎功能具有改善作用。

柴胡皂苷D;膜性腎病;被動(dòng)型Heymann腎炎模型

在原發(fā)性老年腎小球腎炎患者中膜性腎炎最為常見(jiàn)〔1〕。目前體外動(dòng)物研究均采用Heymann腎炎模型〔2〕。柴胡皂苷D為中藥材柴胡的有效成分之一，文獻(xiàn)報(bào)道該成分對(duì)膜性腎炎具有治療作用〔3，4〕。本文通過(guò)建立大鼠被動(dòng)型 Heymann腎炎模型(PHN)，觀察柴胡皂苷D對(duì)老年膜性腎病的治療作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物 柴胡皂苷D購(gòu)自南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司;弗氏完全佐劑購(gòu)自Sigma公司;其他相關(guān)生物檢測(cè)試劑及試劑盒均購(gòu)自德賽診斷系統(tǒng)(上海)有限公司。

1.1.2 動(dòng)物 純種新西蘭白兔，雄性，體重(2.5±0.2)kg;20月齡雄性SD大鼠，200～250 g，普通級(jí)，均由遵義醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 方法

1.2.1 兔抗鼠FX1A血清的制備 按照文獻(xiàn)方法〔5〕，提取SD大鼠近曲小管刷狀緣抗原(FX1A)，每10mg FX1A用0.1m l弗氏完全佐劑乳化。取雄性純種新西蘭白兔4只，皮下多點(diǎn)注射FX1A乳劑，每只1 m l，2次/w，3 w后取兔血制成兔抗鼠FX1A血清，低溫冰箱冷凍備用。

1.2.2 大鼠PHN腎炎模型的復(fù)制及分組 收集所有SD大鼠24 h尿樣，用尿液分析儀檢測(cè)尿蛋白，篩選尿蛋白指標(biāo)正常的SD大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。隨機(jī)選擇其中15只作為正常對(duì)照組，其余按10 ml/kg劑量尾靜脈注射兔抗鼠FX1A血清，正常對(duì)照組注射生理鹽水。造模10 d后，動(dòng)物出現(xiàn)蛋白尿、體重減少等情況，收集24 h尿液，測(cè)定尿蛋白，尿蛋白含量大于50 mg/24 h的大鼠為造模成功。將造模成功的大鼠隨機(jī)分為4組(每組15只):模型對(duì)照組、柴胡皂苷D低、中、高劑量組，并按10 m l·kg－1·d－1腹腔注射給藥，低、中、高劑量柴胡皂苷組給予 1、2、3 mg/kg柴胡皂苷D，正常對(duì)照組、模型對(duì)照組分別腹腔注射相同量的生理鹽水，連續(xù)注射30 d。

1.2.3 觀察指標(biāo) (1)24 h尿蛋白量:分別于造模前、造模后、給藥后第10、20、30天收集各組動(dòng)物24 h尿液，檢測(cè)尿蛋白量。(2)血清生化指標(biāo):實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，處死所有SD大鼠，分別取血檢測(cè)血清總蛋白、白蛋白、肌酐、尿素氮水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 柴胡皂苷D對(duì)PHN大鼠尿蛋白的影響 模型對(duì)照組與正常對(duì)照組相比，24 h排出的尿蛋白總量持續(xù)升高(P＜0.01);柴胡皂苷D低、中、高劑量組與模型對(duì)照組相比，給藥后10～30 d，對(duì)24 h排出尿蛋白總量均有不同程度的抑制作用(P＜0.05)。結(jié)果表明柴胡皂苷D可以降低PHN大鼠尿蛋白的排泄量。見(jiàn)表1。

2.2 柴胡皂苷D對(duì)PHN大鼠血清生化指標(biāo)的影響 給藥后30 d，模型對(duì)照組PHN動(dòng)物血清總蛋白、白蛋白含量均明顯低于正常對(duì)照組(P＜0.05);柴胡皂苷D低、中、高劑量組對(duì)血清總蛋白、白蛋白的比值均有不同程度的升高作用(P＜0.05)，其中，中、高劑量組作用較為明顯。低、中、高劑量組PHN大鼠血清肌酐、尿素氮含量均有顯著降低作用(P＜0.05)。結(jié)果表明，柴胡皂苷D對(duì)PHN大鼠血清指標(biāo)具有顯著改善作用，并且對(duì)腎功能具有保護(hù)作用。見(jiàn)表2。

表1 柴胡皂苷D對(duì)PHN大鼠24 h尿蛋白的影響(±s，n=15，mg/24 h)

表1 柴胡皂苷D對(duì)PHN大鼠24 h尿蛋白的影響(±s，n=15，mg/24 h)

與正常對(duì)照組比較:1)P＜0.01;與模型對(duì)照組比較:2)P＜0.05;下表同

組別 劑量(mg/kg) 造模前 造模后(給藥前) 給藥后第10天 給藥后第20天 給藥后第30天正常對(duì)照組6.8±1.2 7.0±1.4 6.9±1.2 6.9±1.3 7.1±1.6模型對(duì)照組 － 6.4±2.3 56.4±6.31) 72.3±8.31) 89.1±8.21) 103.8±7.61)低劑量組 1.0 7.2±1.5 58.3±7.22) 61.5±5.82) 52.8±5.12) 38.4±2.92)中劑量組 2.0 6.9±2.1 54.9±4.22) 46.2±4.22) 38.8±3.62) 28.2±2.12)高劑量組 3.0 6.7±1.8 56.3±5.12) 42.2±4.82) 32.8±3.32) 25.7±1.92)－

表2 柴胡皂苷D給藥30 d后對(duì)PHN大鼠血清生化指標(biāo)的影響(±s，n=15)

表2 柴胡皂苷D給藥30 d后對(duì)PHN大鼠血清生化指標(biāo)的影響(±s，n=15)

組別 總蛋白(g/L)白蛋白(g/L)肌酐(μmol/L)尿素氮(mmol/L)正常對(duì)照組74.6±4.7 35.2±2.1 25.4±3.1 3.9±2.6模型對(duì)照組 63.2±4.81) 24.5±1.91) 61.6±5.31) 6.2±4.71)低劑量組 66.4±3.12) 28.3±2.72) 51.2±4.62) 5.3±4.32)中劑量組 72.7±3.52) 33.2±3.22) 37.2±4.12) 4.9±3.72)高劑量組 73.9±4.42) 32.9±2.32) 29.6±3.72) 4.2±3.22)

3 討論

柴胡為傘形科植物柴胡的干燥根，已有數(shù)千年應(yīng)用歷史，具有疏散退熱、舒肝利膽、開(kāi)發(fā)清陽(yáng)之功效，為中醫(yī)常用藥材。其主要藥理成分為柴胡皂苷，其中以柴胡皂苷A、C、D含量較高〔6〕，其中柴胡皂苷D被認(rèn)為對(duì)膜性腎炎具有治療作用〔3〕。目前公認(rèn)的膜性腎炎的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ陀蒆eymann于1959年首次報(bào)道，該模型可以分為主動(dòng)型與被動(dòng)型〔2〕。其中大鼠PHN是經(jīng)典的實(shí)驗(yàn)性自身免疫復(fù)合物性腎炎模型，病變特征類似人類膜性腎小球腎炎〔7〕，而膜性腎小球腎炎正是老年腎炎的最常見(jiàn)類型。

膜性腎病由于腎小球?yàn)V過(guò)膜屏障受損，引起尿蛋白含量增高，導(dǎo)致血清中白蛋白經(jīng)腎臟不斷被排泄出體外，使體內(nèi)血清總蛋白、白蛋白含量嚴(yán)重下降，大多數(shù)以腎病綜合征起病，僅有2%表現(xiàn)為無(wú)癥狀非腎病范圍的蛋白尿。伴有腎功能損害時(shí)，依賴腎代謝的肌酐、尿素氮在體內(nèi)蓄積量增加。

一些研究表明，柴胡皂苷D具有一定的抗炎作用，其對(duì)PHN大鼠的治療機(jī)制可能是通過(guò)抗炎作用改變腎小球毛細(xì)血管通透性，從而減輕尿蛋白排泄量;此外，柴胡皂苷D還可能通過(guò)抑制抗體的生成、提高腎皮質(zhì)超氧化物歧化酶(SOD)活性等方面，發(fā)揮其治療作用〔4〕。

本文研究結(jié)果表明，柴胡皂苷D可以顯著降低PHN的尿蛋白量;同時(shí)抑制模型動(dòng)物血清總蛋白、白蛋白降低及尿素氮、肌酐水平升高，從而改善腎臟功能。

1 于 光，于建平，許 靜，等.60歲及以上老年人腎活檢臨床病理分析〔J〕.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2006;27(12):1381-3.

2 肖智勇，周文霞，張永祥，等.腎小球腎炎動(dòng)物模型及其在新藥評(píng)價(jià)中的應(yīng)用〔J〕.中國(guó)新藥雜志，2005;14(1):14-8.

3 梁 云，崔若蘭.柴胡皂甙-d治療抗腎小球基膜型腎炎的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，1999;20(7):416-9.

4 徐安平，崔若蘭.柴胡皂甙d對(duì)實(shí)驗(yàn)性膜性腎炎療效及作用機(jī)理研究〔J〕.腎臟病與透析腎移植雜志，1995;4(3):215-7.

5 廖雪珍，周玖瑤，李 銳，等.腎復(fù)康對(duì)大鼠被動(dòng)型Heymann腎炎的治療作用研究〔J〕.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2001;7(3):35-8.

6 王 皓，劉亞?wèn)|，石 卓.復(fù)方康腎片對(duì)老年大鼠 Heymann腎小球腎炎動(dòng)物模型的影響〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志，2009;29(8):948-9.

7 譚玲玲，蔡 霞，胡正海.柴胡和狹葉柴胡營(yíng)養(yǎng)器官結(jié)構(gòu)及其化學(xué)成分比較研究〔J〕.中草藥，2010;41(8):1380-3.

R28

A

1005-9202(2012)16-3482-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.16.063

1 遵義醫(yī)學(xué)院微生物教研室

敖弟書(1978-)，女，副教授，主要從事抗感染免疫學(xué)研究。

王 虹 (1979-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事慢性腎臟病的發(fā)病機(jī)制及臨床治療研究。

〔2012-01-24收稿 2012-03-02修回〕

(編輯 袁左鳴)