波葉山螞蝗化學(xué)成分研究

張 龍， 張前軍，*， 康文藝， 劉 超， 盧永仲

(1.貴州大學(xué)精細(xì)化工研究開(kāi)發(fā)中心，貴州貴陽(yáng)550025;2.貴州大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院，貴州貴陽(yáng)550025;3.河南大學(xué)中藥研究所，河南開(kāi)封475004.)

波葉山螞蝗Desmodium sequax Wall為豆科Leguminosae山螞蝗屬植物，又名瓦子草，野豆子，牛巴嘴，山螞蝗，過(guò)路黃，檀草，長(zhǎng)波葉山螞蝗。本品生于海拔為1300～2800 m的山地草坡或林地，分布于我國(guó)四川、湖北、貴州、云南、臺(tái)灣等地。波葉山螞蝗味微苦、澀，性平。據(jù)現(xiàn)代資料記載，有清熱瀉火、活血祛瘀、斂瘡、潤(rùn)肺止咳、驅(qū)蟲(chóng)之功效。主治風(fēng)熱目赤，胞衣不下，血瘀經(jīng)閉，燒傷，盜汗，燒蟲(chóng)病等［1-3］。該屬植物的主要成分有生物堿類(lèi)、酚類(lèi)、三萜類(lèi)及黃酮類(lèi)等化合物。據(jù)文獻(xiàn)查閱，目前尚無(wú)該植物的化學(xué)成分報(bào)道。為了闡明波葉山螞蝗的有效成分，了解其藥用基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)利用貴州省豐富的波葉山螞蝗植物資源，對(duì)波葉山螞蝗的化學(xué)成分進(jìn)行了深入研究，首次從該植物中分離得到7個(gè)化合物。

1 儀器與材料

JOEL—ECX500型500 MHZ核磁共振儀 (TMS內(nèi)標(biāo));HPMS5976質(zhì)譜儀;Sephadex LH-20(美國(guó)GE公司);Bio-Rad型傅立葉紅外光譜儀(4000～400 cm－1，美國(guó));X—4數(shù)字顯示顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀 (溫度未校正，北京泰克儀器有限公司)。柱色譜用硅膠及高效硅膠薄層板均為青島海洋化工廠出品。所用石油醚、乙酸乙酯、三氯甲烷、丙酮、甲醇為工業(yè)試劑經(jīng)重蒸處理，其余均為分析純?cè)噭?/p>

波葉山螞蝗全草采自貴州省安順市，經(jīng)貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院陳德媛教授鑒定為豆科山螞蝗屬植物波葉山螞蝗 Desmodium sequax Wall.。

2 提取與分離

將干燥波葉山螞蝗全草進(jìn)行粉碎，粉碎后得25 kg，留樣3 kg，將剩余的22 kg每次用70 L 75%的乙醇冷浸提取7 d，提取3次，將所得乙醇提取液合并，減壓濃縮回收溶劑，得乙醇提取物1800 g。將其用水分散后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓濃縮回收溶劑，得石油醚部分 (60 g)、乙酸乙酯部分 (89 g)和正丁醇部分(335 g)。

將石油醚部分用水分散，用40～60目拌樣硅膠拌樣后用200～300目硅膠進(jìn)行柱色譜分離，為對(duì)其中各組分進(jìn)行有效分離，以石油醚-乙酸乙酯(50∶1～0∶1)為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，洗脫液減壓回收溶劑后經(jīng)TLC檢測(cè)，將相同成分合并，得4個(gè)組分，分別命名為F1、F2、F3、F4。組分F2經(jīng)200～300目硅膠柱色譜，石油醚-乙酸乙酯(10∶1)分離得到化合物1(3.2 g)。將組分F3經(jīng)200～300目硅膠柱色譜，石油醚－乙酸乙酯(3∶1)分離和重結(jié)晶純化得到化合物2(2.8 g)。

乙酸乙酯浸膏，經(jīng)石油醚-乙酸乙酯(50∶1～0∶1)后三氯甲烷-甲醇 (30∶1～0∶1)為溶劑體系進(jìn)行梯度洗脫，洗脫液減壓回收溶劑后經(jīng)TLC檢測(cè)，將相同成分合并，得9個(gè)組分分別命名為R1～R9，組分R1經(jīng)200～300目硅膠柱色譜，石油醚-乙酸乙酯 (30∶1)分離和重結(jié)晶得化合物4(49 mg)，5(4.9 g)，組分R2經(jīng)200～300目硅膠柱色譜，石油醚-乙酸乙酯 (1∶1)分離和Sephedex LH-20柱色譜反復(fù)純化得到化合物6(35 mg)，組分R4經(jīng)硅膠柱色譜，三氯甲烷-甲醇(30∶1)后經(jīng)重結(jié)晶得到化合物3(2.71 g)，組分R6經(jīng)硅膠柱色譜三氯甲烷-甲醇 (1∶1)洗脫后經(jīng)重結(jié)晶得化合物7(80 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1:白色粉末 (石油醚-乙酸乙酯)，mp 197～199 ℃。EI-MS(m/z):426［M］+，411，218，203，189。1H-NMR(500 MHz，CDCl3)δ:5.18(1H，t，J=4.8 Hz，H-12)，3.22(1H，t，J=6.9 Hz，H-3)，1.13(3H，s，H-27)，1.07(3H，s，H-23)，1.00(3H，s，H-25)，0.97(3H，s，H-24)，0.94(3H，s，H-29)，0.87(3H，s，H-30)，0.83(3H，s，H-28)，0.79(3H，s，H-26)。13C-NMR(125 MHz，CDCl3)δ:38.2(C-1)，28.3(C-2)，78.6(C-3)，38.6(C-4)，51.1(C-5)，19.2(C-6)，31.3(C-7)，39.8(C-8)，46.7(C-9)，38.5(C-10)，24.8(C-11)，123.6(C-12)，141.7(C-13)，43.6(C-14)，28.3(C-15)，28.0(C-16)，32.3(C-17)，37.0(C-18)，36.5(C-19)，32.2(C-20)，35.7(C-21)，36.2(C-22)，27.1(C-23)，16.5(C-24)，16.5(C-25)，17.7(C-26)，28.9(C-27)，28.7(C-28)，33.4(C-29)，24.6(C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［4］報(bào)道的β-香樹(shù)脂醇的數(shù)據(jù)一致。

化合物2:白色針晶 (石油醚-乙酸乙酯)，mp 138～141℃。EI-MS(m/z):414［M］+，396，381，329，303，255，213，145，55與文獻(xiàn)報(bào)道的β-谷甾醇EI-MS數(shù)據(jù)一致［5］，在薄層色譜多種展開(kāi)系統(tǒng)中與對(duì)照品β-谷甾醇Rf值均相同，與對(duì)照品β-谷甾醇混合熔點(diǎn)不下降，確定為β-谷甾醇。

化合物3:白色粉末 (甲醇)，mp 298～300℃。EI-MS(m/z):414(M+-162)，396，382，329，315，303，275，255，229，213，199，185，173，161，145，133，121，105，85，69，57，43。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:5.32(1H，brs，H-6)，4.21(1H，d，J=8.1 Hz，H-1')，3.64(1H，ddd，J=1.9，5.5，11.5 Hz，H-6'a)，3.46(1H，m，H-3)，3.41(1H，m，H-5')，3.08(1H，ddd，J=4.6，8.8，8.8 Hz，H-3')，3.05(1H，ddd，J=1.8，6.0，11.5 Hz，H-6'b)，3.01(1H，ddd，J=5.0，8.8，9.2 Hz，H-4')，2.8(1H，ddd，J=4.6，7.8，8.8 Hz，H-2')，0.95(3H，s，H-19)，0.90(3H，d，J=6.9 Hz，H-26)，0.82(3H，t，J=6.3 Hz，H-29)，0.80(3H，d，J=6.9 Hz，H-21)，0.79(3H，d，J=6.9 Hz，H-27)，0.65(3H，s，H-18)。EI-MS和1H-NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6-7］報(bào)道基本一致，故確定為胡蘿卜苷。

化合物4:無(wú)色針晶 (石油醚-乙酸乙酯)，mp 168～170 ℃。EI-MS(m/z):424［M］+，409，314，245，218，205，124，109。1H-NMR(500 MHz，CDCl3)δ:4.69(1H，d，J=2.3 Hz，H-20a)，4.57(1H，d，J=1.1 Hz，H-20b)，2.40(1H，m，H-19)，1.68(3H，s，H-30)，1.31(3H，s，H-28)，1.02(3H，s，H-27)，0.96(3H，s，H-26)，0.93(3H，s，H-25)，0.87(3H，s，H-24)，0.84(3H，s，H-23)。13C-NMR(125 MHz，CDCl3)δ:38.8(C-1)，35.1(C-2)，215.7(C-3)，47.3(C-4)，57.0(C-5)，20.1(C-6)，32.7(C-7)，43.8(C-8)，48.9(C-9)，37.9(C-10)，23.0(C-11)，24.5(C-12)，38.9(C-13)，43.0(C-14)，28.1(C-15)，35.1(C-16)，43.2(C-17)，49.2(C-18)，47.0(C-19)，147.0(C-20)，28.7(C-21)，42.3(C-22)，27.9(C-23)，22.3(C-24)，17.7(C-25)，17.0(C-26)，16.3(C-27)，17.4(C-28)，112.0(C-29)，18.9(C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［8］報(bào)道羽扇20(29)-烯-3-酮的數(shù)據(jù)一致。

化合物5:黃色液體 (石油醚-乙酸乙酯)，EIMS(m/z)292 ［M］+，261，163，149，135，121，108，95，79，67，55，41。1H-NMR(500 MHz，CDCl3)δ:0.97(3H，t，J=7.6 Hz，CH3，C18-H)，1.26～1.34(12H，m，CH2，C3-7-H)，2.04-2.29(4H，m，CH2-C=，C8，17-H)，2.80(4H，t，J=6.0 Hz， =C-CH2-C= ，C11，14-H)，3.63(3H，s，-OCH3)，5.34-5.35(6H，m，CH=)。13C-NMR(125 MHz，CDCl3)δ:174.2(C-1)，34.1(C-2)，25.0(C-3)，28.9(C-4)，29.1(C-5)，29.4(C-6)，29.7(C-7)，27.0(C-8)，130.2(C-9)，127.7(C-10)，25.6(C-11)，128.3(C-12)，128.3(C-13)，25.5(C-14)，127.1(C-15)，131.9(C-16)，20.6(C-17)，14.3(C-18)，51.4(-OCH)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［9-10］基本一致，故鑒定該化合物為 (Z，Z，Z)-9，12，15-十八三烯酸甲酯。

化合物6:淺黃色針晶 (石油醚-乙酸乙酯)，mp 298～300℃。EI-MS(m/z):270［M］+，241，213，153，135，118，89，69，51。1H-NMR(500 MHz，CD3COCD3)δ:8.16(1H，s，H-2)，7.46(2H，d，J=8.0 Hz，H-2'，6')，6.89(2H，d，J=8.0 Hz，H-3'，5')，6.41(1H，brs，H-8)，6.28(1H，brs，H-6)。13C-NMR(125 MHz，CD3COCD3)δ:182.4(C-4)，166.8(C-7)，164.1(C-5)，159.9(C-4')，159.2(C-C-8a)，154.8(C-2)，131.7(2C，C-2'，6')，124.6(C-1')，123.5(C-3)，116.3(2C，C-3'，5')，106.3(C-4a)，100.5(C-6)，95.0(C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［11-12］基本一致，故鑒定該化合物為4'，5，7-三羥基異黃酮。

化合物7:白色粉末 (甲醇)，mp 234～235℃。EI-MS(m/z):130(100，M+-CO)，115，87，70，60，44。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:10.54(1H，brs，NH-1)，8.06(1H，s，NH-3)，5.25(1H，d，J=8.5 Hz，H-4)，6.89(1H，d，J=8.5 Hz，NH-6)，5.80(2H， s， NH2-8)。13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ:157.2(C-2)，62.9(C-4)，174.1(C-5)，157.8(C-7)。根據(jù)以上數(shù)據(jù)及文獻(xiàn)［13］，鑒定該化合物為尿囊素。

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