HPLC法同時測定固本咳喘片中甘草酸和補骨脂素的含量

張俊燕

鎮(zhèn)江市藥品檢驗所，鎮(zhèn)江 212003

固本咳喘片為國家基本藥物，處方由補骨脂（鹽炒）、炙甘草、黨參、白術(shù)、茯芩、麥冬組成。具有益氣固表、健脾培本之效。用于脾虛痰盛、腎氣不固所致的咳嗽、痰多、喘息氣促、動則喘?。宦灾夤苎?、肺氣腫、支氣管哮喘等證候者。2005年版《中國藥典》標準有補骨脂（鹽炒）的含量測定，但無甘草的含量測定[1]。作者采用反相高效液相色譜法同時測定固本咳喘片中甘草酸和補骨脂素的含量。

1 儀器與試藥

Agilentl260高效液相色譜儀；BP211D電子天平。

補骨脂素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號110739-200814）；甘草酸銨對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號110731-200615）；固本咳喘片（南通精華制藥股份有限公司，批號100101、100201、100301）。乙腈為色譜純；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果[1]

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液 精取補骨脂素對照品 10.07 mg、甘草酸銨對照品10.42 mg分別用70%乙醇定容至50 mL量瓶中（作為儲備液），取上述儲備液分別加70%乙醇制成每1 mL含補骨脂素10.07 μg、甘草酸銨83.36 μg的溶液，作為對照液，即得（甘草酸重＝甘草酸銨重量／1.0207）。

2.1.2 供試品溶液 取10片固本咳喘片精密稱定，研細，精密稱取1.0g精密加入70%乙醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40 kHz）30分鐘，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3 空白溶液 根據(jù)處方制成不含炙甘草和補骨脂（鹽炒）的片，按2.1.2項下供試品溶液制備方法處理，作為陰性樣品溶液。

2.2 色譜條件

依利特 C18柱E2119638（4.6 mm×200 mm，5 μm)；流動相A：乙腈，流動相B：以0.05%磷酸溶液梯度洗脫（見表1）。檢測波長：237 nm；柱溫：30℃；流速：1.0 mL·min-1；進樣量：10 μL。

表1 流動相梯度洗脫

理論塔板數(shù)按補骨脂素峰計算應不低于5000。此條件下分離情況良好，陰性無干擾。見圖1。

2.3 線性關(guān)系考察

精密吸取 “2.1.1”項下對照品溶液各5、10、15、20、25 μL，按上述色譜條件測定，以峰面積為縱坐標，得到補骨脂素回歸方程Y＝65.4661X-5.64，r2＝0.9999，在0.0504～0.2518 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；甘草酸銨回歸方程Y＝503.1601X+2.2737，r2＝0.9999，甘草酸銨在0.4168～2.084 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗

圖1 補骨脂素、甘草酸銨色譜圖（A）對照品；（B）陰性樣品圖：（C）樣品色譜圖

精密吸取“2.1.1”項下對照品10 μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進樣5次，測定峰面積，結(jié)果補骨脂素峰面積RSD=0.19%；甘草酸銨峰面積RSD=0.21%。表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液 （批號100101）分別在0、4、8、12、16、20、24 h測定，測定結(jié)果補骨脂素峰面積RSD=0.31%；甘草酸銨峰面積RSD=0.35%。表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復性試驗

取樣品5份（批號100101），按“2.1.2”項下供試品溶液的制備方法，制備供食品溶液，按“2.2”項下色譜條件測定，結(jié)果補骨脂素含量平均為0.302 mg/片，RSD=0.28%；甘草酸含量平均為0.637 mg/片，RSD=0.26%。

2.7 加樣回收實驗

稱取已知含量的固本咳喘片 （批號100101，補骨脂素含量為0.302 mg/片，甘草酸含量為0.637 mg/片）5份，分別精密加入“2.1.1”項下對照品儲備液2 mL，按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，測定補骨脂素、甘草酸的含量，計算加樣回收率分別為97.21%、98.31%，RSD分別為0.18%、0.39%。

結(jié)果補骨脂素、甘草酸平均回收率、RSD分別為97.21%，0.18%；98.31%，0.39%。

2.8 樣品含量測定

取3批不同批號固本咳喘片，按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.2”項下色譜條件測定，以外標法計算樣品中補骨脂素、甘草酸的含量（mg/片）。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果（n=3）

3 討 論

溶劑的選擇[2-4]，發(fā)現(xiàn)70%乙醇提取效率優(yōu)于50%的乙醇；樣品在超聲提取30 min后提取效率基本不變。流動相的選擇[2-4]，甘草酸胺峰必須在酸性較高的情況下才達到基線分離，嘗試不同的酸濃度、流速、梯度，最后采用本文流動相，應用梯度洗脫的方式使兩者同時達到分離，效果良好。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京：中國醫(yī)藥出版社[S].2010.

[2] 陳云華，趙曉霞，王文全，等.HPLC同時測定甘草中甘草酸、甘草苷、異甘草素的含量[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2009，16（8）：52.

[3] 崔淑芬，張信青，許柏球，等.HPLC同時測定甘草中甘草酸和甘草苷的含量[J].時珍國醫(yī)國藥，2006，17（3）：307.

[4] 王 征，夏宇欣.HPLC測定腦樂靜中甘草酸銨的含量[J].基層中藥雜志，2010，1516（2）：11.