穩(wěn)定自然殺傷T細(xì)胞相關(guān)的哮喘發(fā)病機(jī)制及iNKT細(xì)胞為靶向的哮喘治療進(jìn)展

辛 琪 李浩嫙

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)，遼寧 沈陽(yáng) 110000）

過(guò)敏性哮喘是一種由吸入外源性過(guò)敏原導(dǎo)致呼吸道黏膜過(guò)度免疫反應(yīng)的復(fù)雜炎癥性疾病。其炎癥狀態(tài)的特點(diǎn)是由氣道高反應(yīng)導(dǎo)致的呼吸道黏膜大量的嗜酸粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞以及肥大細(xì)胞浸潤(rùn)，并伴隨著Th2細(xì)胞因子（IL-4、IL-5、IL-13）參與的T細(xì)胞、B細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞及肥大細(xì)胞的募集和激活過(guò)程。

穩(wěn)定自然殺傷T細(xì)胞（iNKT）已經(jīng)被證明在過(guò)敏性氣道炎癥的動(dòng)物模型及哮喘患者的體內(nèi)起到加強(qiáng)Th2反應(yīng)的作用。本篇綜述將概述iNKT細(xì)胞在哮喘病理生理方面作用的研究進(jìn)展，提出利用糖脂配體及CD1d結(jié)合性脂質(zhì)拮抗劑作用于iNKT細(xì)胞來(lái)治療哮喘這一可能途徑。

1 iNKT細(xì)胞——多潛能免疫調(diào)節(jié)因子

iNKT細(xì)胞是一種獨(dú)特的具有進(jìn)化保守性的T淋巴細(xì)胞，同時(shí)表達(dá)T細(xì)胞受體（TCR）和NK細(xì)胞受體（即鼠NK1.1、Ly49NK、人類(lèi)CD161）。iNKT細(xì)胞通過(guò)穩(wěn)定的TCR-α鏈（小鼠Vα14-Jα18，人類(lèi)Vα24-Jα18）識(shí)別糖脂抗原，與TCR-β鏈通過(guò)一組限制性的Vβ基因相關(guān)聯(lián)。

2 iNKT細(xì)胞與糖脂抗原

iNKT細(xì)胞內(nèi)存在內(nèi)源性和外源性?xún)煞N糖脂配體，分別為內(nèi)源性的iGb3和外源性病原微生物。iNKT細(xì)胞在體內(nèi)連續(xù)暴露于內(nèi)源性的脂質(zhì)抗原（溶酶體糖脂鞘磷脂和iGb3）而被預(yù)激活，并一直保持這一狀態(tài)，通過(guò)如IL-12和Toll樣受體配體等環(huán)境刺激而快速產(chǎn)生調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子，在MHCⅠ樣分子及CD1d的輔助下直接識(shí)別外源性糖脂抗原，特異性的激活傳統(tǒng)T細(xì)胞以控制整個(gè)免疫應(yīng)答。

3 iNKT細(xì)胞與AHR相關(guān)哮喘通路的建立

目前針對(duì)小鼠哮喘模型NKT細(xì)胞的研究已經(jīng)獲得顯著進(jìn)展，Matangkasombut[1]等對(duì)獼猴這種非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物模型進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)也為活化的NKT細(xì)胞直接引起AHR提供了證據(jù)，NKT細(xì)胞在哮喘患者體內(nèi)的研究也證明了其與哮喘發(fā)生的必然關(guān)系。至今，已有充足研究證明哮喘患者的肺泡灌洗液和支氣管內(nèi)膜活檢顯示了NKT細(xì)胞的存在，哮喘患者肺內(nèi)NKT細(xì)胞的水平升高而正常個(gè)體肺內(nèi)NKT細(xì)胞保持在不可檢測(cè)的低水平。

iNKT細(xì)胞以外源性過(guò)敏原依賴(lài)與非依賴(lài)的兩種方式調(diào)節(jié)細(xì)胞因子大量分泌，導(dǎo)致Th1/Th2失衡而誘發(fā)AHR等于哮喘發(fā)生具有密切關(guān)系的病理變化。

Vα24-iNKT細(xì)胞在過(guò)敏性哮喘CCR9高度表達(dá)的同時(shí)經(jīng)外周血產(chǎn)生。CCR9通常表達(dá)在黏膜上，并定植于淋巴細(xì)胞。在無(wú)癥狀或類(lèi)固醇治療有效的情況下，CCR9-iNKT在外周血中呈低水平或明顯的降低趨勢(shì)，而哮喘患者支氣管黏膜可檢測(cè)到CCR9-iNKT細(xì)胞的大量聚集。CCR9的配體CCL25可以促進(jìn)過(guò)敏性哮喘患者肺內(nèi)CCR9表達(dá)iNKT細(xì)胞。CCL25/CCR9相互作用，誘導(dǎo)表達(dá)在iNKT細(xì)胞上CD226的磷酸化，活化iNKT細(xì)胞發(fā)揮生物學(xué)功能。

Akbari[2]等人指出，在經(jīng)αGC加載的CD1d四聚體的識(shí)別下，中重度持續(xù)性哮喘患者體內(nèi)60%的T細(xì)胞是具有穩(wěn)定的T細(xì)胞受體的Vα24-iNKT細(xì)胞。支氣管活檢樣本檢測(cè)揭示所有哮喘患者的固有層淋巴細(xì)胞均有CD4和Vα24穩(wěn)定T細(xì)胞受體的表達(dá)，肺泡灌洗液中大部分則是細(xì)胞。支氣管哮喘患者肺內(nèi)通過(guò)iNKT細(xì)胞循環(huán)中CCR9的選擇性誘導(dǎo)效應(yīng)來(lái)選擇性的招募細(xì)胞產(chǎn)生的Th2細(xì)胞因子IL-4和IL-13。

CD4+-iNKT細(xì)胞與傳統(tǒng)的CD4+T細(xì)胞表達(dá)一部分相同的表型，在某種程度上是不易區(qū)分的。利用輻照后的抗原提呈細(xì)胞在外源性抗原缺乏及IL-2存在的環(huán)境下對(duì)人類(lèi)iNKT克隆株進(jìn)行培養(yǎng)，iNKT細(xì)胞發(fā)揮了選擇性產(chǎn)生IL-5的現(xiàn)象，這揭示了iNKT在引發(fā)嗜酸粒細(xì)胞浸潤(rùn)過(guò)程中的直接作用。

4 iNKT細(xì)胞靶向過(guò)敏性哮喘的治療

4.1 α-半乳糖?；u胺醇（αGC）

αGC是目前發(fā)現(xiàn)的對(duì)iNKT細(xì)胞最有效的外源性糖脂抗原，其免疫調(diào)節(jié)活性已經(jīng)被應(yīng)用于基于免疫的治療性干預(yù)。另外，由于保守TCR的存在，及其在個(gè)體中廣泛的分布、提供多種細(xì)胞因子的巨大能力，如果對(duì)αGC結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾，正確處理iNKT細(xì)胞的多效性，iNKT細(xì)胞很有可能成為自身免疫性疾病、腫瘤及感染性疾病免疫療法的新靶點(diǎn)。

在致敏小鼠第一次抗原激發(fā)前單獨(dú)應(yīng)用靜脈或鼻腔αGC注射可以阻止氣道高反應(yīng)和氣道嗜酸細(xì)胞聚集，減少肺泡灌洗液中IL-4和IL-5的水平以及血清中卵白蛋白特異性IgE的水平[3]。通過(guò)αGC腹腔內(nèi)注射的方法使IL-13及杯狀細(xì)胞增生的現(xiàn)象也得到了抑制[4]。αGC的這種治療作用與肺泡灌洗液中細(xì)胞因子從Th2向Th1的轉(zhuǎn)變相關(guān)，在抗原激發(fā)前應(yīng)用αGC治療可以對(duì)典型哮喘癥狀的發(fā)生起到預(yù)防性保護(hù)作用。

然而，鼻腔注射αGC同時(shí)也具有促進(jìn)AHR產(chǎn)生的副作用。αGC重復(fù)暴露的小鼠可以通過(guò)降低IFN-γ的水平誘導(dǎo)Th2極化，在過(guò)敏原致敏條件下連續(xù)應(yīng)用αGC事實(shí)上提高了血清中抗原特異性IgE的水平，惡化了嗜酸細(xì)胞的肺部浸潤(rùn)。另外，在鼻腔使用αGC本身也可刺激誘發(fā)AHR，促進(jìn)嗜酸細(xì)胞浸潤(rùn)，提高IgE的水平并且促進(jìn)Th2細(xì)胞因子的產(chǎn)生。

4.2 CD1d結(jié)合性脂質(zhì)拮抗劑（DPPE-PEG）

DPPE-PEG是一種CD1d結(jié)合性脂質(zhì)拮抗劑，對(duì)iNKT細(xì)胞依賴(lài)的AHR具有明顯的抑制作用。DPPE-PEG不僅是αGC有效地抑制劑，還可以與αGC競(jìng)爭(zhēng)性的結(jié)合CD1d，直接阻斷αGC誘導(dǎo)的細(xì)胞外調(diào)節(jié)激酶的磷酸化，抑制TCR的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和iNKT細(xì)胞活化。

Vincent Lombardi[5]等人對(duì)卵白蛋白致敏的過(guò)敏性哮喘動(dòng)物模型進(jìn)行DPPE-PEG治療性研究得到，單獨(dú)應(yīng)用DPPE-PEG有效抑制了氣道嗜酸細(xì)胞性炎癥的形成，降低了嗜酸粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的水平；αGC刺激iNKT細(xì)胞分泌細(xì)胞因子這一過(guò)程明顯受到不同濃度DPPE-PEG的抑制；iNKT細(xì)胞對(duì)卵白蛋白特異性MHCⅡ依賴(lài)的Th2反應(yīng)作用微弱。

在關(guān)注iNKT為靶向的哮喘治療所存在的潛在風(fēng)險(xiǎn)的同時(shí)，我們應(yīng)著力探索更多如DPPE-PEG等療效更好，副作用更少的αGC替代物，iNKT細(xì)胞糖脂抗原所具備的多效性將為過(guò)敏性哮喘提供更多可行的治療方法。

[1]Matangkasombut P,Pichavant M,Yasumi T.Direct activation of natural killer T cells induces airway hyperreactivity in nonhuman primates[J].J Allergy Clin Immunol,2008,121(5):1287-1289.

[2]Akbari O,Faul JL,Hoyte EG,et al.CD4+ invariant T-cell-receptor+natural killer T cells in bronchial asthma[J].N Engl J Med,2006,354(11):1117-1129.

[3]Hachem P,Lisbonne M.αGC-induced iNKT cells suppress experimental allergic asthma in sensitized mice: role of IFN-gamma[J].Eur J Immunol,2005,35(10):2793-2802.

[4]Matsuda H,Suda T,Sato J,et al.alpha-Galactosylceramide,a ligand of natural killer T cells,inhibits allergic airway inflammation[J].Am J Respir Cell Mol Biol,2005,33(1):22-31.

[5]Lombardi V,Stock P,Singh AK.A CD1d-Dependent Antagonist Inhibits the Activation of Invariant NKT Cells and Prevents Development of Allergen-Induced Airway Hyperreactivity[J].J Immunol,2010,184(4):2107-2115.