患兒副流感病毒Ⅲ型的檢測及其對免疫細胞的影響

劉 偉

(河南省新蔡縣人民醫(yī)院兒科 河南 駐馬店 463500)

副流感病毒(PIV)屬副粘病毒科［1，2］，在新生兒和 小嬰兒 PIVⅢ的感染率僅次于呼吸道合胞病毒(RSV)。本研究采用2005年6月至2010年12月入住新蔡縣人民醫(yī)院的急性呼吸道感染患兒為研究對象，檢測其鼻咽分泌物副流感病毒3型抗原及共外周血免癌細胞的變化，以期為臨床治療提供參考。

1 臨床資料和方法

1.1 一般資料 自2005年6月至2010年12月，收集因急性呼吸道感染而住我科治療的患兒鼻咽分泌物4 538例，男2 367例，女2 171例。年齡1～13歲，其中≤1歲2 579例，1～3歲939例，＞3～13歲1 020例。肺炎診斷參照有關標準［3］。

1.2 上呼吸道感染的病原檢測方法 由專職護士在患兒入院當日或次日采集其鼻咽分泌物，送實驗室待檢。采用直接熒光法檢測呼吸道分泌物中的PIVⅠ、Ⅱ、Ⅲ型抗原。試劑盒為美國Chemicon公司產品。按試劑說明書操作。結果判斷:如果一孔涂片中含有細胞數大于200個，且2%(或5個)以上的細胞顯示有細胞內染色為陽性。其中PIV顯示為細胞漿內染色。

1.3 上呼吸道感染的體液免疫檢測方法 IgM抗體檢測采用酶聯免疫吸附試驗法，檢測試劑盒由德國IBL生產。于PIV患兒入院第2～5天取血樣，檢測血清中PIVⅠ、Ⅱ、Ⅲ型的IgM抗體，酶標儀檢測出PN值(標本測定值/陽性對照測定值)≥2.1判為陽性。其中病毒IgM抗體陽性者的血清并用免疫投射比濁法進行免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的檢測。試劑盒由上海玉蘭生物技術研究所生產。

1.4 淋巴細胞亞群 花青藻紅素25(PE2CY5)標記抗CD3+抗體、CD19+抗體，異硫氰酸熒光素(FITC)標記抗CD4+抗體，藻紅朊(PE)標記抗 CD8+抗體、CD16+CD56+抗體。取外周血，肝素抗凝，每管100μl全血中加入不同熒光素標記的抗體，輕輕混勻后暗室下孵育，然后加入溶血素(OptiL-yse)裂解紅細胞，輕輕混勻后再次暗室下孵育，經離心、洗滌后在流式細胞儀上進行分析。

1.5 統(tǒng)計學處理 采用SPSS11.5軟件進行卡方檢驗比較頻率，檢驗水準為α=0.05。

2 結果

2.1 分布情況 檢出感染PIV標本218例中PIVⅠ陽性23 例(10.6%)，PIVⅡ陽性1 例(0.45%)，PIVⅢ陽性194例(90.0%)。PIVⅢ感染與年齡的關系:≤1歲PIVⅢ陽性151/194例(77.8%)，＞1歲PIVⅢ陽性43/194 例(22.2%)。見表1。

表1 急性呼吸道感染中PIV檢測結果［n，(%)］

2.2 患兒體液免疫功能 218例PIV標本中IgM抗體陽性者(1～13歲)血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的檢測結果(表2)。≤1歲的患兒的IgG低于參考范圍，1～13歲的患兒IgM均高于正常水平。

表2 PIVⅢ感染患兒血清IgG、IgA、IgM檢測結果()

表2 PIVⅢ感染患兒血清IgG、IgA、IgM檢測結果()

IgG IgA IgM≤1歲組別 n 14 10.23 ±1.46 1.59 ±0.42 1.89 ±0.48 151 6.23 ±1.96 1.01 ±0.52 1.59 ±0.48 1～3 歲 29 8.40±2.15 1.19 ±0.29 2.05 ±0.78 3～13歲

2.3 淋巴細胞亞群檢測 副流感病毒Ⅲ型感染肺炎患兒外周血CD3+T細胞、CD4+T細胞、CD8+細胞、CD19+CD21+B細胞百分比和對照組相仿;CD16+CD56+T細胞百分比較對照組減少(P＜0.05);CD4+/CD8+比值較對照組升高(P＜0.05)。見表3。

表3 PIVⅢ感染患兒細胞免疫各指標比較()

表3 PIVⅢ感染患兒細胞免疫各指標比較()

組別 CD3+CD3+CD4+CD3+CD8+CD4+/CD8+CD19+CD16+CD56+感染組 62.2 ±10.8 37.5 ±8.42 22.4 ±5.85 1.77 ±0.72 28.5 ±11.1 6.60±3.66對照組 60.2 ±5.05 33.8 ±4.86 23.0±4.81 1.57 ±0.41 25.6 ±5.40 10.3 ±2.63 P 0.816 0.146 0.153 0.041 0.314 0.021

3 討論

副流感病毒(PIV)屬副粘病毒科，為單鏈RNA病毒［4］。到3歲時，多數兒童感染過PIVⅠ、Ⅱ、Ⅲ，近年的國內外研究顯示，PIV是小兒呼吸道病毒感染的重要病原，亦是導致小兒呼吸道感染住院的重要原因，此外，PIVⅢ經常導致肺炎和細支氣管炎。健康兒童很少能從鼻咽部分離到PIV，因此患兒鼻咽分泌物中檢測到這些病毒即可確定為致病原［5］。本院通過對因急性呼吸道感染而住院治療的患兒進行PIV的統(tǒng)計，發(fā)現PIV的檢出率為4.8%，而PIVⅢ在PIV感染中所占比例最高，為89.4%。同時，結果表明小嬰兒尤其易感PIVⅢ。

因此，及時準確的了解PIVⅢ肺炎患兒的各項免疫指標變化，對于臨床治療有重要意義。本研究表明，PIVⅢ肺炎患兒外周血 CD3+T細胞、CD4+T細胞、CD8+細胞、CD19+CD21+B細胞百分比和對照組相仿;但CD16+CD56+T細胞百分比較對照組減少(P＜0.05);而 CD4+/CD8+比值較對照組升高(P＜0.05)。

CD16，CD56是人NK細胞的表面標志。NK細胞表面的CD16是低親和力的IgG Fc受體，當IgG抗體與靶細胞表面相應表位特異性結合后，可通過其Fc段與NK細胞表面的FcγRⅢ結合，促使NK細胞脫顆粒，釋放穿孔素和顆粒酶，發(fā)揮對靶細胞的定向非特異性殺傷作用［6］。CD16+CD56+T細胞百分比較對照組減少(P＜0.05)表示NK細胞不能發(fā)揮正常的免疫功能，導致其清除病原的能力下降。

CD4+分子表達在Th細胞表面，CD8+分子主要表達在Ts細胞和Tc細胞表面。T淋巴細胞在免疫應答和免疫調節(jié)中起重要作用。CD4+/CD8+比值較對照組升高(P＜0.05)，表明T細胞功能紊亂，不能維持機體正常的免疫功能［7］。

因此，PIVⅢ患兒免疫功能的調節(jié)是臨床治療的重要突破口之一。

［1］Teo W Y，Rajadurai V S，Sriram B.Morbidity of parainfluenza 3 outbreak in preterm infants in a neonatal unit［J］.Ann Acad Med Singapore，2010，39(11):837-846.

［2］Hsieh Y J，Chin H，Chiu N C，et al.Hospitalized pediatric parainfluenza virus infections in a medical center［J］.J Microbiol Immunol Infect，2010，43(5):360-365.

［3］胡亞美，江載芳，諸福棠.實用兒科學［M］.第7版，北京人民衛(wèi)生出版社，2002:227.

［4］Boonyaratanakornkit J，Bartlett E，Schomacker H，et al.The C proteins of human parainfluenza virus type 1 limit double-stranded RNA accumulation that would otherwise trigger activation of MDA5 and protein kinase R［J］.J Virol，2011，85(4):1495-1506.

［5］田曼，秦銘，劉紅霞，等.兒童急性下呼吸道感染病毒病原學分析［J］.臨床兒科雜志，2010，28(2):23-26.

［6］Kohlmeier J E，Cookenham T，Miller S C，et al.CXCR3 directs antigen-specific effector CD4+T cell migration to the lung during parainfluenza virus infection［J］.Immunol，2009，183(7):4378-4384.

［7］Le Nouёn C，Hillyer P，Munir S，et al.Effects of human respiratory syncytial virus，metapneumovirus，parainfluenza virus 3 and influenza virus on CD4+T cell activation by dendritic cells［J］.PLoS One，2010，5(11):378-397.