實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)在豬病防控中的應(yīng)用

岳孝瑞

（甘肅省正寧縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，正寧 745300）

正寧縣是個(gè)農(nóng)業(yè)縣，畜牧業(yè)在縣域經(jīng)濟(jì)的發(fā)展中占據(jù)著重要的地位。近年來(lái)，隨著規(guī)?；?biāo)準(zhǔn)化養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，正寧縣的養(yǎng)豬從數(shù)量到質(zhì)量都有了質(zhì)的飛躍。但隨著養(yǎng)豬數(shù)量的不斷增長(zhǎng)和飼養(yǎng)環(huán)境的變化，也出現(xiàn)了一些問(wèn)題：主要表現(xiàn)在管理不夠規(guī)范，疫病防治混亂，且呈上升趨勢(shì)。問(wèn)題的存在嚴(yán)重影響和制約著養(yǎng)豬事業(yè)的發(fā)展。加強(qiáng)動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作，完善檢測(cè)手段、提高檢測(cè)水平，是科學(xué)制定防疫計(jì)劃，防控豬病的有效措施，在重大動(dòng)物疫病的診斷及防控中具有不可替代的重要作用。

1 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的作用

1.1 了解和掌握豬群的健康狀況，確診疾病

隨著高科技手段在獸醫(yī)領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用，動(dòng)物疫病檢測(cè)技術(shù)也得到了普及推廣和提升，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)、診斷水平的提高，為防控動(dòng)物疫病提供了重要依據(jù)。通過(guò)病原學(xué)檢測(cè)，可以了解豬群是否攜帶或感染某種病原，定期檢測(cè)血清學(xué)的變化就可以做到防患于未然，及早發(fā)現(xiàn)問(wèn)題，及早采取措施，起到一種預(yù)警的作用；通過(guò)抗體檢測(cè)可以了解豬群的整體免疫狀況，從而為相應(yīng)措施的采取提供依據(jù)。

1.2 預(yù)測(cè)和掌握接種時(shí)間

在動(dòng)物免疫中，恰當(dāng)合理的免疫接種時(shí)間往往是有效免疫的關(guān)鍵。特別是在使用疫苗尤其是活苗的時(shí)候，一定要考慮母源抗體的影響，最可靠和可行的方法就是通過(guò)血清學(xué)檢測(cè)來(lái)測(cè)定母源抗體的消長(zhǎng)，來(lái)確定免疫接種的最佳時(shí)機(jī)。

1.3 檢測(cè)疫苗免疫效果，為制定和修改免疫程序提供依據(jù)

豬群在免疫某種疫苗后通過(guò)定期檢測(cè)，可以了解豬群是否產(chǎn)生抗體、產(chǎn)生抗體水平的高低，從而為免疫程序的制定和修改提供依據(jù)。同時(shí)，在我們的日常業(yè)務(wù)工作中，通過(guò)免疫抗體檢測(cè)，也是考核防疫員免疫工作的依據(jù)。此外，目前市場(chǎng)上疫苗廠家眾多，疫苗質(zhì)量參差不齊，加上疫苗運(yùn)輸、保存、注射等環(huán)節(jié)都會(huì)影響免疫效果，通過(guò)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)可以了解這些疫苗的質(zhì)量和效果，為下一步的疫苗選擇提供參考。

1.4 豬場(chǎng)疫病凈化、根除，建立陰性豬場(chǎng)（群）

對(duì)規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)（戶），針對(duì)某種疫病，通過(guò)定期進(jìn)行病原學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，掌握豬場(chǎng)某種病原的存在情況，確定感染豬群或豬只，從而采取撲殺、隔離、無(wú)害化處理等措施達(dá)到豬群凈化的目的。

2 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的方法及判定

目前實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的方法主要有病原學(xué)檢測(cè)和血清學(xué)檢測(cè)2種。臨床上可以根據(jù)檢測(cè)目的不同分別進(jìn)行選擇。

2.1 病原學(xué)檢測(cè)方法及判定

2.1.1 方法 病原學(xué)檢測(cè)：病毒的分離培養(yǎng)鑒定、反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）、ELISA等。如豬的O型口蹄疫檢測(cè)采集豬頜下淋巴結(jié)用RT-PCR方法進(jìn)行監(jiān)測(cè)，結(jié)果為陽(yáng)性豬，對(duì)陽(yáng)性豬進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查；高致病性豬藍(lán)耳病監(jiān)測(cè)用RT-PCR或熒光RTPCR方法檢測(cè)，對(duì)病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的豬進(jìn)行撲殺，并進(jìn)行無(wú)害化處理。病原學(xué)檢測(cè)操作技術(shù)要求高，結(jié)果判定很難掌握，目前主要由省疫控中心進(jìn)行檢測(cè)。

2.1.2 判定 對(duì)病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的豬，進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，撲殺，并進(jìn)行無(wú)害化處理等。

2.2 血清學(xué)檢測(cè)方法及判定

2.2.1 方法 正向間接血凝試驗(yàn)（IHA）、液相阻斷ELISA、ELISA等。是基層實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)免疫抗體的主要方法，目前使用的也有商業(yè)化的成品試劑盒。

2.2.2 判定 如O型口蹄疫正向間接血凝試驗(yàn)（IHA）：在對(duì)照孔合格的前提下，再觀察待檢血清各孔，以呈現(xiàn)“++”凝集的最大稀釋倍數(shù)為該份血清的抗體效價(jià)。例如1號(hào)待檢血清1～5孔呈現(xiàn)“++”～“+++”凝集，6～7孔呈現(xiàn)“++”凝集，第8孔呈現(xiàn)“+”凝集，第9孔無(wú)凝集，那么就可判定該份血清的口蹄疫抗體效價(jià)為1：128。接種口蹄疫疫苗的豬群免疫抗體效價(jià)達(dá)到1：128（即第7孔）呈現(xiàn)“++”凝集為免疫合格。口蹄疫液相阻斷ELISA試驗(yàn)：以病毒抗原對(duì)照平均D492nm值的50%為臨界值，被檢血清稀釋孔D492mn值大于臨界值的孔為陰性孔，小于或等于臨界值的孔為陽(yáng)性孔，陽(yáng)性孔的D492nm值等于臨界值時(shí)所對(duì)應(yīng)的稀釋度為該份血清的抗體滴度。ELISA抗體滴度與免疫動(dòng)物攻毒保護(hù)的關(guān)系：豬≥1∶64，99%以上保護(hù)；<1∶4不保護(hù)；1∶4～45，50%保護(hù)。

注：《2010年國(guó)家動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)計(jì)劃》：豬瘟免疫抗體檢測(cè)，使用正向間接血凝試驗(yàn)，免疫21 d抗體效價(jià)≥25為免疫合格；使用豬瘟抗體阻斷ELISA檢測(cè)的，抗體陽(yáng)性即為合格。豬O型口蹄疫免疫抗體檢測(cè)，使用正向間接血凝試驗(yàn)，抗體效價(jià)≥25為免疫合格；液相阻斷ELISA檢測(cè)，抗體效價(jià)≥26為免疫合格。

3 加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作的對(duì)策

3.1 提高實(shí)驗(yàn)室工作人員的業(yè)務(wù)技術(shù)能力

正寧縣的獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)人員，業(yè)務(wù)水平還比較低，大多數(shù)人沒(méi)有接受過(guò)較為系統(tǒng)的培訓(xùn)，部分人員對(duì)檢測(cè)操作業(yè)務(wù)不夠熟悉，不能對(duì)檢測(cè)結(jié)果做出正確分析。因此，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有與其從事檢測(cè)活動(dòng)相適應(yīng)的專業(yè)技術(shù)人員和管理人員，加強(qiáng)相關(guān)業(yè)務(wù)培訓(xùn)，所有人員應(yīng)經(jīng)過(guò)嚴(yán)格培訓(xùn)并持證上崗，以保證日常工作的開展。

3.2 提高實(shí)驗(yàn)室的基本管理體系建設(shè)

按照實(shí)驗(yàn)室考核認(rèn)證的基本要求，加強(qiáng)各項(xiàng)管理體系，實(shí)驗(yàn)室要制定一系列規(guī)章制度和一整套生物安全操作手冊(cè)，明確可能遇到的危害，并說(shuō)明減小或消除這些危害的操作程序，并嚴(yán)格監(jiān)督和付諸實(shí)施。充實(shí)和完善各類儀器設(shè)備和器械，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3.3 提高疫病檢測(cè)工作的經(jīng)費(fèi)投入

各級(jí)政府和業(yè)務(wù)主管部門，都要加強(qiáng)對(duì)疫病檢測(cè)工作的經(jīng)費(fèi)投入，最大限度地滿足實(shí)驗(yàn)室各種檢測(cè)試劑和診斷液的購(gòu)置，保證檢測(cè)工作的正常開展。

3.4 提高檢測(cè)樣品采樣技術(shù)和質(zhì)量

根據(jù)檢測(cè)的目的，必須保證所采樣品的時(shí)效性、合理性和樣品質(zhì)量，妥善包裝、運(yùn)輸和保存樣品。防止樣品污染、腐敗和變質(zhì)，因而影響檢測(cè)結(jié)果。

3.5 提高對(duì)動(dòng)物疫病檢測(cè)工作重要性的認(rèn)識(shí)

大力宣傳《中華人民共和國(guó)動(dòng)物防疫法》，貫徹執(zhí)行以“預(yù)防為主”的方針，使轄區(qū)內(nèi)各動(dòng)物飼養(yǎng)場(chǎng)（戶）及其他有關(guān)單位和個(gè)人能充分認(rèn)識(shí)到動(dòng)物疫病檢測(cè)工作的重要性和必要性，自覺(jué)接受動(dòng)物防疫機(jī)構(gòu)的疫病檢測(cè)，促進(jìn)動(dòng)物疫病檢測(cè)技術(shù)的普及推廣和提升。