正交試驗優(yōu)選芩蓮口服液中黃芩苷的提取工藝

唐 亮，宿 威，劉皈陽，馬建麗，周 亮

芩蓮口服液主要由黃芩、穿心蓮等12味中藥組成，具有清熱解毒、散結利咽的作用，主要用于治療急慢性咽炎，作為協(xié)定處方在醫(yī)院使用多年，療效確切。為了便于臨床應用，確保臨床治療效果，筆者綜合考慮其有效成分的性質，以處方中君藥黃芩的有效成分—黃芩苷作為評價指標，應用正交試驗優(yōu)選出合理的提取工藝。

1 儀器與試藥

1200型高效液相色譜儀(美國Agilent公司); AE200型電子天平(瑞士Mettler公司);藥材(購于北京市鶴延齡中藥飲片有限公司，經鑒定符合藥典規(guī)定);黃芩苷標準品(中國藥品生物制品檢定所，批號:715-200111);乙腈為色譜純;其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 芩蓮口服液提取工藝

2.1.1 正交設計表 根據(jù)預試驗，選擇影響提取的主要因素:加水量、浸泡時間、煎煮時間、煎煮次數(shù)作為考察對象，選用 L9(34)正交表進行設計［1-2］。并以黃芩苷含量為評價指標，優(yōu)選最佳提取工藝。結果見表1。

表1 因素水平表

2.1.2 樣品提取方法 按處方量稱取藥材，分別加入不同體積的純凈水，在98℃下提取不同的時間和次數(shù)后，過濾，將濾液減壓濃縮至一定體積，放置過夜、抽濾即得。

2.2 黃芩苷含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱:Agilent Eclipse XDBC18(4.6 mm ×150 mm，5 μm);流動相:甲醇-0.5%冰醋酸溶液(45∶55);流速:1.0 mL/min;檢測波長:277 nm;柱溫:30℃;進樣量:10 μL。在此條件下，黃芩苷與樣品中其他色譜峰分離良好，保留時間約為7 min，理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計算不低于4 000。

2.2.2 對照品溶液的配制 精密稱取在60℃減壓干燥4 h的黃芩苷對照品10.64 mg，置100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度。

2.2.3 供試品溶液的制備 取處方量藥材，按傳統(tǒng)工藝(水煮2次，分別為60 min、40 min)制成口服液。精密量取本品1 mL，置100 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.4 標準曲線的繪制 分別精密吸取黃芩苷對照品溶液0.1、0.2、0.5、1.0、5.0 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻。分別精密吸取上述對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，記錄黃芩苷峰面積。以黃芩苷濃度(X)為橫坐標，對應的峰面積(Y)為縱坐標，繪制標準曲線，回歸方程:Y =33.06 X-0.782 0，相關系數(shù)r=0.999 9。結果表明，在1.064～53.20 μg/mL范圍內，黃芩苷含量與峰面積呈良好線性關系。

2.2.5 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，于室溫下放置，在不同時間段(0、2、4、8、16、24 h)按上述色譜條件進樣測定。結果RSD為1.78%，表明供試品溶液在24 h穩(wěn)定性良好。

2.2.6 精密度試驗 精密吸取供試品溶液，按上述色譜測定條件，重復進樣5次，記錄峰面積，其相對標準偏差RSD為0.32%，結果表明，儀器精密度良好。

2.2.7 重復性試驗 取同一供試品溶液，按照“2.2.2”項下方法提取6份供試品溶液，測定并計算。結果RSD為1.96%，表明方法重現(xiàn)性良好。2.2.8 加樣回收率試驗 精密量取已知含量的同一供試品溶液共6份，加入適量黃芩苷標準品溶液，按“2.1.2”項下方法提取供試品溶液，平均回收率為98.12%，RSD為2.35%(n=6)，表明方法的回收率良好。

2.2.9 樣品含量測定 按“2.1.2”項下方法提取，精密量取各種提取工藝的芩蓮口服液，測定其黃芩苷含量，結果見表2。同時進行方差分析，結果見表3。

表2 正交試驗設計與結果

表3 黃芩苷含量方差分析結果

由表3可知，影響水提效果的主要因素是煎煮時間，其次是煎煮次數(shù)和浸泡時間，加水量影響最小，因此，將其作為誤差估計，用以檢驗其他因素作用的顯著性。芩蓮口服液的水提工藝條件以A2B3C3D2為佳，即料液比為1∶8，浸泡2 h，煎煮2次，每次煎煮2 h。

2.3 優(yōu)選工藝的驗證試驗 按優(yōu)選的工藝進行驗證試驗，測得黃芩苷的含量分別為 67.15、66.28、67.93 μg/mL，測得值與正交表中的試驗結果較為一致，認為驗證結果較為滿意，表明該工藝穩(wěn)定可行。因此，確認芩蓮口服液的最佳工藝條件:料液比為1∶8，浸泡2 h，煎煮2次，每次2 h。

3 討論

從方差分析的F值大小，可以看出影響黃芩苷含量的因素從主到次的排序為提取時間(C)、提取次數(shù)(D)、浸泡時間(B)、加水量(A)。同時，通過比較極差的大小，可以確定最佳工藝條件是A2B3C3D2。本方法試驗結果可為制定芩蓮口服液提取工藝提供可靠依據(jù)。

芩蓮口服液原浸泡1 h，密閉煎煮30 min，過濾、分裝、即得。筆者利用正交設計對原有工藝進行優(yōu)選，確定了最佳工藝，即以水為溶媒進行煎煮，加8倍藥材量的水，浸泡時間2 h，煎煮2次，每次2 h，最佳工藝在驗證試驗中得到較好的驗證，優(yōu)選了工藝，提高了制劑質量，達到預期目的。

［1］ 楊芳，劉高峰，甄立棉.正交實驗法優(yōu)選烏梅透骨口服液提取工藝［J］.醫(yī)藥導報，2010，29(4):508-510.

［2］ 侯林中，張熙潔，王玉，等.正交試驗優(yōu)選寬心口服液醇沉工藝［J］.中國實驗方劑學雜志，2011，17(2):32-34.