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    血清甘油三酯測定的臨床應(yīng)用

    2012-01-24 23:31:02李雅楠
    關(guān)鍵詞:皂化酶法蒸餾水

    李雅楠

    血清甘油三酯測定的臨床應(yīng)用

    李雅楠

    目前國內(nèi)大醫(yī)院多已采用酶法,由于酶試劑價格高,少數(shù)基層單位仍在應(yīng)用化學(xué)法。血清TG水平可用于高脂蛋白血癥的分類了解機(jī)體內(nèi)TG代謝狀況、早期識別動脈粥樣硬化的危險性、高甘油三酯血癥診斷、代謝綜合征的診斷和降脂藥治療后的監(jiān)測指標(biāo)等。

    甘油三酯;化學(xué)方法;酶法

    全身98%以上的甘油三酯則是貯存在脂肪組織中,甘油三酯的主要生理功能是氧化供能。甘油三酯是CHD的一個獨立危險因子。血清中甘油三酯的含量隨年齡增長而有上升的趨勢,尤其是體重超過標(biāo)準(zhǔn)的中年以上的人往往偏高。進(jìn)食脂肪后,血清中甘油三酯上升,并可出現(xiàn)渾濁,顯示乳糜微粒增多?,F(xiàn)對臨床甘油三酯的臨床測定方法進(jìn)行分析。

    1 血清甘油三酯(TG)測定分類

    1.1 化學(xué)法 用有機(jī)溶劑抽提標(biāo)本中的TG,去除抽提液中的磷脂等干擾物后,用堿水解(皂化)TG,以過碘酸氧化甘油生成甲醛,然后用顯色反應(yīng)測定甲醛。這類方法中比較最準(zhǔn)確的是用氯仿抽提,硅鎂型吸附劑(如Flo-risil)吸附磷脂、皂化及氧化后用變色酸顯色法。此法雖有抽提完全、去除磷脂與甘油、及變色酸顯色靈敏度很高而且呈色穩(wěn)定等優(yōu)點,但因操作步驟繁多不適于日常工作中應(yīng)用[1]。

    1.2 酶法 早期是化學(xué)法結(jié)合酶法,80年代普及全酶法。用單一試劑的甘油磷酸氧化酶(GPO)法,指示反應(yīng)同TC測定,QP用PAP試劑的Trinder反應(yīng)。此法具有酶法的簡速、微量、精密度高的優(yōu)點,而且反應(yīng)特異,易于達(dá)到終點,線性范圍寬,試劑較穩(wěn)定等多種特點。目前國內(nèi)外試劑盒大都采用此法。

    2 方法

    2.1 變色酸顯色法

    2.1.1 試劑 抽提二氯甲烷(HPLC級,乙醇或甲醇為保存劑);生理鹽水(0.9%W/V NaCl);硅酸:用去離子水洗3次,去除細(xì)顆粒,然后用甲醇洗2次,用布氏漏斗過濾,空氣干燥。用煎放入65℃干燥箱至少72h,貯存在干燥器內(nèi)。

    2.1.2 皂化(TG水解成甘油及酸化) 0.25%KOH乙醇液:①制備5%KOH水溶液100m l;②5%KOH 5m l用無水乙醇(USP)稀釋至l00m l,臨用當(dāng)天配制,用超聲波去氣泡。0.1mol/L H2SO4:濃H2SO46.0ml用蒸餾水稀釋至1L。

    2.1.3 自動分析儀用的試劑(氧化、還原、顯色) 過碘酸鈉,溶1.34窯NaIO4于IL蒸餾水中[2]。亞砷酸鈉,溶11.25g NaOH于約100ml蒸餾水中,未冷卻前加125g As2O3(Baker或Fisher分析試劑),最后用蒸餾水稀釋成250m l。

    2.2 酶法

    2.2.1 試劑 甘油三酯液體穩(wěn)定酶試劑組成,GOODs緩沖液(pH 7.2)50mmol/L;脂蛋白脂酶 ≥4000U/L;甘油激酶≥40U/L;磷酸甘油氧化酶≥500U/L;過氧化物酶≥2000U/L;ATP 2.0mmol/L;硫酸鎂 15mmol/L;4-AAP 0.4mmol/L;4-氯酚4.0mmol/L。

    2.2.2 準(zhǔn)確稱取三油酸甘油酯 (平均相對分子質(zhì)量:885.4)200mg加 TritonX-1005ml,用蒸餾水定容至100m l,分裝后,4℃保存,切勿冰凍保存。

    2.2.3 取3支試管混勻后,37℃水浴5min,用分光光度計于500nm波長處以空白管調(diào)零,測各管的吸光度。

    3 臨床意義

    血清TG受生活習(xí)慣、飲食和年齡等多種因素影響,在個體內(nèi)及個體間的波動較大。由于TG的半衰期短(5~15min),進(jìn)食高脂、高糖和高熱量飲食后,TG可明顯增高,且以乳糜微粒的形式存在,后者會使血漿變得渾濁,甚至呈乳糜樣。因此,必須在禁食12~16h后靜脈采集標(biāo)本,以排除和減少飲食的影響[3]。甘油三酯增高:高TG血癥也有原發(fā)的與繼發(fā)的兩類。前者多有遺傳因素,其中包括家族性高TG血癥與家族性混合型高脂(蛋白)血癥等。繼發(fā)的見于糖尿病、糖原累積病、甲狀腺功能不足、腎病綜合征、妊娠、口服避孕藥、酗酒等,但不易分辨原發(fā)或繼發(fā)。

    4 討論

    正常人血清TG濃度平均約0.11mmoL/L,對于變動幅度較大的TG來說,由此引起的誤差是可以忽略的,但有些標(biāo)本中TG明顯增高,以致影響對TG水平的判斷。如TG高而血清不混濁者應(yīng)排除高 TG的可能。酶法測定TG時,脂蛋白脂酶(LPL)除能水解TG外,還能水解甘油一酯和甘油二酯(血清中后兩者約占總TG的3%),亦被計算在TG中,實際上測定的是總甘油酯。酶法測定TG反應(yīng)達(dá)終點時間37℃不應(yīng)超過5min。試劑空白吸光度A500nm≤0.05。酶法測定TG干擾因素與膽固醇測定類同。膽紅素>100μmol/L或抗壞血酸>170μmol/L出現(xiàn)負(fù)干擾。血紅蛋白的干擾是復(fù)雜的。其本身的紅色會引起正干擾。溶血后,紅細(xì)胞中的磷酸酶可水解磷酸甘油產(chǎn)生負(fù)干擾。當(dāng)Hb<l g/L時反映為負(fù)干擾,>1g/L反映出正干擾,但Hb≤2g/L時干擾不顯著,明顯溶血標(biāo)本不宜做TG測定。

    [1] 吳德祥.微波法快速檢測甲種胎兒球蛋白.陜西醫(yī)學(xué)檢驗,1993,8(4):224.

    [2] 梅永煥.用DG3022型酶標(biāo)儀甘油三酯酶法測定.臨檢雜志,1989,7(4):223.

    [3] 錢士勻.臨床生物化學(xué)和生物化學(xué)檢驗實驗指導(dǎo).第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2003:205.

    163001黑龍江省大慶油田總醫(yī)院

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