侗族傳統(tǒng)抗風濕藥對大鼠佐劑性關節(jié)炎的治療作用＊

楊 艷，陳光勇，劉光明

（1.云南省大理州人民醫(yī)院，云南 大理 671000；2.大理學院藥學院，云南 大理 671000）

侗族傳統(tǒng)抗風濕藥對大鼠佐劑性關節(jié)炎的治療作用＊

楊 艷1，陳光勇2△，劉光明2

（1.云南省大理州人民醫(yī)院，云南 大理 671000；2.大理學院藥學院，云南 大理 671000）

目的：研究了侗族傳統(tǒng)抗風濕藥對佐劑性關節(jié)炎（adjuvant arthritis，AA）大鼠的治療作用。方法：采用大鼠足跖皮內注射弗氏完全佐劑誘發(fā)大鼠AA模型。足容積法測量繼發(fā)側足腫脹度，進行疼痛評分和多發(fā)性關節(jié)炎評分。結果：侗族傳統(tǒng)抗風濕藥2000 mg·kg－1·d－1劑量組于第14 d開始不同程度降低AA大鼠繼發(fā)側足腫脹度、關節(jié)疼痛評分、多發(fā)性關節(jié)炎指數(shù)（P＜0.05）。結論：侗族傳統(tǒng)抗風濕藥對佐劑性關節(jié)炎大鼠有明顯的抗炎治療作用。

侗族傳統(tǒng)抗風濕藥；佐劑性關節(jié)炎大鼠；弗氏完全佐劑；抗炎

類風濕性關節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種慢性自身免疫性疾病，嚴重危害著人類的身體健康。開發(fā)標本兼治、安全有效、毒副作用較小的天然藥物有著重要的實際價值。佐劑性關節(jié)炎（adjuvant arthritis，AA）大鼠模型是評價防治RA藥物的常用動物模型之一［1～2］。本研究觀察了侗族傳統(tǒng)抗風濕藥浸膏對AA大鼠繼發(fā)側關節(jié)腫脹度、關節(jié)疼痛評分的影響、多發(fā)性關節(jié)炎指數(shù)的影響，旨在為開發(fā)治療RA的有效藥物提供實驗依據(jù)和理論基礎。

1 材料和方法

1.1 實驗動物 健康SD大鼠（SPF級）60只（5～6月齡），雌雄各半，質量（160～180）g，云南白藥集團天然藥物研究院提供，合格證號：滇實動證字第2001039號。動物保護、使用和所有程序都按照動物倫理委員會的要求操作。動物于實驗前適應環(huán)境3天，自由攝食和飲水，自然光照，控制室溫（20±2）℃。

1.2 藥物與試劑 X浸膏（6種侗族傳統(tǒng)用藥配伍藥材20 kg，用20倍體積75% 乙醇室溫浸泡48 h，共3次，于45℃旋轉蒸發(fā)儀中回收乙醇而得的棕色半流動狀物2 kg，由大理學院藥學院提供）；卡介苗（上海生物制品研究所，批號200404001）；尼美舒利（天津藥物研究院藥業(yè)公司，批號040407）。

1.3 儀器足容積測量儀 自制。

1.4 方法

1.4.1 動物分組和模型制備 SD大鼠隨機分為6組，正常對照組、模型組、模型組＋X浸膏（高、中、低劑量）組、模型組＋ 尼美舒利組（陽性組），每組8只大鼠，雌雄各半。以弗氏完全佐劑（卡介苗70℃、1 h滅活后與高壓滅菌的液體石蠟充分碾磨混勻配成10 g.L－1的乳劑）于每鼠右后足趾皮內注射0.1 mL致炎；正常對照組以生理鹽水做對照。

1.4.2 藥物治療 X浸膏稀釋于滅菌水中，尼美舒利溶解于滅菌水中，根據(jù)預實驗結果確定藥物劑量?？癸L濕藥浸膏的給藥劑量分別為高劑量 400 mg·kg－1·d－1、中劑量200 mg·kg－1·d－1、低劑量100 mg·kg－1·d－1，尼美舒利的給藥劑量為10 mg·kg－1·d－1。初次致炎的同時灌胃給藥，每日1次，連續(xù)30 d。對照組和模型組灌胃滅菌水做對照。

1.4.3 觀察和測量指標 每天觀察大鼠進食和精神狀態(tài)。各大鼠于致炎前（0d）、致炎后14、23、30 d分別在足容積測量儀上測定左側（繼發(fā)側）足容積，并計算其腫脹度。

1.5 全身關節(jié)病變程度評價 致炎后14、23、30 d觀察并記錄全身關節(jié)病變程度，全身病變按5級評分法評價，根據(jù)未注射佐劑的其余3個肢體的病變程度累計積分，計算出多發(fā)性關節(jié)炎指數(shù)（polyarthritis index，AI）。0分：無紅腫；l分：趾關節(jié)紅腫；2分：趾關節(jié)和足跖腫脹；3分：踝關節(jié)以下的足爪腫脹；4分：包括踝關節(jié)在內的全部足爪腫脹。各個關節(jié)的累計積分即為每只大鼠的AI。

1.6 疼痛實驗參照CZJ評分標準 將大鼠裝進特制的鼠筒內，后腿及尾部伸出筒外，穩(wěn)定幾分鐘后向腳掌側緩慢屈曲動物的左側踩關節(jié)，每隔5 s進行1次，共5次。屈關節(jié)時，動物出現(xiàn)嘶叫或短促而明顯的縮腿反應則評為1分，無反應為0分，每只大鼠左側關節(jié)疼痛反應的評分為0～5分。

2.1 對AA大鼠繼發(fā)側關節(jié)腫脹度的影響 模型組在致炎后14、23、30 d，與正常組比較，模型組的繼發(fā)側足腫脹度明顯增加；給藥14 d后，與尼美舒利組（陽性組）比較，X浸膏200 mg·kg－1·d－1劑量組可減輕AA大鼠的足腫脹度。其他劑量組作用不明顯（見表1）。

表1 X浸膏對AA大鼠繼發(fā)側關節(jié)腫脹度的影響（±s，n＝10）

表1 X浸膏對AA大鼠繼發(fā)側關節(jié)腫脹度的影響（±s，n＝10）

與AA大鼠模型組比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與正常組比較，＃P＜0.05

分組 劑量（mg·kg－1·d－1關節(jié)腫脹度（%）14 d 23 d 30 d正常組 —）3.46±1.40 7.34±2.43 10.87±2.72 AA大鼠 — 19.35±13.36＊＊26.80±14.61＊＊25.56±13.84＊尼美舒利 10 7.42±4.80＃ 15.99±6.63＃ 15.86±4.04 100 16.74±7.90 23.27±6.93 22.78±6.13 X浸膏 200 7.15±3.68＃ 18.22±14.15 17.97±17.11 400 12.48±8.63 26.48±11.49 25.72±12.11

2.2 對關節(jié)疼痛評分的影響 模型組關節(jié)疼痛反應升高，X浸膏200 mg·kg－1·d－1用藥14 d對AA大鼠關節(jié)疼痛明顯緩解，而其它劑量組則無明顯影響（表2）。

表2 X浸膏對AA大鼠關節(jié)疼痛評分的影響（±s，n＝10）

表2 X浸膏對AA大鼠關節(jié)疼痛評分的影響（±s，n＝10）

與 AA大鼠模型組比較，＊P＜0.05，與正常組比較＃＃P＜0.01，＃＃＃P＜0.01

分組 劑量（mg·kg－1·d－1疼痛評分14 d 23 d 30 d正常組 —）0.38±0.48 0.38±0.48 0.25±0.43 AA大鼠 — 3.25±1.85＃＃ 3.63±1.86＃＃＃ 3.25±1.56＃＃尼美舒利 10 1.01±0.66＊ 1.89±1.36＊ 1.38±1.41 100 1.75±0.97 2.25±1.56 2.13±1.62 X浸膏 200 1.00±0.71 2.00±1.73 2.00±1.73 400 1.88±0.78 2.50±1.80 2.25±1.98

2.3 對多發(fā)性關節(jié)炎指數(shù)的影響 致炎后14 d，除了正常組之外的其他各組大鼠開始出現(xiàn)全身癥狀，表現(xiàn)為未注射佐劑的其余3個肢體關節(jié)紅腫、變形，耳部及尾部結節(jié)，行走不便。X浸膏200 mg·kg－1·d－1用藥14 d后，可抑制AA大鼠全身繼發(fā)性關節(jié)病變（表3）。

表3 X浸膏對AA大鼠多發(fā)性關節(jié)炎指數(shù)的影響（±s，n＝10）

表3 X浸膏對AA大鼠多發(fā)性關節(jié)炎指數(shù)的影響（±s，n＝10）

與AA大鼠模型組比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

分組 劑量（mg·kg－1·d－1多發(fā)性關節(jié)炎指數(shù)14 d 23 d 30 d正常組 —）0 0 0 AA大鼠 — 6.88±3.75 8.00±3.81 6.38±3.16尼美舒利 10 2.38±1.22＊＊ 3.88±1.76＊ 3.63±2.12＊100 4.25±2.59 6.38±3.12 5.50±2.69 X浸膏 200 3.00±1.73＊ 5.00±1.94 4.25±2.54 400 4.13±2.62 6.00±2.69 5.88±2.09

3 討論

以弗氏完全佐劑誘導的大鼠AA模型，是一種篩選和研究治療RA藥物常用的模型之一，利用該模型對治療RA藥物的研究有諸多文獻報道［3～7］，其繼發(fā)性反應期是免疫功能紊亂所造成的免疫性炎癥反應。本實驗觀察到AA大鼠在致炎d14繼發(fā)側出現(xiàn)腫脹、屈關節(jié)疼痛評分升高及多發(fā)性全身關節(jié)病變，證明AA大鼠具有與RA相似的疼痛、踩關節(jié)腫脹以及活動受限制等反應。給藥14 d后，X浸膏200 mg·kg－1·d－1劑量組可減輕 AA大鼠的足腫脹度、對AA大鼠關節(jié)疼痛明顯緩解、抑制AA大鼠全身繼發(fā)性關節(jié)病變，其他劑量組作用不明顯。

侗族傳統(tǒng)抗風濕藥是由茜草、杜仲藤、牛膝、三角楓、烏蘞莓（母豬藤）、山梔茶等6味中藥配伍而成。茜草有涼血止血、化瘀通經(jīng)之效，臨床治月經(jīng)閉塞、惡露不下、跌打損傷、風濕痹痛、癰疽腫毒等［8］。杜仲藤具有祛風活絡，強筋壯骨等功效；主治風濕痹痛，腰肌勞損，腰腿痛，跌打損傷，外傷出血等［9］。牛膝具有活血通經(jīng)、補肝腎、強筋骨；共奏清熱祛濕、活血通絡、理氣止痛之功效［10］。烏蘞莓性味苦、酸、寒，無毒。有清熱、利濕、解毒消腫，可用于治療風濕性膝關節(jié)疼［11］。三角楓、山梔茶為貴州省黔東南州少數(shù)民族地區(qū)常用的中藥，將上述6種中藥配伍應用，發(fā)揮了各個藥物及相互的協(xié)同作用，為RA的治療提供一種方法和思路。侗族傳統(tǒng)抗風濕藥，通過臨床67例的實際應用，取得了較好的治療效果。本實驗的研究，為該藥在今后的研究和開發(fā)奠定了良好的基礎。至于該藥的作用機制，仍需更進一步的研究和探索。

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［2］Jacobson PB，Borgan SJ，Wilcox DM，et al.A new spin on an old model：In vivo evaluation of disease progression by magnetic resonance inagingwith respect to standard inflammtory parameters and histopathology in theadjuvant arthritis rat［J］.Arthritis Rheum，1999，42（10）：2060.

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Experiment on the Therapeutic Effect of Traditional Anti－Rheumatic Drugs of Dong People on Adjuvant Arthritis Rats

YANG Yan，CHEN Guang－yong，LIU Guang－ming

（People's Hospital of Dali Prefecture，Dali，Yunnan，671000）

Objective：To study the therapeutic effect of traditional anti－rheumatic drugs of Dong people on adjuvant arthritis rats（AA）.Methods：AA rat models were made by intradermal injection in the paw plantar of the AA rats by Freund.The secondary sides of the paw swelling were measured with paw volume measurement，and the pain scores and polyarthritis rating were made.Results：The rats，administrated 2000 mg·kg－1·d－1group with the anti－rheumatic drugs，began to lower the secondary side of their paw swelling，joint pain score and polyarthritis index（P＜0.05）to varying degrees at 14 days.Conclusion：The traditional anti－rheumatic drug of Dong people has a significant anti－inflammatory treatment on the adjuvant arthritis rats.

traditional anti－rheumatic drugs；adjuvant arthritis rats；Freund；anti－inflammatory

R258

A

1007－2349（2012）05－0052－02

云南省衛(wèi)生廳科研基金，項目編號：99Q049。

楊艷（1973～），女，云南大理人，本科，藥師，主要從事中藥的研究.

△通訊作者：陳光勇（1974～），男（侗族），貴州劍河人，副教授，碩士生導師，主要從事藥物化學的研究，Emil：chengy997＠sina.com.

2012－03－01）

·名醫(yī)專家經(jīng)驗·