血漿凝固法胸腹水細(xì)胞塊技術(shù)的臨床應(yīng)用

陳建華，陳 中，丁 博

(萍鄉(xiāng)市湘東區(qū)人民醫(yī)院病理科，江西 萍鄉(xiāng)337016)

血漿凝固法胸腹水細(xì)胞塊技術(shù)的臨床應(yīng)用

陳建華，陳 中，丁 博

(萍鄉(xiāng)市湘東區(qū)人民醫(yī)院病理科，江西 萍鄉(xiāng)337016)

胸腹水；細(xì)胞塊；血漿凝固法；石蠟切片；免疫組化；特殊染色

脫落細(xì)胞病檢是目前各級醫(yī)院病理科的1個工作重點與發(fā)展方向，其中胸腹水細(xì)胞學(xué)檢查在制片與診斷技術(shù)上都存在很大困難。我院研制的血漿凝固法胸腹水細(xì)胞塊技術(shù)在制片方面取得了較好的效果，也提高了診斷質(zhì)量?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本類型 本法適用于各種脫落細(xì)胞檢查，對胸腹水尤其適用。

1.2 器材 細(xì)胞塊制作儀器采用普通低速離心機，試劑采用枸櫞酸鈉抗凝血漿、凝血酶。石蠟切片采用病理科的組織切片程序。

1.3 操作方法

1.3.1 標(biāo)本處理 取10ml胸腹水標(biāo)本液加入試管中，普通離心機3000r/min,離心5min，棄去上層液體，保留沉渣制細(xì)胞塊。

1.3.2 細(xì)胞塊制作 在保留沉渣的試管中加入200～300μl血漿，用小玻棒將沉渣與血漿攪勻；此時還可加入1小滴伊紅著色，便于制蠟塊時看清細(xì)胞塊；然后加入凝血酶試劑200～300μl，立即用小玻棒攪拌3～5s，讓細(xì)胞均勻分布；10～20s后凝塊形成;適當(dāng)增加作用時間凝塊形成得更好。

1.3.3 石蠟切片 搖動試管將上述凝塊倒在小紗布上包好，放入95%乙醇中固定、脫水，當(dāng)作組織塊按病理組織切片程序進行制片。

1.3.4 讀片診斷 結(jié)合細(xì)胞塊片、直接涂片、臨床資料、免疫組化等綜合分析診斷。

2 結(jié)果

2.1 制片效果 本方法制出的細(xì)胞片染色十分清晰，細(xì)胞境界、核膜、核染質(zhì)、核仁清楚，克服了胸腹水沉渣直接細(xì)胞涂片經(jīng)常出現(xiàn)的細(xì)胞模糊現(xiàn)象。本院取了連續(xù)36例胸腹水用沉渣直接涂片法與血漿凝固細(xì)胞塊制片法進行制片效果對照，將片子質(zhì)量按細(xì)胞染色清晰程度分成三個等級：好(細(xì)胞清晰)；一般(細(xì)胞清晰度一般)；差(細(xì)胞不清晰)。兩種方法制片效果對比見表1。

2.2 診斷效果 血漿凝固法細(xì)胞塊技術(shù)制片效果好，細(xì)胞形態(tài)與染色清楚，又便于進行免疫組化與特殊染色，給病理診斷帶來了很大幫助。

表1 36例胸腹水血漿凝固細(xì)胞塊法與沉渣直接涂片法制片效果對比表

3 討論

血漿凝固法細(xì)胞塊技術(shù)的基本原理是血漿中的纖維蛋白原在凝血酶作用下形成纖維蛋白，造成血漿凝固，凝固過程一般需要16～18s[1]。血漿呈液態(tài)，制片過程中與沉渣可以充分混勻，加入液態(tài)的凝血酶試劑后的5s內(nèi)，混合物仍然呈液態(tài)，可以用小玻棒攪勻，使細(xì)胞均勻分布；15s后形成完整的凝塊，適當(dāng)增加作用時間凝塊形成得更好；適度搖動試管后凝塊可以完整的從試管脫落，便于紗布包裹后脫水固定處理；如果凝塊與試管粘得較緊，也可用小玻棒先拔動一下。相比之下，用瓊脂法或蛋清加乙醇法制細(xì)胞塊效果沒有本法好，細(xì)胞塊破碎不整，細(xì)胞分布不均，不易制成完整均勻的細(xì)胞塊。本法采用的血漿與凝血酶成本每例不到1元，檢驗科做凝血功能檢查時每天都會用到。

片子上有效細(xì)胞量的多少也是片子質(zhì)量的重要方面，細(xì)胞太少容易漏診，細(xì)胞太多、片子太厚又影響觀察讀片。本法細(xì)胞量的控制要點在于根據(jù)沉渣的多少調(diào)整血漿與凝血酶的量，如果標(biāo)本細(xì)胞多，沉渣多，就應(yīng)相應(yīng)增加血漿與凝血酶用量，凝塊適當(dāng)做大一點；如果標(biāo)本細(xì)胞較少，沉渣較少，就應(yīng)減少血漿與凝血酶用量，凝塊做小一點，保證單位體積的細(xì)胞含量適當(dāng)；血漿用量應(yīng)與沉渣量相等，凝血酶用量按試劑說明書執(zhí)行。如果標(biāo)本細(xì)胞量很少，可采用更大的試管加入更多的標(biāo)本液離心收集細(xì)胞，或采用多次離心沉渣累加的辦法增加細(xì)胞量。

馬正中教授指出“許多診斷困難的涂片，實際上是涂片制作質(zhì)量不佳造成的”，并提出了質(zhì)量優(yōu)良的涂片的標(biāo)準(zhǔn)，強調(diào)涂片中細(xì)胞結(jié)構(gòu)必須清楚，核膜、染色質(zhì)、核仁等結(jié)構(gòu)必須清晰[2]。本法制作的細(xì)胞片最大的優(yōu)點是細(xì)胞結(jié)構(gòu)十分清楚，滿足馬教授指出的優(yōu)質(zhì)片要求，有利于讀片診斷。必須注意的是，本法的細(xì)胞與直接涂片的細(xì)胞鏡下表現(xiàn)有一定的差異，診斷標(biāo)準(zhǔn)也必須做一定的研究與調(diào)整。細(xì)胞團的立體結(jié)構(gòu)與平面結(jié)構(gòu)的鑒別在細(xì)胞塊片子上困難一些，而在直接涂片上則更容易；細(xì)胞的大小也有差異。

本法適用于所有細(xì)胞學(xué)標(biāo)本病檢，可將細(xì)胞學(xué)病檢納入組織學(xué)病檢程序中工作，便于細(xì)胞學(xué)與組織學(xué)的統(tǒng)一工作安排。

《阿克曼外科病理學(xué)》指出了胸腹水細(xì)胞學(xué)診斷的兩個最困難的問題，即反應(yīng)性間皮和腫瘤性間皮的鑒別，惡性間皮與轉(zhuǎn)移癌的鑒別[3]，并指出了免疫組化與特殊染色在診斷中的一些作用。本法采用石蠟切片，可以連續(xù)大量切片與長期保存，可以做免疫組化等進一步鑒別工作。

[1]熊立凡,李樹仁.臨床檢驗基礎(chǔ)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2005:92.

[2]劉復(fù)生,馬正中.中國腫瘤病理學(xué)分類[M].北京.科學(xué)技術(shù)出版社,2001:619.

[3]Rosaw J.阿克曼外科病理學(xué)[M].第8版.沈陽：遼寧教育出版社,1999：2149.

R446.8，R446.19

B

1674-1129(2012)04-0412-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2012.04.049