HBsAg采用膠體金試紙法檢測(cè)時(shí)的漏檢情況探討

王業(yè)坤

郴州市中心血站，湖南郴州 423000

病毒表面抗原（HBsAg）作為輸血相關(guān)傳染病主要篩查項(xiàng)目之一，廣泛開(kāi)展應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），在經(jīng)血傳播疾病篩查中起到重要作用，如乙肝、丙肝、艾滋、梅毒檢測(cè)等。 并取得顯著成效，其靈敏度和特異性得到國(guó)家認(rèn)可。 同時(shí)我國(guó)作為乙肝大國(guó)，乙肝是無(wú)償獻(xiàn)血不合格比率主要組成部分之一，如能提高在血液采回血站之前的檢出率，將進(jìn)一步降低經(jīng)血傳播的風(fēng)險(xiǎn)，節(jié)約血液資源，降低采供血的各種成本。 隨著目前醫(yī)療科技的進(jìn)一步發(fā)達(dá)，膠體金試紙法因不需特殊檢測(cè)設(shè)備和儀器，方便操作的優(yōu)勢(shì)，在HBsAg 篩查中發(fā)揮了較為重要的作用。但當(dāng)標(biāo)本中HBsAg 在ELISA 酶標(biāo)法測(cè)定時(shí)滴度太高，易有假陰性情況出現(xiàn)，而導(dǎo)致漏檢發(fā)生[1]。對(duì)HBsAg 標(biāo)本為低滴度時(shí)，采用膠體金試紙法進(jìn)行檢測(cè)，因檢測(cè)不出有假陰性情況存在，導(dǎo)致漏診發(fā)生。該研究選擇2011年5—10月該站無(wú)償獻(xiàn)血者標(biāo)本，采用國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口兩種ELISA 酶標(biāo)試劑篩查HBsAg 均為陽(yáng)性的標(biāo)本185 例。分男女兩組分別行膠體金試法檢測(cè)， 對(duì)兩組漏檢資料進(jìn)行回顧性對(duì)比分析， 再與文獻(xiàn)提供的ELISA 酶標(biāo)法提供的漏檢情況進(jìn)行比較，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

該站14 309 例無(wú)償獻(xiàn)血篩查中用國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口兩種試劑HBsAg 均檢測(cè)為陽(yáng)性標(biāo)本185 例。 為無(wú)償獻(xiàn)血者，對(duì)其血清標(biāo)本進(jìn)行膠體金試紙法對(duì)比檢測(cè)。 男性110 例，女性75 例。

1.2 方法

1.2.1 ELISA 酶標(biāo)法 國(guó)產(chǎn)試劑采用珠海麗珠生物工程有限公司生產(chǎn)的（HBsAg）酶標(biāo)試劑盒，進(jìn)口試劑采用意大利索林公司生產(chǎn)的（HBsAg）酶標(biāo)試劑盒，嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)在有效期內(nèi)操作，行實(shí)驗(yàn)同時(shí)均行質(zhì)控檢測(cè)。 結(jié)果評(píng)定：陽(yáng)性為OD 值>cut off 值。 洗板機(jī)：瑞士FAME24/20 型全自動(dòng)酶免儀。 酶標(biāo)儀：瑞士FAME24/20型全自動(dòng)酶免儀。

1.2.2 膠體金試紙法 采用膠體金試紙條， 在試紙條箭頭區(qū)內(nèi)滴2 滴全血，后加1 滴推進(jìn)液，行5 min 靜止后對(duì)結(jié)果進(jìn)行判斷，只1 條紅色對(duì)比線在測(cè)試區(qū)為陰性，2 條為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS13.0 統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 ELISA 酶標(biāo)法

185 例血清標(biāo)本檢測(cè)中，HBsAg 陽(yáng)性185 例。

2.2 膠體金試紙法

185 例血清標(biāo)本檢測(cè)中，110 例男性樣品中HBsAg 陽(yáng)性65例，陽(yáng)性率為59%。 75 例女性樣品中HBsAg 陽(yáng)性40 例，陽(yáng)性率為53%。

HBsAg 陽(yáng)性標(biāo)本采用膠體金試紙法未檢出的80 例采用ELISA 酶標(biāo)法檢測(cè)，OD 值較低，但全部為陽(yáng)性，與cut off 值接近，表明此例標(biāo)本HBsAg 濃度相對(duì)較低。而現(xiàn)有膠體金法對(duì)此例標(biāo)本靈敏度不夠，而造成漏檢。 根據(jù)資料，標(biāo)本中HBsAg 滴度太高，對(duì)原血清采用ELISA 酶標(biāo)法檢測(cè)有后滯現(xiàn)象發(fā)生，而導(dǎo)致漏診出現(xiàn)。

2.3 膠體金試紙法與ELISA 酶標(biāo)法的漏檢情況比較

兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）,兩種方法的漏檢情況比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.4 不同性別組比較

ELISA 酶標(biāo)法105 例陽(yáng)性患者中，膠體金試紙法陽(yáng)性患者中，性別組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹥0.05）。

3 討論

目前，在臨床肝炎病毒中，乙肝發(fā)病率占有較高比例，對(duì)患者的生命健康和社會(huì)穩(wěn)定造成嚴(yán)重影響，人群中受感染的患者慢性攜帶者占10%，且乙肝攜帶患者中大部分將發(fā)展至慢性肝炎，具有較嚴(yán)重的危害型。 據(jù)國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)報(bào)道，目前判斷乙肝患者病情變化以檢測(cè)乙肝二對(duì)半和HBV-DNA 的定量作為治療效果和預(yù)后成效的分析依據(jù)。但由于乙肝二對(duì)半比較復(fù)雜和HBVDNA 的特異性指標(biāo)，檢測(cè)判斷相對(duì)棘手。以往對(duì)乙肝進(jìn)行診斷過(guò)程中，酶聯(lián)免疫法為對(duì)乙肝兩對(duì)半進(jìn)行檢測(cè)的主要方法，但由于檢測(cè)結(jié)果是患者在對(duì)HBV 感染后的免疫狀態(tài)，血清中抗體蛋白存在變性狀況，直接影響檢測(cè)后的結(jié)果。 有報(bào)道采用熒光定量PCR 熒光探針?lè)ǎ‵Q—PCR）進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)，對(duì)反應(yīng)體擴(kuò)增后的熒光信號(hào)進(jìn)行捕捉。 熒光信號(hào)變化到某一值，會(huì)呈循環(huán)狀，利于循環(huán)次數(shù)與DNA 量進(jìn)行定量，有效對(duì)乙肝病毒本身進(jìn)行檢測(cè)。 采用此方法可直接可靠的對(duì)HBV 復(fù)制情況進(jìn)行反應(yīng)，成為有效的判斷依據(jù)。 相關(guān)研空顯示[2]，采用ELISA 進(jìn)行乙肝兩對(duì)半進(jìn)行檢測(cè)的幾種常見(jiàn)模式中，大三陽(yáng)患者有較高的PCR 檢測(cè)符合率，小三陽(yáng)符合率表現(xiàn)普通。 表明HBeAb 有較低的復(fù)雜HBV能力。 在PCR 法檢測(cè)之下，檢測(cè)出患者有較低的病毒復(fù)制，小三陽(yáng)對(duì)乙肝病毒的復(fù)制變化情況表現(xiàn)不明顯。 通過(guò)酶聯(lián)免疫法檢測(cè)乙肝二對(duì)半為全陰，在PCR 法檢測(cè)的時(shí)候，在PCR 的高靈敏度檢測(cè)之下，可以檢測(cè)變異的HBV 變異體，彌補(bǔ)酶聯(lián)免疫法的不足。

目前，因膠體金試紙條法檢測(cè)快速，操作方便，在大量樣本現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)中較為適用，膠體金試紙法有較低敏感性，HBsAg 低濃度陽(yáng)性標(biāo)本敏感度低，有較高漏檢率，ELISA 酶標(biāo)法相對(duì)敏感，0.1～0.2 ng/mL 的HBsAg 采用ELISA 酶標(biāo)法即可檢測(cè)，有較低漏診率，但該研究結(jié)果中，ELISA 酶標(biāo)法14 309 例無(wú)償獻(xiàn)血者血清標(biāo)本檢測(cè)中，HBsAg 陽(yáng)性185 例，陽(yáng)性率為1.29%。膠體金試紙法185 例ELISA 法陽(yáng)性血清標(biāo)本檢測(cè)中，HBsAg 陽(yáng)性105 例，陽(yáng)性率為56.8%，其中假陰性80 例，為43.2%。 兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。 膠體金試法檢測(cè)的HBsAg 陽(yáng)性結(jié)果中，與ELISA 法檢測(cè)結(jié)果有差異性，故采用金試紙測(cè)法檢測(cè)容易造成漏診。

目前，在國(guó)內(nèi)采供血機(jī)構(gòu)及各大醫(yī)院中對(duì)血液標(biāo)本檢測(cè)HBsAg 時(shí)通常應(yīng)用ELISA 酶標(biāo)法，但因所用ELISA 酶標(biāo)試劑盒內(nèi)反應(yīng)孔里有一定的抗體量包被，各標(biāo)本抗原量存在差異，其OD 值在含量與試劑盒相近時(shí)，與標(biāo)本含量成正比，而抗原在血清中呈較高水平時(shí)，則有后滯現(xiàn)象出現(xiàn)，可導(dǎo)致假陰性發(fā)生，造成漏檢發(fā)生。 故在采用ELISA 酶標(biāo)法對(duì)血清標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，需采用衛(wèi)生部臨檢中心提供的低值質(zhì)控血清測(cè)定值，宜在cut off 值比值2～3 間的ELISA 酶標(biāo)試劑盒為佳，為1 ng/mL。 再聯(lián)合0.5 ng/mL 低界值血清做質(zhì)控，保證HBsAg 檢出低值弱陽(yáng)性標(biāo)本。

總之，臨床采用ELISA 法檢測(cè)無(wú)償獻(xiàn)血者標(biāo)本大概檢出比率在1%～2%，這樣給采供血的質(zhì)量把關(guān)形成很大的壓力，同時(shí)造成很大的采供血物資、檢測(cè)成本、不合格血液處理等成本的上升。 如能將金標(biāo)法作進(jìn)一步的改進(jìn)，提高其檢測(cè)的靈敏度，這樣在采血現(xiàn)場(chǎng)用金標(biāo)法提高乙肝快檢的準(zhǔn)確率，一是節(jié)約了獻(xiàn)血員的血液，降低了實(shí)驗(yàn)室的風(fēng)險(xiǎn)，二是降低了采供血的成本，提高了采供血的質(zhì)量和效率。 故針對(duì)膠體金試紙法和ELISA 檢測(cè)HBsAg 的漏診情況，用膠體金試紙法檢測(cè)陽(yáng)性的標(biāo)本在成一定倍數(shù)稀釋后，采用ELISA 酶標(biāo)法進(jìn)行檢測(cè)，可使對(duì)強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本的漏檢降低，同時(shí)在利用ELISA 酶標(biāo)法對(duì)HBsAg 進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，需應(yīng)用相關(guān)部門(mén)提供的血清臨界值做質(zhì)控，以降低漏檢發(fā)生率。

[1] 李宏杰.膠體金免疫層析試驗(yàn)檢測(cè)HBsAg 等項(xiàng)目與醫(yī)療安全[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)文摘·檢驗(yàn)與臨床，2006，20(6)：321.

[2] 李文新.金標(biāo)法測(cè)HBsAg 漏檢原因分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2004，19(2)：92.