馬立克氏病的研究進(jìn)展及防治策略

譚立紅

（山東省萊西市望城動(dòng)物防疫監(jiān)督站，萊西 266600）

馬立克氏病（marek’s disease，MD）是由皰疹病毒科的細(xì)胞結(jié)合性馬立克氏病病毒（marek’s piseasevirm，MDV）引起的一種高度接觸傳染性、淋巴組織增生性腫瘤病。本病以患雞內(nèi)臟、外周神經(jīng)、性腺、皮膚及眼出現(xiàn)腫瘤為特征。自從火雞皰疹病毒（HVT）疫苗廣泛使用，MD發(fā)生迅速下降，但目前HVT免疫效果下降，雞群不能得到有效保護(hù)，從病雞群中分離到超強(qiáng)毒株。為防制超強(qiáng)毒株對(duì)雞群的危害，1983～1985年國(guó)際上使用雙型雙價(jià)苗，使免疫雞群得到了較好保護(hù)。1995年以來(lái)，免疫后雞群的MD發(fā)病率顯著上升，死亡率達(dá)8%～30%，并且分離出特超強(qiáng)毒株，MDV毒力的不斷強(qiáng)化，給MD的疫苗生產(chǎn)和預(yù)防帶來(lái)了新的挑戰(zhàn)。

1 病原體

1.1 病毒分類

MDV是皰疹病毒科的成員，在雞體內(nèi)以2種形式存在：（1）無(wú)囊膜的病毒顆粒存在于病變組織細(xì)胞中；（2）有囊膜的完整病毒粒子存在于皮膚羽囊上皮細(xì)胞中，可脫離細(xì)胞隨塵埃飛揚(yáng)。

1.2 血清型

應(yīng)用免疫熒光、免疫擴(kuò)散和血清中和試驗(yàn)可將MDV分為3個(gè)血清型：血清Ⅰ型Ⅱ型和Ⅲ型。這3個(gè)血清型毒株，含有共同抗原，也含有型特異性抗原，他們可通過(guò)型特異性血清相鑒別，不同血清型之間還有協(xié)同作用，特別是Ⅰ型和Ⅱ型之間更明顯。

1.3 致病力

不同的MDV分離物，其毒力差異很懸殊，按致病力大小可分為4類：（1）無(wú)致病毒株：不產(chǎn)生肉眼可見(jiàn)的MD病變。（2）低毒株：引起古典型MD毒株，主要引起腳翼神經(jīng)麻痹和性腺病變。（3）強(qiáng)毒株：引起急性MD的毒素，在心臟、皮膚、肌肉內(nèi)出現(xiàn)腫瘤。（4）毒力特強(qiáng)毒株：HVT疫苗對(duì)這類毒素?zé)o免疫預(yù)防作用，其特點(diǎn)是引起高度急性溶血性感染，表現(xiàn)為法氏囊和胸腺萎縮，早期無(wú)腫瘤性死亡，對(duì)抗力強(qiáng)品種，也有比較高的致瘤性；對(duì)HVT免疫雞，尤其是存在母源抗體時(shí)，易造成免疫失敗，HVT對(duì)其抵抗力可由69%下降到18%～10%，可從免疫過(guò)的雞群中分離到超強(qiáng)毒株。管恩平等[1]報(bào)道我國(guó)存在超強(qiáng)毒株。蔣玉雯[2]從用過(guò)HDV疫苗免疫的雞群種分離到國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)毒株GA還強(qiáng)的毒株（MDV-G2），使用二價(jià)苗均不能提供良好的保護(hù)。

2 流行病學(xué)

2.1 易感禽類

主要危害雞，鵪鶉、山雞也有發(fā)病。但近年來(lái)，法國(guó)、以色列陸續(xù)有關(guān)于商業(yè)火雞爆發(fā)MD且死亡率到達(dá)16.5%～80%的報(bào)道，這可能是MDV毒力增強(qiáng)所致，也可能MDV發(fā)生變異使其宿主范圍擴(kuò)大的結(jié)果，這對(duì)火雞業(yè)面臨的一個(gè)新問(wèn)題。

2.2 傳染源

病雞和帶毒雞毛囊上皮能產(chǎn)生大量的具有囊膜的完整病毒，并可脫離細(xì)胞排至外界，污染環(huán)境。因此，脫落的角化毛囊上皮、毛屑和雞舍中的灰塵是最重要的傳染源。其次，病雞和毒雞的分泌物、排泄物也有傳染性。

2.3 傳播途徑

MD具有高度接觸傳染性，通過(guò)直接或間接接觸，經(jīng)氣源傳播。在羽囊上皮細(xì)胞中復(fù)制到MDV，隨羽毛、皮屑排出，隨塵埃經(jīng)呼吸道進(jìn)入機(jī)體，也可經(jīng)消化道進(jìn)入。但MD不可能垂直傳播。

2.4 發(fā)病日齡

自然感染雞8～21周齡發(fā)病，古典型MD感染的雞可早在第3周發(fā)病，但一般以12～18周齡雞發(fā)病率最高。近年來(lái)由于MDV毒力增強(qiáng)，發(fā)病日齡有提前趨勢(shì)，3～4周齡開(kāi)始出現(xiàn)腫瘤，8～9周齡時(shí)已經(jīng)很嚴(yán)重。這一研究成果對(duì)制定蛋用雞和種雞的MD控制策略有重要意義。

3 發(fā)病機(jī)理

3.1 早期溶細(xì)胞感染

MDV侵入雞只體內(nèi)，很快在脾臟、法氏囊和胸腺中增殖并發(fā)生溶細(xì)胞感染，最終導(dǎo)致法氏囊和胸腺萎縮。這一階段發(fā)生在感染后第1～6 d，在這期間，感染雞只不分品系和日齡，感染水平基本一致；強(qiáng)致瘤性毒株比弱致瘤性毒株可引起更嚴(yán)重的溶細(xì)胞感染而導(dǎo)致早期死亡綜合征。

3.2 潛伏感染期

在感染后第6～7 d時(shí)，由于免疫應(yīng)答的出現(xiàn)特別是細(xì)胞免疫的作用，溶細(xì)胞感染轉(zhuǎn)變?yōu)闈摲腥?。潛伏感染是持續(xù)性的，可伴隨宿主終生。絕大部分潛伏感染的細(xì)胞為T細(xì)胞，少部分為B細(xì)胞，但B細(xì)胞的壞死性感染又激活T細(xì)胞反應(yīng)。

3.3 第2次溶細(xì)胞感染

除遺傳抗性品系雞外，易感雞通常在感染后第2～3周由第2階段發(fā)展到第3階段的溶細(xì)胞感染，而且伴隨有持久性的免疫抑制。

3.4 腫瘤細(xì)胞增生期

被病毒感染的淋巴細(xì)胞絕大部分為非生產(chǎn)性感染，最終結(jié)果是產(chǎn)生淋巴性腫瘤。MD腫瘤的來(lái)源也可能是克隆的，因?yàn)閺膶?duì)MDV的DNA在淋巴瘤細(xì)胞基因的隨機(jī)插入研究中發(fā)現(xiàn)，來(lái)源同一淋巴瘤或同一淋巴瘤衍生的細(xì)胞中，其插入位點(diǎn)是相同的。

4 癥狀與病理變化

病雞主要表現(xiàn)位精神萎頓、生長(zhǎng)不均勻、消瘦、消化不良，常不表現(xiàn)特殊癥狀而死亡，有些病雞腿麻痹、翅下垂、頭頸歪斜，常呈“單腿立”姿勢(shì)，有些虹膜褪色，瞳孔邊緣不整。大部分患雞死于腫瘤的并發(fā)癥。主要病變是神經(jīng)損傷和各種器官的淋巴瘤。

5 診斷

5.1 病毒分離

病毒分離不但對(duì)診斷很有價(jià)值，而且對(duì)流行病學(xué)及病原特性的研究至關(guān)重要。MDV初代分離培養(yǎng)一般是將血液淋巴細(xì)胞或淋巴相比的單細(xì)胞懸液接種易感的細(xì)胞培養(yǎng)。

5.2 病毒抗原的血清學(xué)檢測(cè)

此類方法主要用于檢測(cè)包括毛尖和毛囊上皮、溶細(xì)胞感染的淋巴細(xì)胞組織及感染的細(xì)胞培養(yǎng)物等樣品。檢測(cè)方法有熒光抗體法、免疫過(guò)氧化酶法、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。值得注意的是很難在淋巴瘤和潛伏感染的組織中檢測(cè)到MDV抗原。

5.3 聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)

用PCR可以鑒別致弱株、野毒株及腫瘤中的病毒DNA。設(shè)計(jì)出的引物可廣泛應(yīng)用到引起雞各種腫瘤的MDV、網(wǎng)狀內(nèi)皮增生性病毒、淋巴白血病病毒和淋巴增生性病毒的鑒別測(cè)定當(dāng)中。

5.4 DNA探針技術(shù)

以DNA探針通過(guò)DNA點(diǎn)雜交的方法可用于鑒定羽尖提取物中MDV的DNA，通過(guò)原位雜交用于MDV和HVT感染細(xì)胞定位的探針技術(shù)也有報(bào)道。

5.5 外周血淋巴細(xì)胞的端粒酶活性檢測(cè)

端粒酶活性可作為診斷惡性腫瘤模型的生物學(xué)指標(biāo)。

5.6 織形態(tài)學(xué)觀察

雞MD的病原分離和血清學(xué)診斷，只能確定雞是否感染了MDV，不能確定是否發(fā)生了腫瘤。對(duì)病理剖檢不具有特征性的病例則還有通過(guò)病理組織學(xué)觀察才能得出準(zhǔn)確的診斷。

6 防治

養(yǎng)禽業(yè)自20世紀(jì)70年代采用疫苗預(yù)防至今已有幾十年的歷史，但隨著MDV致病性不斷演化，MDV的毒力和致病性不斷增強(qiáng)，所用疫苗從HVT單價(jià)苗發(fā)展到多價(jià)苗。

6.1 免疫接種

疫苗的種類主要有單價(jià)苗、二價(jià)苗、三價(jià)苗及重組DNA疫苗4類。我國(guó)自1978年研究成功HVT疫苗以來(lái)，養(yǎng)雞業(yè)經(jīng)歷了一個(gè)平穩(wěn)的發(fā)展時(shí)期。

6.2 選育抗MDV品種

很早人們就觀察到不同遺傳品系的雞對(duì)MD的易感性是不同的。因此，在研究和再生產(chǎn)上均培育出抗病的雞品系。根據(jù)國(guó)內(nèi)外資料，抗MD雞種選育應(yīng)從3個(gè)途徑入手：（1）從細(xì)胞或分子水平上尋找與MD有關(guān)聯(lián)的標(biāo)記基因或其產(chǎn)物進(jìn)行選擇；（2）利用攻擊MDV幸存雞進(jìn)行擴(kuò)群選育；（3）通過(guò)后裔MDV攻擊試驗(yàn)選留MDV強(qiáng)抗性親本擴(kuò)群選育。

6.3 隔離與衛(wèi)生，避免野毒早期感染

雞對(duì)于MD有日齡抵抗力。1日齡雛雞比14日齡易感性大1 000倍，新生雛進(jìn)場(chǎng)后幾小時(shí)內(nèi)，在免疫力產(chǎn)生之前就不可避免的遭受MDV侵襲。因?yàn)榇嬖谟诿疑掀ぜ?xì)胞中的MDV可隨皮屑漂浮于空氣中長(zhǎng)期存活，剛出殼雛雞吸入含有MDV的空氣就能感染上MD，而注射疫苗后雛雞至少要5～7 d才能產(chǎn)生抗體。故做好孵化室、育雛室及其用具器械的消毒，切斷傳播途徑，以防止雛雞早期感染。

7 小結(jié)

MD是危害養(yǎng)禽業(yè)健康發(fā)展的3種主要疫病之一，也是世界上第1個(gè)能用疫苗來(lái)預(yù)防的腫瘤性疾病。盡管廣泛使用了很多疫苗，但由于MDV毒力的不斷強(qiáng)化，免疫失敗仍頻頻發(fā)生，以及關(guān)于使用血清2型疫苗導(dǎo)致早期感染禽白血病病毒的某些特定遺傳品系的雞發(fā)生淋巴白血病的問(wèn)題，給MD的疫苗預(yù)防和研究帶來(lái)了新的課題。隨著MDV分子生物學(xué)的研究，基因工程疫苗研制成功和應(yīng)用，生物安全措施的不斷加強(qiáng)和飼養(yǎng)管理的不斷完善，必將給MD防制帶來(lái)新的希望。

[1]管恩平.廣西霞煙雞抗馬立克氏病選育報(bào)告[J].廣西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1993，12（1）：57-64

[2]蔣玉雯.用狄高辛標(biāo)記DNA探針對(duì)雞馬立克氏病的流行研究[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，1993，12（1）：230-232