“BACs－on－Beads：5所產(chǎn)前診斷實(shí)驗(yàn)室的前瞻性研究”點(diǎn)評(píng)

劉鵬飛 王謝桐

（山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院婦產(chǎn)科，山東 濟(jì)南 250021）

1 原文摘要

Objective We previously reported on the validation of Prenatal BACs－on－BeadsTMon retrospectively selected and prospective prenatal samples．This bead－based multiplex assay detects chromosome 13，18，21 and X／Y aneuploidies and the nine most frequent microdeletion syndromes．We demonstrated that Prenatal BACs－on－BeadsTMis a newgeneration，prenatal screening tool．Here，we describe the experience of five European prenatal diagnosis laboratories

concerning the ongoing use of Prenatal BACson－BeadsTM．

MethodsSome 1653 samples were analyzed．All results were confirmed by conventional karyotyping or another appropriate technique．All indications for invasive prenatal diagnosis were included．Amniotic fluid and chorionic villus samples were analyzed in equivalent proportions．

ResultsThe failure rate was 3．3%and the overall abnormality detection rate was ～1／10．Eighty－five percent of the detected abnormalities were common aneuploidies．Eleven microdeletions and duplications were identified，thus giving an overall yield for microdeletion and microduplication detection of 1／145．Compared with QF－PCR，Prenatal BACs－on－BeadsTMprovides an additional detection rate of～1／250 for low－risk pregnancies．The false positive and negative rates were both＜1%．

ConclusionWhen associated with conventional karyotyping，the Prenatal BACs－on－BeadsTMassay combines a short turnaround time（typical of rapid aneuploidy detection tests）with valuable detection of the most frequent microdeletion syndromes that cannot be detected in cytogenetic analyses．

2 論文核心內(nèi)容及點(diǎn)評(píng)

該論文發(fā)表在《Prenatal BACs－on－BeadsTM：the prospective experience of five prenatal diagnosis laboratories》雜志2012年第32卷上，BoBs由PerkinElmer在歐洲推出，是一種用于檢測多種遺傳性疾病的新型體外診斷技術(shù)。該文章對歐洲5家不同的產(chǎn)前診斷實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行了一年的實(shí)驗(yàn)室研究。這項(xiàng)研究旨在：①描述及評(píng)估BoBs應(yīng)用于常規(guī)產(chǎn)前診斷的可行性；②估計(jì)這項(xiàng)技術(shù)在不同組有創(chuàng)性產(chǎn)前診斷中的額外診斷量；③計(jì)算目前的假陽性及假陰性率；④就在產(chǎn)前診斷中其他快速分子檢查方法而言，評(píng)估其利弊。下面簡述該文章主要內(nèi)容。

傳統(tǒng)核型分析是有創(chuàng)性產(chǎn)前診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。然而，在過去的20年中，基于非培養(yǎng)性樣本的新的快速非整倍體檢查得到了快速的發(fā)展，并在一些國家進(jìn)入臨床應(yīng)用，這些實(shí)驗(yàn)在48小時(shí)之內(nèi)，為最常見的非整倍體包括13、18、21及X／Y染色體提供檢查結(jié)果。一項(xiàng)新的基于微球的定向分析—產(chǎn)前BACs on Beads（簡稱BoBs）得以發(fā)展起來。產(chǎn)前BoBs檢測是細(xì)胞遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)室用于分析影響新生兒及其家庭的重大遺傳性疾病相關(guān)染色體異常的一種體外診斷新型解決方案。產(chǎn)前BoBs檢查可以通過微量DNA樣品同時(shí)檢測多種染色體異常，并在24小時(shí)之內(nèi)獲取結(jié)果。此外，該技術(shù)可同時(shí)分析40個(gè)以上的樣品，從而實(shí)現(xiàn)高通量診斷。產(chǎn)前BoBs檢測是一種通過CE認(rèn)證的分子核型分析技術(shù)，可實(shí)現(xiàn)對相關(guān)的基因組區(qū)域的DNA擴(kuò)增和缺失的目標(biāo)檢測。該檢測可發(fā)現(xiàn)13、18、21、X和 Y 染色體非整倍體，同時(shí)還可檢測9個(gè)微缺失綜合征區(qū)域的DNA拷貝數(shù)的變化情況。使用該檢測獲取的信息比通過其他常用方法獲取的信息更具指導(dǎo)意義。

在此之前基于回顧性選擇的和前瞻性的產(chǎn)前樣本的產(chǎn)前BoBs應(yīng)用的報(bào)道已經(jīng)被發(fā)表。這篇文章則對來自于五家歐洲產(chǎn)前診斷實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)經(jīng)過進(jìn)行了敘述，這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)對1653例樣本進(jìn)行了分析。應(yīng)用BoBs進(jìn)行分析通常只需要150 g DNA，相當(dāng)于從3～5ml羊水或者一個(gè)絨毛獲得的量。從取樣開始24～48小時(shí)之內(nèi)便可得到結(jié)果。所有結(jié)果都經(jīng)過傳統(tǒng)核型分析及其他適當(dāng)手段的證實(shí)。所有關(guān)于創(chuàng)傷性產(chǎn)前診斷的適應(yīng)證（B超發(fā)現(xiàn)異常、孕婦高齡、唐篩高風(fēng)險(xiǎn)、孕婦焦慮、異常父或母方染色體核型等）都包括在內(nèi)。羊水及絨毛膜樣本以對等的比例進(jìn)行了分析（其中，絨毛膜樣本的檢出率為1／8，高于羊水樣本的檢出率1／13）。研究結(jié)果顯示其失敗率為3．3%，文章進(jìn)一步分析其失敗的主要原因包括DNA樣本含量低及技術(shù)操作不當(dāng)?shù)??？傮w來說異常檢出率為1／10，其中常見的非整倍體（21三體所占比率最高，其次是18三體）占到了被檢測到的異常情況的85%。其假陽性率及假陰性率均低于1%。此外，還有11種微缺失或重復(fù)得到了證實(shí)，從而使全部微缺失及微重復(fù)的檢出率達(dá)到1／145。與QF－PCR相比，產(chǎn)前BoBs所用時(shí)間略長，但獲得信息更多，增加了針對于血清學(xué)篩查低危孕婦的1／250的檢出率，使得BoBs具有更高的效價(jià)比及診斷價(jià)值。

同時(shí)，該文章認(rèn)為，由于該項(xiàng)技術(shù)的穩(wěn)健性及多功能性使得這一技術(shù)適于向缺少細(xì)胞遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)室的發(fā)展中國家引進(jìn)，從而使得患者得以進(jìn)行非整倍體診斷及大部分亞顯微拷貝數(shù)變異的檢測。

該文章為我們產(chǎn)前診斷工作介紹了一種新的方法，這種方法已經(jīng)在歐洲開始應(yīng)用。該方法不僅可以檢測常見的非整倍體異常，而且可以檢測一些常見的微缺失綜合征，是新一代的產(chǎn)前篩查方法。