神農(nóng)架林區(qū)并殖吸蟲(chóng)病自然疫源地調(diào)查＊

朱 敬，朱艷霞，朱名勝，衛(wèi)榮華

神農(nóng)架林區(qū)位于湖北省西北部，北接豫西，西鄰陜西，南與四川毗鄰。全區(qū)海拔在1 000～3 000m，原始森林頗多，調(diào)查區(qū)域海拔多在1 500～2 000m之間，其間野生動(dòng)物繁多，經(jīng)常出沒(méi)在溪谷之間。溪水常年緩流，溪旁雜草叢生，溝底常有淡水螺、蟹孳生。居民多臨溝河居住，食蟹現(xiàn)象極為普遍，因而肺吸蟲(chóng)病病人時(shí)有發(fā)現(xiàn)［1－2］。為了解神農(nóng)架林區(qū)人群肺吸蟲(chóng)病感染情況及流行特征，為控制和防治肺吸蟲(chóng)病提供科學(xué)依據(jù)，本文采用肺吸蟲(chóng)病金標(biāo)滲濾試劑盒（DIGFA－kit）對(duì)神農(nóng)架林區(qū)進(jìn)行人群血清學(xué)調(diào)查和肺吸蟲(chóng)病自然疫源地的分布及蟲(chóng)種進(jìn)行了調(diào)查研究，結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1．1 中間宿主調(diào)查 神農(nóng)架林區(qū)山溪間捕捉溪水蟹、螺，鑒定種類(lèi)。蟹類(lèi)碾碎、人工消化液消化，反復(fù)水洗沉淀，取沉淀物鏡檢囊蚴；螺類(lèi)采用玻片壓碎法鏡檢尾蚴。囊蚴和尾蚴以形態(tài)大小及結(jié)構(gòu)特征作初步蟲(chóng)種鑒定。

1．2 動(dòng)物宿主調(diào)查 采集家貓、家犬等動(dòng)物糞便，經(jīng)水洗沉淀法和直接涂片法鏡檢肺吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵。陽(yáng)性者解剖動(dòng)物，收集肝、肺等臟器或組織檢查成蟲(chóng)和蟲(chóng)卵，收集野生動(dòng)物果子貍、野獾等動(dòng)物肺臟，查找肺吸蟲(chóng)成蟲(chóng)。

1．3 人群感染調(diào)查 1 128份血清標(biāo)本采自神農(nóng)架林區(qū)松柏鎮(zhèn)中、小學(xué)生，男617人，女511人，年齡為6～15歲，平均10．27歲。

1．4 試劑盒 肺吸蟲(chóng)病抗體快速檢測(cè)（金標(biāo)滲濾法）試劑盒由浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所提供；ELISA平行對(duì)照檢測(cè)試劑盒由深圳市綠瀚生物技術(shù)有限公司提供，均在有效期內(nèi)使用。

1．5 試驗(yàn)方法

1．5．1 DIGFA－kit 取試劑盒置一平面上，加洗脫液1滴（100μL），使加樣孔上NC膜濕潤(rùn)；加待測(cè)血清25μL，待滲入；加洗脫液1滴（100μL），洗去未結(jié)合抗體；加膠體金－羊抗人Ig G標(biāo)記物1滴（100 μL），待滲入；加洗脫液2滴（200μL），滲入后肉眼判斷結(jié)果。中央圓孔NC膜上出現(xiàn)紅色圓點(diǎn)為陽(yáng)性；未出現(xiàn)紅色圓點(diǎn)，僅留白色或淡紅色背景為陰性。

1．5．2 ELISA 操作方法和結(jié)果判定按說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行。每次檢測(cè)均設(shè)陽(yáng)性、陰性和空白對(duì)照。血清學(xué)試驗(yàn)抗體陽(yáng)性者作病史調(diào)查。

1．6 動(dòng)物感染蟲(chóng)種鑒定 分離出的囊蚴經(jīng)計(jì)數(shù)后感染健康家犬和大鼠，由院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。犬經(jīng)口飼囊蚴100～300個(gè)／條，大鼠經(jīng)腹腔注射囊蚴20個(gè)／只。感染90 d后分別剖檢肺臟、肝臟及胸腹腔等處，查找成蟲(chóng)蟲(chóng)體，并進(jìn)行蟲(chóng)種鑒定。

2 結(jié) 果

2．1 第一中間宿主分布 在調(diào)查區(qū)境內(nèi)主要水系溪溝捕捉螺類(lèi)，標(biāo)本經(jīng)鑒定為擬釘螺（Tricul a sp．），共解剖1 988只，發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性螺18只，陽(yáng)性率為0．91%，從螺體內(nèi)分離出的子雷蚴為臘腸型，腸管如袋狀，內(nèi)有12個(gè)左右大小不等的短尾蚴，短尾蚴為微尾型，排泄囊為倒三角形，末端可見(jiàn)類(lèi)球形的短尾。

2．2 第二中間宿主分布 所查蟹體中均查出肺吸蟲(chóng)囊蚴，共檢查1 313只蟹，檢出囊蚴4 219個(gè)，平均每只蟹含囊蚴3．21個(gè)，其中鋸齒華溪蟹（Sinopotamon denticul atu m）、光澤華溪蟹（S．davidi）和陜西華西蟹（S．shensiense）每只蟹含囊蚴分別為3．70個(gè)（879／3256）、2．28 個(gè) （361／822）和 1．93 個(gè) （73／141）。囊蚴呈球形或類(lèi)圓形，有兩層囊壁，外壁薄、內(nèi)壁厚，內(nèi)有彎曲的腸盲管2根，在兩盲腸中間有一充滿(mǎn)黑色顆粒的排泄囊；測(cè)量新鮮囊蚴39個(gè)，平均大小為421．48μm×423．76μm。

2．3 動(dòng)物宿主感染情況 共檢查29只家貓糞便，其中15只發(fā)現(xiàn)有肺吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵，蟲(chóng)卵金黃色，形狀多數(shù)不對(duì)稱(chēng)，卵殼厚薄不勻，卵蓋明顯，測(cè)量20個(gè)新鮮蟲(chóng)卵，平均大小為76．44μm×44．24μm，剖檢后獲得斯氏貍殖吸蟲(chóng)成蟲(chóng)47條；收集果子貍肺臟19份，其中3份查獲斯氏貍殖吸蟲(chóng)成蟲(chóng)11條，家貓和果子貍的自然感染率分別為51．72%和15．79%。另檢查15只家犬糞便，3只野獾肺臟，均為陰性。

2．4 人群感染情況 DIGFA－kit檢測(cè)1 128份血清樣本，陽(yáng)性76份（男41人，女35人），陽(yáng)性率為6．74%。ELISA平行對(duì)照陽(yáng)性符合率為98．7%（75／76），檢測(cè)1 052份陰性人群血清均為陰性結(jié)果。陽(yáng)性者中有生吃或半生吃溪蟹者占76．32%（58／76），其余均有飲生水的習(xí)慣。

2．5 動(dòng)物感染蟲(chóng)種鑒定 感染家犬和大白鼠90 d后在糞便中均查獲蟲(chóng)卵，90～120 d剖檢，從肝、肺、胸腔及腹腔中檢獲成蟲(chóng)，新鮮蟲(chóng)體標(biāo)本為粉紅色，蠕動(dòng)活躍，背部隆起，腹面扁平，長(zhǎng)條形。測(cè)量17個(gè)人工感染的新鮮成蟲(chóng)平均大小為6．21 mm×3．38 mm；成蟲(chóng)經(jīng)壓平固定染色后，測(cè)量15個(gè)成蟲(chóng)平均大小為7．88 mm×3．78 mm?？谖P(pán)平均大小為479．32μm×578．56μm，腹吸盤(pán)平均大小為676．12 μm×697．50μm，位于體前1／3，卵巢位于腹吸盤(pán)后方一段距離的一側(cè)，分支細(xì)而多，中心體明顯。睪丸多呈狹長(zhǎng)型，分支簡(jiǎn)單，成蟲(chóng)皮棘以單生型為主。蟲(chóng)體經(jīng)鑒定為斯氏貍殖吸蟲(chóng)（Par agoni mus surj abini）。

3 討 論

斯氏貍殖吸蟲(chóng)是中國(guó)獨(dú)有的并殖吸蟲(chóng)蟲(chóng)種，斯氏貍殖吸蟲(chóng)病主要是生食或半生食含有囊蚴的蟹而感染。調(diào)查結(jié)果表明，湖北省神農(nóng)架林區(qū)自然環(huán)境適宜于斯氏貍殖吸蟲(chóng)各階段宿主的孳生。近年來(lái)經(jīng)本室確診的肺吸蟲(chóng)病病人主要來(lái)自城區(qū)及各縣、市，神農(nóng)架林區(qū)，以及毗鄰的陜西、四川所轄縣市，且多具有幼蟲(chóng)移行癥為特征的斯氏貍殖吸蟲(chóng)病的臨床表現(xiàn)。與陳心陶［3］描述的斯氏貍殖吸蟲(chóng)、鐘慧瀾等［4－5］描述的四川并殖吸蟲(chóng)及會(huì)同并殖吸蟲(chóng)對(duì)人體的致病性類(lèi)似，病人除具有典型的游走性皮下包塊外，還可移行侵犯多個(gè)臟器致?lián)p傷［6－7］。本次調(diào)查神農(nóng)架林區(qū)中、小學(xué)生的感染率為6．74%，且多有食蟹史，第一中間宿主擬釘螺肺吸蟲(chóng)雷蚴和尾蚴感染率為0．91%，第二中間宿主蟹平均每只感染斯氏肺吸蟲(chóng)囊蚴3．21個(gè)，并在人工感染的保蟲(chóng)宿主家犬及大鼠和自然感染的家貓及果子貍體內(nèi)檢獲斯氏貍殖吸蟲(chóng)成蟲(chóng)，初步證實(shí)該地區(qū)有斯氏貍殖吸蟲(chóng)病的流行，為斯氏貍殖吸蟲(chóng)的自然疫源地。

近年來(lái)報(bào)道應(yīng)用衛(wèi)氏并殖吸蟲(chóng)成蟲(chóng)抗原（Pw A）金標(biāo)滲濾試劑盒（DIGFA）檢測(cè)同源肺吸蟲(chóng)病病人血清抗體敏感性可達(dá)98．8%和98．9%，特異性可達(dá)93．0%和94．8%［8－9］，證明應(yīng)用于衛(wèi)氏肺吸蟲(chóng)病流行地區(qū)具有敏感性高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、快速，不需要特殊儀器設(shè)備等優(yōu)點(diǎn)，適用于臨床檢驗(yàn)和現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用。湖北省神農(nóng)架林區(qū)經(jīng)調(diào)查證實(shí)是斯氏貍殖吸蟲(chóng)病流行地區(qū)，本研究中人群血清陽(yáng)性率為6．74%，ELISA平行對(duì)照陽(yáng)性符合率為98．7%，結(jié)果證明DIGFA－kit與ELISA在斯氏肺吸蟲(chóng)病流行地區(qū)亦具有同等的現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用價(jià)值。

神農(nóng)架林區(qū)區(qū)域內(nèi)生態(tài)環(huán)境基本相同，在人群中流行的肺吸蟲(chóng)只有斯氏貍殖吸蟲(chóng)，并且作為一種在野生動(dòng)物之間和家養(yǎng)動(dòng)物與野生動(dòng)物間傳播的人獸共患病，可能會(huì)較長(zhǎng)時(shí)間存在并繼續(xù)保持流行。從自然感染動(dòng)物上看，貓和果子貍在流行病學(xué)上具有一定的意義。家犬人工感染成功率高，但自然感染率低，作為保蟲(chóng)宿主不構(gòu)成肺吸蟲(chóng)病的傳播。由于神農(nóng)架林區(qū)原始森林覆蓋面大等地理環(huán)境因素，可能會(huì)有更多的野生動(dòng)物作為保蟲(chóng)宿主對(duì)本病的流行具有實(shí)際意義。

［1］Zhu MS，Zhu D．Clinical report of 108 cases wit h the paragoni miasis［J］．Sichuan Med J，2004，25（12）：1321．（in Chinese）朱名勝，朱丹．斯氏肺吸蟲(chóng)病108例臨床報(bào)告［J］．四川醫(yī)學(xué)，2004，25（12）：1321．

［2］Guo EP，Zhu J，Zhang GY，etal．Clinical analysis of 53 cases wit h pagu mogoni miasis skrjabini［J］．J Shanxi Med Univ，2008，39（2）：147－149．（in Chinese）郭鄂平，朱潔，張光玉，等．斯氏貍殖吸蟲(chóng)病53例臨床分析［J］．山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，39（2）：147－149．

［3］Chen XT．The discovery of a new species of Par agoni mus and some clinical problems about P．skrj abini category［J］．J Sun Yat－sen Med Coll，1959，192．（in Chinese）陳心陶．肺吸蟲(chóng)一新種的發(fā)現(xiàn)及我國(guó)斯氏貍殖吸蟲(chóng)蟲(chóng)別在臨床上的一些問(wèn)題［J］．中山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1959，192．

［4］Zhong HL，He LY，Cao WQ，etal．A f urther study of lung fl uke life history，preli minary report about using lung trematode miracidia of Sichuan that infect tricula in the laboratory to obtain spor ocyst，REDIA，cercariae［J］．J Parasitol，1969，3：78．（in Chinese）鐘惠瀾，賀聯(lián)印，曹維霽，等．四川肺吸蟲(chóng)生活史的進(jìn)一步研究，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用四川肺吸蟲(chóng)毛蚴感染擬釘螺獲得胞蚴、雷蚴、尾蚴的初步報(bào)告［J］．寄生蟲(chóng)學(xué)報(bào)，1969，3：78．

［5］Zhong HL．A new hu man pat hogenic species of lung fl uke－Paragoni mus hueit ungensis sp．nov［J］．Sci China，1975，（3）：315．（in Chinese）鐘惠瀾．一種對(duì)人體能致病的新種肺吸蟲(chóng)－會(huì)同肺吸蟲(chóng)［J］．中國(guó)科學(xué)，1975，（3）：315．

［6］Zhu MS，Song MH，Wang SJ．Diagnosis and treat ment of 324 cases wit h paragoni miasis in Shiyan，Hubei Province［J］．J Pat hog Biol，2008，3（3）：165．（in Chinese）朱名勝，宋明華，王紹基．湖北省十堰市斯氏貍殖吸蟲(chóng)病324例診治報(bào)告［J］．中國(guó)病原生物學(xué)雜志，2008，3（3）：165．

［7］Zhu MS，Geng JR，Song MH，etal．Pagu mogoni mus skrj abini infection a mong the st udents in Shiyan［J］．Chin J School Healt h，2008，29（7）：611－612．（in Chinese）朱名勝，耿家榮，宋明華，等．十堰地區(qū)學(xué)生斯氏貍殖吸蟲(chóng)感染情況［J］．中國(guó)學(xué)校衛(wèi)生，2008，29（7）：611－612．

［8］Gan XX，Shi XH，Wang Y，etal．Develop ment of rapid diagnostic Kit（Dot Immunogold Filtration Assay）for detection of antibodies against Par agoni mus wester mani［J］．Chin J Zoonoses，2005，21（11）：988－990．（in Chinese）干小仙，施曉華，王越，等．肺吸蟲(chóng)病抗體快速檢測(cè)試劑盒（金標(biāo)滲濾法）的研制和應(yīng)用［J］．中國(guó)人獸共患病雜志，2005，21（11）：988－990．

［9］Ding JZ，Wang Y，Chen JH，etal．Eval uation on the detection of Par agoni mus antibodies by DIGFA［J］．Chin J Zoonoses，2003，19（1）：89－90．（in Chinese）丁建祖，王越，陳軍虎，等．斑點(diǎn)金免疫滲濾法檢測(cè)肺吸蟲(chóng)抗體的評(píng)價(jià)［J］．中國(guó)人獸共患病雜志，2003，19（1）：89－90．