胞磷膽堿鈉注射液中輔料焦亞硫酸鈉的含量測定

趙 明，張 娟，高 錦，嵇 楊，祁冰潔，趙春杰

（1.解放軍總后勤部衛(wèi)生部藥品儀器檢驗所質(zhì)量保證室，北京100071；2.沈陽藥科大學藥學院藥物分析學教研室，沈陽110016；3.解放軍第309醫(yī)院重癥肌無力科，北京100091）

胞磷膽堿鈉是一種神經(jīng)保護劑，是內(nèi)源性合成磷脂酰膽堿的中間體，為卵磷脂生物合成所必需的輔酶［1］。作為臨床常用的神經(jīng)激活劑，不同廠家胞磷膽堿鈉注射液的處方及生產(chǎn)工藝各不相同，有的處方中不添加任何輔料，有的添加焦亞硫酸鈉（Na2S2O5），且不同廠家加入量各不相同。焦亞硫酸鈉是抗氧化劑，氧化后的殘留物亞硫酸鹽可引起包括細胞損傷、支氣管痙攣和過敏在內(nèi)的高度敏感性反應，其過敏反應發(fā)生率較高，有的甚至危及生命，故應對其加入量進行控制，以提高產(chǎn)品的安全性。焦亞硫酸鈉作為藥用輔料在《中華人民共和國藥典》2010版二部［2］中收載，采用碘量滴定法進行含量測定，此法適用于輔料純品的含量測定，而胞磷膽堿鈉本身含有還原性基團，會干擾碘量法的測定結(jié)果。因此，建立高效、快速、準確、適于測定胞磷膽堿鈉注射液中焦亞硫酸鈉的含量測定方法很有必要。有關胞磷膽堿鈉注射液中焦亞硫酸鈉的含量測定方法國內(nèi)外尚未見報道。本研究根據(jù)焦亞硫酸鈉在酸性溶液中釋放出的二氧化硫能使酸性品紅溶液褪色的性質(zhì)，建立了胞磷膽堿鈉注射液中焦亞硫酸鈉的含量測定方法，現(xiàn)報道如下。

1 儀器和試藥

UV－2550型紫外－可見分光光度儀（日本島津公司）；MES 235S電子天平（美國Starious公司）；無水亞硫酸鈉、乙二胺四乙酸二鈉（EDTA－2Na）（分析純，國藥集團化學試劑有限公司）；酸性品紅、結(jié)晶乙酸鈉（分析純，北京化工廠）；冰乙酸（分析純，天津市康科德科技有限公司）。胞磷膽堿鈉注射液由國內(nèi)藥品生產(chǎn)廠A（批號100309、100524）、B（批號09053006、09080314、09090310、09100316、09100318、 09100319、09100320、10010324、10010325、10010503、10010514、10010521、10030312）、C（090330410、091120800）提供。水為二次重蒸水。

2 方法和結(jié)果

2.1 溶液制備 （1）酸性品紅溶液：精密稱取酸性品紅0.34g，加硫酸1ml，加水溶解至1 000ml（7d內(nèi)使用）。（2）乙酸鹽緩沖液（pH＝4.8）：稱取結(jié)晶乙酸鈉136.1g，EDTA－2Na 0.4g，加入冰乙酸57ml，加水溶解并定容至1 000ml。（3）亞硫酸鈉對照品溶液：精密稱取無水亞硫酸鈉55.0mg，用0.04%EDTA－2Na溶液溶解并定容至25ml。

2.2 檢測波長的選擇 精密量取酸性品紅溶液8.0ml，共2份，分別置50ml量瓶中，各加乙酸鹽緩沖液約30ml，分別加入亞硫酸鈉對照品和供試品溶液各1.0ml，用乙酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻，室溫放置。在400～700nm波長范圍內(nèi)做掃描，對照品及供試品在549nm波長處有最大吸收，選擇549nm作為檢測波長。

2.3 反應時間的考察 按2.2項下方法配制反應液后搖勻，室溫放置，于不同時間測定吸光度（A）。結(jié)果表明，在室溫條件下，溶液的A值逐漸降低，在25min后穩(wěn)定，表明反應已完全，故將反應時間定為25min。

2.4 陰性對照實驗 精密量取酸性品紅溶液8.0ml，共2份，分別置50ml量瓶中，各加乙酸鹽緩沖液約30ml，分別加入自制不含焦亞硫酸鈉的胞磷膽堿鈉注射液與乙酸鹽緩沖液各1.0ml，用乙酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻，室溫放置25min，測定在549nm處的A值。兩者在549nm波長處的A值一致，故胞磷膽堿鈉不干擾焦亞硫酸鈉的測定，且乙酸鹽緩沖液在放置0min與25min時A值一致，表明酸性品紅溶液自身顏色在室溫放置25min內(nèi)不會逐漸減褪。

2.5 測定方法 精密量取酸性品紅溶液8.0ml，置50ml量瓶中，加乙酸鹽緩沖液約30ml，精密加入胞磷膽堿鈉注射液1.0ml，用乙酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻，室溫放置25min。以乙酸鹽緩沖液為空白對照，在549nm波長處測定A值。

2.6 線性范圍考察 精密量取酸性品紅溶液8.0ml，共8份，分別置50ml量瓶中，各加乙酸鹽緩沖液約30ml，精密加入對照品溶液0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0ml，按2.5項下操作，測定A值。以對照品溶液A值的倒數(shù)（1／A）與其濃度（c）進行線性擬合，無水亞硫酸鈉的濃度在4.44～177.6μg／ml范圍內(nèi)，即焦亞硫酸鈉濃度在3.35～133.9μg／ml范圍內(nèi)，1／A與濃度c呈良好的線性關系，回歸方程為1／A＝0.114 2 c＋0.301 3，r＝0.999 6。

2.7 重復性實驗 取同一批供試品6份，分別測定含量，結(jié)果RSD為1.18%（n＝6），表明該方法重復性良好。

2.8 加樣回收率實驗 精密稱取無水亞硫酸鈉對照品80、100、120mg，分別置50ml量瓶中，用0.04%的EDTA－2Na溶液溶解并定容，搖勻，作為對照品溶液。精密量取酸性品紅溶液8.0ml，共9份，分別置50ml量瓶中，各加乙酸鹽緩沖液約30ml，分別精密加入對照品溶液0.5ml，再分別精密加入已知含量的供試品溶液0.5ml，并用乙酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻，按2.5項下方法操作，求得平均加樣回收率為96.4%，RSD為2.0%（n＝9）。

2.9 含量測定 照2.5項下方法測定各供試品溶液的A值。按2.6項中標準曲線定量。樣品測定結(jié)果見表1。

表1 不同廠家胞磷膽堿鈉注射液中焦亞硫酸鈉的含量測定結(jié)果（n＝3，±s，ρB／mg·ml－1）

表1 不同廠家胞磷膽堿鈉注射液中焦亞硫酸鈉的含量測定結(jié)果（n＝3，±s，ρB／mg·ml－1）

企業(yè) 批號 處方量 測定值A 100309 1.5 1.384±0.001 A 100524 1.5 1.474±0.002 B 09053006 0 1.020±0.001 B 09080314 0 0.940±0.003 B 09090310 0 0.834±0.001 B 09100316 0 0.928±0.002 B 09100318 0 0.984±0.003 B 09100319 0 0.961±0.001 B 09100320 0 0.938±0.001 B 10010324 0 0.940±0.003 B 10010325 0 0.969±0.001 B 10010503 0 0.907±0.004 B 10010514 0 0.944±0.002 B 10010521 0 0.897±0.002 B 10030312 0 0.996±0.001 C 090330410 0 0 C 091120800 0 0

3 討 論

3.1 反應原理 焦亞硫酸鈉中含有兩個＋4價的硫，亞硫酸鈉（Na2SO3）中含有一個＋4價的硫，因此發(fā)生氧化還原反應時，2mol的亞硫酸鈉相當于1mol的焦亞硫酸鈉，即2.52g的亞硫酸鈉相當于1.90g的焦亞硫酸鈉。

3.2 測定結(jié)果分析 本研究所建立的方法可準確測定胞磷膽堿鈉注射液中加入焦亞硫酸鈉的含量，從而準確判斷樣品中是否非法添加焦亞硫酸鈉。本研究通過對3個廠家17批樣品進行測定，發(fā)現(xiàn)B廠共13批樣品均未按處方量規(guī)定，擅自添加焦亞硫酸鈉，存在一定安全隱患。焦亞硫酸鈉極易被氧化，在生產(chǎn)過程中會有不同程度的損耗，故A廠2批樣品測得值比處方量偏小，并可能出現(xiàn)一定差異。

3.3 比色反應條件 姚克榮等［3］認為焦亞硫酸鈉與酸性品紅溶液的顯色反應條件應控制為28℃水浴15min，吳小曼等［4］認為反應溫度不重要，關鍵是對照品溶液與供試品溶液同時平行操作，室溫下放置25min。作者發(fā)現(xiàn)在室溫下放置25～40min，A均保持穩(wěn)定。因焦亞硫酸鈉極易被氧化成硫酸鹽，因此含量測定應在樣品開封后立即取樣，以減小誤差。3.4 對照品的選擇及配制 焦亞硫酸鈉具有極易被氧化的特性，不宜作為對照品進行實驗，應選擇相對穩(wěn)定的無水亞硫酸鈉作為對照品，且配制亞硫酸鈉對照品溶液時選用0.04%的EDTA－2Na溶液稀釋定容，可有效防止亞硫酸鈉對照品被氧化，增加測定結(jié)果的可靠性。采用標準曲線法進行含量測定，可以在一定程度上降低測定誤差。

3.5 標準曲線 姚克榮等［3］認為，亞硫酸鹽濃度與1／A呈線性關系，吳小曼等［4］認為按雙對數(shù)方式擬合得到的標準曲線，其相關系數(shù)要優(yōu)于倒數(shù)方式。作者采用兩種方式進行數(shù)據(jù)處理，發(fā)現(xiàn)亞硫酸鹽濃度與1／A的線性關系較好。

［1］ 顧復昌，楊亮懿.胞二磷膽堿的生產(chǎn)［J］.發(fā)酵科技通訊，2007，36（1）：9－11.

Gu FuChang，Yang LiangYi.The production of citicoline［J］.Ferment Sci Technol Commun，2007，36（1）：9－11.In Chinese.

［2］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典.2010年版二部［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：1238.

State Pharmacopoeia Committee.Pharmacopoeia of the People’s Republic of China.2010ed.Volume 2［S］.Beijing：Chinese Medical Science Press，2010：1238.In Chinese.

［3］ 姚克榮，徐連連.影響復方氨基酸注射液中焦亞硫酸鈉含量測定的因素［J］.中國生化藥物雜志，1997，18（3）：132－134.

Yao KeRong，Xu LianLian.Factors affecting the determination of the content of sodium pyrosulfite in complex amino acids injection［J］.Chin J Biochem Pharm，1997，18（3）：132－134.In Chinese with English abstract.

［4］ 吳小曼，紀 宇.比色法測定復方氨基酸注射液（18AA－Ⅰ）中焦亞硫酸鈉的含量［J］.中國藥品標準，2007，8（5）：38－40.

Wu XiaoMan，Ji Yu.Content determination of sodium pyrosulfite in compound amino acid injection（18AA－Ⅰ）by the colorimetric method［J］.Drug Stand China，2007，8（5）：38－40.In Chinese with English abstract.