福多司坦片健康人體藥動(dòng)學(xué)研究

周 佳，李 珍＊，楊武云，唐世新，聞 俊，范國榮，胡晉紅＊

（1.第二軍醫(yī)大學(xué)長海醫(yī)院藥學(xué)部，上海200433；2.第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院藥物分析學(xué)教研室，上海200433）

福多司坦是一種新型祛痰藥，為L－半胱氨酸衍生物，具有抑制炎癥、修復(fù)黏膜、促進(jìn)氣管分泌的作用［1］。臨床廣泛用于呼吸道疾病的祛痰治療［2］?；诟６嗨咎箯V泛的臨床應(yīng)用，對其藥動(dòng)學(xué)特點(diǎn)的了解很有必要。本研究應(yīng)用建立的LC－MS／MS法測定血漿中福多司坦藥物濃度，考察單次口服給藥后，福多司坦在健康志愿者體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征，為臨床應(yīng)用確定給藥劑量和給藥方案提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 儀器和試藥 VARIAN 1200L液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀，包括ProStar 210高壓泵，ProStar 410自動(dòng)進(jìn)樣器，1200L Quadrupole MS／MS儀，MS 6.3工作站（美國瓦里安公司）。XW－80A渦旋混合器（上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠），TGL－16G臺(tái)式高速離心機(jī)和80－2B臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）。Millipore Simplicity 185超純水系統(tǒng)（美國Millipore公司）。福多司坦對照品（批號030801，含量99.15%）由上海醫(yī)藥（集團(tuán)）有限公司信誼制藥總廠提供。試驗(yàn)藥物福多司坦片［由無錫藥明康德新藥開發(fā)有限公司和上海醫(yī)藥（集團(tuán)）有限公司信誼制藥總廠聯(lián)合研制，規(guī)格：200mg／片，批號：030901C］，經(jīng)檢驗(yàn)合格，符合臨床研究用藥質(zhì)量要求。甲醇（色譜純，美國Merck公司），水為去離子水。

1.2 受試者選擇 10例男性健康志愿者，年齡20～24歲，體重55～75kg，身高166～181cm。無心、肝、腎、消化道和血液系統(tǒng)等疾病史，且精神狀態(tài)良好。經(jīng)體檢，血常規(guī)、尿常規(guī)、血生化、凝血酶原時(shí)間、糞常規(guī)（包括潛血）、心電圖、胸片檢查等合格。試驗(yàn)方案經(jīng)第二軍醫(yī)大學(xué)長海醫(yī)院倫理委員會(huì)審批同意，所有健康志愿者明了本試驗(yàn)的目的與要求，并自愿簽署知情同意書。

1.3 試驗(yàn)方案 受試者于給藥前1d入選并入住試驗(yàn)病房，給藥前1d晚餐后開始禁食，給藥當(dāng)天早上7：00空腹口服400mg福多司坦片，用200ml溫開水送服。服藥2h后可以飲水，服藥4h后進(jìn)食統(tǒng)一低脂餐。于給藥前及給藥后的0.083、0.167、0.25、0.5、0.75、1、2、3、4、6、8、10、12h于肘靜脈取血4ml，肝素抗凝，置一次性塑料離心管中，9×102× g離心10min，分取血漿1ml于－20℃冰箱保存至測定。血樣采集及臨床觀察均在Ⅰ期病房中進(jìn)行，由臨床經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)師進(jìn)行監(jiān)護(hù)。試驗(yàn)期間受試者禁用含柑橘、檸檬類、葡萄柚汁類、咖啡因、乙醇或黃嘌呤等的飲料，避免劇烈運(yùn)動(dòng)及長時(shí)間臥床。

1.4 血藥濃度測定

1.4.1 色譜分離條件 色譜柱：Diamonsil C18柱（200mm× 4.6mm，5μm，美國迪馬公司）；柱溫30℃；流動(dòng)相：甲醇－水（50∶50），采用等梯度洗脫方式；流速0.6ml／min；分流比3∶1；進(jìn)樣量20μl；分析時(shí)間6min。

1.4.2 質(zhì)譜檢測條件 采用ESI離子源、負(fù)離子檢測，選擇SRM工作方式進(jìn)行一／二級質(zhì)譜分析。質(zhì)譜檢測工作參數(shù)如下：福多司坦Q1（m／z）178、Q3（m／z）91；掃描時(shí)間1.0s，SIM寬0.7，Q1峰寬1.5；分析針4 500V、12μA；閥門壓力600V、55psi；干燥氣體380℃、21psi；毛細(xì)管35V，Q0 0.7V，L4 1.0V，Q1 1.0V；Q2碰撞能量12.0V，碰撞氣體0.24Pa；負(fù)離子檢測1 300V。在上述LC－MS／MS條件下測得福多司坦一／二級質(zhì)譜及空白血漿、空白血漿添加對照品、實(shí)測血漿樣品的典型譜圖，見圖1。

圖1 血漿中福多司坦的LC－MS／MS譜圖

1.4.3 血樣預(yù)處理 靜脈血樣置于5.0ml塑料離心管中（肝素抗凝），9×102×g離心10min，分離血漿。取血漿100μl置于1.5ml塑料Eppendorf離心管中，加入300μl甲醇，渦旋振蕩1min，于1.1×104×g高速離心10min。分取上清液250μl置于0.5ml塑料Eppendorf離心管中，于1.1×104×g二次離心4min。吸取上清液150μl，自動(dòng)進(jìn)樣20μl進(jìn)行LC－MS／MS分析。

1.4.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取福多司坦對照品10.10mg，置于10.0ml量瓶中，加去離子水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得1 010.0μg／ml的對照品貯備液。精密吸取對照品貯備液適量，用去離子水分別稀釋定容至3個(gè)10.0ml量瓶中，配成濃度為101.00、10.10和1.01μg／ml的對照品溶液。從福多司坦對照品溶液中精密吸取相當(dāng)于1.01、2.02、5.05、10.10、20.20、50.50、101.00μg福多司坦溶液置于7個(gè)10.0ml量瓶中，加入空白血漿稀釋定容，配制成含福多司坦0.101、0.202、0.505、1.01、2.02、5.05、10.10μg／ml的標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品。按1.4.3項(xiàng)步驟操作，并進(jìn)行LC－MS／MS分析。以福多司坦對照品的峰面積（A）對相應(yīng)的濃度（c）進(jìn)行線性回歸，得福多司坦血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：A＝6.134 c－0.505 3， r＝0.999 7（n＝5），線性范圍0.101～10.10μg／ml。本法測定血漿中福多司坦的最低定量濃度為0.101μg／ml（S／N＞3）。1.4.5 回收率和精密度考察 （1）回收率實(shí)驗(yàn) 配制0.202、1.01、5.05μg／ml低、中、高3種不同濃度的福多司坦標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品，按1.4.3項(xiàng)下步驟操作，將血漿樣品中福多司坦色譜峰面積代入血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過測得量與加入量的比值求得相對回收率。（2）精密度實(shí)驗(yàn) 取上述3種濃度的福多司坦血漿樣品測定峰面積，每日制備隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線，從當(dāng)日標(biāo)準(zhǔn)曲線上求算血漿樣品的濃度，連續(xù)測定5d，再計(jì)算方法的日內(nèi)和日間RSD，結(jié)果見表1。

表1 福多司坦的回收率與精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2 結(jié) 果

2.1 血藥濃度－時(shí)間曲線 10名健康志愿者單劑量口服400mg福多司坦片后，福多司坦血藥濃度－時(shí)間曲線見圖2。

圖2 單劑量口服400mg福多司坦片后平均血藥濃度－時(shí)間曲線n＝10

2.2 藥動(dòng)學(xué)參數(shù) 采用非房室模型（統(tǒng)計(jì)矩）法計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，cmax和tmax采用實(shí)測值，梯型面積法計(jì)算藥－時(shí)曲線下面積。10名健康志愿者單劑量口服400mg福多司坦片后體內(nèi)福多司坦藥－時(shí)曲線的末端相消除半衰期（t1／2）、平均駐留時(shí)間（MRT）、峰濃度（cmax）、達(dá)峰時(shí)間（tmax）、AUC0～12、AUC0～∞分別為（3.88±0.65）h、（4.50±0.75）h、（6.96±3.78）μg／ml、（0.4±0.2）h、（14.23± 4.99）μg·h·ml－1、（15.51±5.23）μg·h·ml－1。

3 討 論

本研究采用甲醇沉淀蛋白質(zhì)法預(yù)處理血漿樣品，應(yīng)用建立的LC－MS／MS法測定福多司坦在健康受試者體內(nèi)血藥濃度。通過測定單劑量口服福多司坦400mg后不同時(shí)間的血藥濃度，對福多司坦在人體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)規(guī)律進(jìn)行了研究。研究結(jié)果顯示，福多司坦在健康人體內(nèi)主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)與文獻(xiàn)報(bào)道［3，4］基本一致。通過本研究發(fā)現(xiàn)，福多司坦片口服給藥后，約0.5h血漿中藥物濃度即達(dá)峰值，3～4h后血藥濃度即可下降50%。其口服吸收迅速、良好，臨床用藥起效快，半衰期較短，體內(nèi)排泄較快。

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［2］ 張華峰，王健康，戴 博，等.高效液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法測定人血漿中福多司坦的濃度［J］.解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2010，26（2）：156－157，164.

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［3］ 張 紅，胡 敏，熊玉卿，等.液質(zhì)聯(lián)用測定血中福多司坦?jié)舛燃捌淙梭w藥動(dòng)學(xué)［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2008，28（16）：1370－1373.

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［4］ 盧 姍，劉 偉，李曉紅，等.人血漿中福多司坦的LC－MS／MS法測定［J］.中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2009，40（5）：365－367.

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