口炎清中酚酸類成分研究

張慧曄，魏孝義，黃琳

（1.廣州白云山和記黃埔中藥有限公司，廣東 廣州 510515；2.中國(guó)科學(xué)院華南植物園，廣東 廣州 510615）

口炎清顆粒是廣州白云山和記黃埔中藥有限公司獨(dú)家生產(chǎn)的中藥保護(hù)品種，由山銀花、天冬、麥冬、玄參、甘草5味中藥組成，具有滋陰清熱，解毒消腫的功能。用于陰虛火旺所致的口腔炎癥[1]。本文報(bào)道從口炎清流膏中分離得到4個(gè)有機(jī)酸成分：咖啡酸（1）、綠原酸（2）、3，5-二咖啡?？鼘幩幔?）和3，4-二咖啡?？鼘幩幔?），為君藥山銀花的主要成分。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1200色譜儀，日本SHIMADZU公司LC-6AD／RID-10A，色譜柱為YMC-Pack ODS（250 mm×4.6 mm，250 mm×20 mm）。柱色譜用硅膠（100～200目，青島海洋化工有限公司）；柱色譜反相硅膠[十八烷基硅醚，Develosil ODS，50μm，日本野村（Nomura）化學(xué)株式會(huì)社]；大孔吸附樹(shù)脂（Diaion HP-20，日本三菱化學(xué)株式會(huì)社）；薄層色譜板（煙臺(tái)江友硅膠開(kāi)發(fā)有限公司）；反相（RP-18）TLC板[德國(guó)默克（Merck）公司]。核磁共振波譜用Bruker DRX-400核磁共振儀測(cè)定，以TMS為內(nèi)標(biāo)。電噴霧質(zhì)譜（ESIMS）用 MDS SCIEX API 2000 LC／MS／MS儀，以甲醇為溶劑，直接進(jìn)樣測(cè)定。

1.2 試藥

甲醇、丙酮、三氯甲烷和石油醚（60～90℃）：均為分析純，廣州化學(xué)試劑二廠；乙酸乙酯、正丁醇（天津市大茂化學(xué)試劑廠）為分析純；乙腈為色譜純（美國(guó)天地公司，批號(hào)811900），水為重蒸水；其他試劑均為分析純。

口炎清流膏（廣州白云山和記黃埔中藥有限公司提供）。

2 提取和分離

取口炎清流膏12 g，加入甲醇500 mL，超聲處理（功率360 W，頻率35 kHz）30 min，放冷，搖勻，濾過(guò)，濾液減壓回收溶劑，得8 g干膏；經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂柱（120 g），6 L的蒸餾水淋洗，淋洗液棄去，再用甲醇6 L洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮后得甲醇洗脫物；甲醇洗脫物（2.4 g）經(jīng)反相硅膠柱色譜（C18，50μm，25 g），得到10%甲醇水溶液洗脫部分360 mg、20%甲醇水溶液洗脫部分65 mg、30%甲醇水溶液洗脫部分95 mg、40%甲醇水溶液洗脫部分197 mg和50%甲醇水溶液洗脫部分30 mg。10%甲醇水溶液洗脫部分經(jīng) HPLC分析 [乙腈-0.4%磷酸水溶液（13∶87），檢測(cè)波長(zhǎng) 327nm][1]，與綠原酸對(duì)照品對(duì)照顯示10%甲醇水溶液洗脫部分的主要成分為綠原酸，含量為31%；20%甲醇水溶液洗脫部分，將其與咖啡酸對(duì)照品同時(shí)經(jīng)3種薄層系統(tǒng)展開(kāi)、顯色[2]，3種展開(kāi)系統(tǒng)下均顯示20%甲醇水溶液洗脫部分中的主要成分與咖啡酸對(duì)照品的Rf值一致，再經(jīng)HPLC分析 [0.1%甲酸水溶液-乙腈（90∶10）]，與咖啡酸對(duì)照品對(duì)照，顯示20%甲醇洗脫部分的主要成分為咖啡酸，含量為13%；40%甲醇水溶液洗脫部分經(jīng)HPLC制備，乙腈-0.1%甲酸水溶液（20∶80）洗脫，得到化合物3（10 mg）和化合物4（10 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

3.1 化合物3

黃色固體；分子式為C25H24O12；負(fù)離子ESIMSm／z515[M-H]-，353[M-C9H6O3-H]-，191[M-2C9H6O3-H]-，179，135；1H-NMR（600 MHz，CD3OD）：δ7.61（1H，d，J＝16.2Hz，H-7，caffeoyl），7.57（1H，d，J＝15.6Hz，H-7′，caffeoyl），7.06（2H， s， H-2， H-2′， caffeoyl），6.96（2H，dd，J＝8.0 Hz，1.8 Hz，H-6，H-6′，caffeoyl），6.77（2H，d，J＝7.8 Hz，H-5，H-5′，caffeoyl），6.35（1H， d，J＝ 15.6 Hz， H-8，caffeoyl），6.26（1H， d，J＝ 15.6 Hz， H-8′，caffeoyl），5.43（1H，m，H-3，quinic），5.40（1H，m，H-5，quinic），3.97（1H，dd，J＝7.8 Hz，3.0 Hz，H-4，quinic），2.31～2.16（4H，H-2×2，H-6×2，quinic）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）：δ177.6， 168.9， 168.4， 149.69， 149.5， 147.3，147.1，146.8 ×2，128.0，127.8，123.1，123.0，116.5×2，115.6，115.3，115.1×2，74.8，37.7，72.1，70.7，72.6，36.1。數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的3，5-二咖啡?？鼘幩幔?，5-dicaffeoylquinic acid）一致[3-4]。

3.2 化合物4

黃色固體；分子式為C25H24O12；負(fù)離子ESIMSm／z515[M-H]-，353[M-C9H6O3-H]-，191[M-2C9H6O3-H]-，179，135；1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）：δ 7.47（1H，d，J＝16.0Hz，H-7，caffeoyl），7.41（1H，d，J＝16.0Hz，H-7′， caffeoyl）， 7.01 （2H， s， H-2， H-2′，caffeoyl），6.96（2H，d，J＝7.6 Hz，H-6，H-6′，caffeoyl）， 6.78（1H， d，J＝ 8.0 Hz， H-5，caffeoyl）， 6.73（1H， d，J＝ 8.0 Hz， H-5′，caffeoyl），6.24（1H， d，J＝ 16.0 Hz， H-8，caffeoyl），6.13（1H， d，J＝ 16.0 Hz， H-8′，caffeoyl），5.34（1H，m，H-3，quinic），4.94（1H，d，J＝5.6 Hz，H-4，quinic），4.16（1H，m，H-5，quinic），2.14（2H，J＝12.8 Hz，H-2×2，quinic），2.01（1H，m，H-6，quinic），1.87（1H，m，H-6，quinic）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）：δ177.7，168.6，168.3，149.6×2，147.7，147.5，146.7×2，127.7，127.6，123.1×2，116.5×2，115.2×2， 114.8， 114.7， 76.1， 75.8， 69.7， 69.1，39.7，38.5。數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的3，4-二咖啡?？鼘幩幔?，4-dicaffeoylquinic acid）一致[3-4]。

4 結(jié)果和討論

在對(duì)中藥現(xiàn)代化的研究中，張禮和[5]認(rèn)為直接對(duì)中藥復(fù)方進(jìn)行拆方研究，通過(guò)對(duì)各藥材的化學(xué)基礎(chǔ)研究來(lái)篩選活性化合物，有學(xué)者[6-7]認(rèn)為藥物同煎后，其成分不是簡(jiǎn)單的加和，而是發(fā)生了一定的化學(xué)變化，所以表現(xiàn)出藥效的變化，黃成剛[8]則認(rèn)為復(fù)方的多種功效主要是多成分、多系統(tǒng)、多靶點(diǎn)相互作用的結(jié)果。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)口炎清復(fù)方的分離，得到4個(gè)酚酸類成分：綠原酸、咖啡酸、3，4-二咖啡?？鼘幩岷?，5-二咖啡?？鼘幩?；根據(jù)已有文獻(xiàn)報(bào)道，這4種酚酸類成分是山銀花抗菌消炎的主要活性成分[9-12]，從而證明口炎清的抗菌消炎作用與君藥山銀花直接相關(guān)，并為口炎清復(fù)方的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究工作提供了依據(jù)。