PPARγ mRNA在胃癌組織中的表達及其與胃癌預后的關(guān)系

李 強 黨誠學

胃癌是常見的惡性腫瘤，目前胃癌手術(shù)后的預后不佳，嚴重危害著人類健康。過氧化物酶體增殖物激活受體(PPARs)是一類核轉(zhuǎn)錄因子，包括PPARα、PPARβ及PPARγ 3種亞型。近年來研究表明，PPARγ具有調(diào)控腫瘤細胞分化，抑制腫瘤細胞增殖的作用。PPARγ與胃癌發(fā)生、發(fā)展及預后的關(guān)系，目前研究較少。本研究采用實時定量PCR檢測胃癌組織和正常切緣胃組織中PPARγmRNA的表達，并結(jié)合胃癌患者的臨床病理特征及生存資料，探討PPARγ mRNA在胃癌發(fā)生、發(fā)展及預后中的作用。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選取2004年5月～2010年5月陜西省腫瘤醫(yī)院就診的胃癌手術(shù)患者53例作為研究對象。胃癌標本手術(shù)切除后立即取胃癌組織、正常切緣胃組織，快速放置在液氮罐中，-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。胃癌組織標本及正常切緣胃組織均經(jīng)術(shù)后病理檢查證實。53例胃癌患者中，男性38例，女性15例；年齡33～67歲，中位年齡55歲。根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟(UICC) 第6版胃癌TNM分期標準，Ⅰ期7例，Ⅱ期14例，Ⅲ期27例，Ⅳ期5例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移41例，無轉(zhuǎn)移12例。所有患者均行根治性切除，術(shù)前均未行放、化療，術(shù)后行2～6個周期輔助化療，中位化療周期數(shù)為4個周期。對53例胃癌患者進行隨訪，手術(shù)治療時間作為生存的起始時間，隨訪結(jié)束時間作為終止時間，以死亡作為結(jié)局事件。結(jié)局事件發(fā)生的時間與起始時間之間的時間間隔定義為患者的生存時間。隨訪截止到2011年5月。采取電話和信件隨訪。

1.2 實驗方法

1.2.1 RNA提取和cDNA合成 采用RNAfast200試劑盒提取完整的RNA，按照Ferments(MBI)公司的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA。

1.2.2 PPARγ mRNA檢測 按 Realtime PCR Master Mix (ferments)試劑盒操作說明，在實時PCR儀上進行檢測。以cDNA為模板擴增PPARγ mRNA和β-actin基因。反應(yīng)體系SYBR Green Realtime PCR Master Mix(2×)12.5 μl，正向引物0.5 μl，反向引物0.5 μl，模板DNA 2 μl，加水至25 μl。PPARγmRNA擴增引物：上游引物5’-TGGAATTAGATGACAGCGACTTGG -3’，下游引物5’-AGGACTCAGGGTGGTTCAGC-3’；β-actin擴增引物：上游引物5’-ATCGTGCGTGACATTAAGGAGAAG-3’,下游引物5’-AGGAAGGAAGGCTGGAAGAGTG-3’。反應(yīng)條件：50℃ 2 min，95℃ 10 min,95℃ 15 s,60℃ 30 s，72℃ 30 s，共40個循環(huán)。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理 用2-△△Ct法處理實時定量PCR所測數(shù)值(Ct值)，得出PPARγmRNA相對表達量，△△Ct=△Ct實驗組-△Ct對照組；△Ct=△CtPPARγ-△Ctβ-actin。2-△△Ct≥2為高表達，反之為低表達。

1.3 統(tǒng)計學方法

應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析，利用配對t檢驗分析胃癌組織和切緣正常胃組織中PPARγ mRNA表達,獨立樣本的t檢驗分析胃癌組織中PPARγ mRNA表達與臨床病理特征之間的關(guān)系，采用Kaplan—Meier和log rank進行生存分析，顯著性檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 PPARγ mRNA 在胃癌組織中的表達

胃癌組織中PPARγ mRNA表達水平為(3.14±2.80)，較切緣正常胃組織(1.03±0.27)高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。胃癌中PPARγ mRNA高表達30例，高表達率為56.6%；PPARγ mRNA低表達23例，低表達率為43.4%。

2.2 胃癌組織中PPARγ mRNA表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

胃癌組織中PPARγ mRNA表達量與胃癌的TNM分期有關(guān)(P=0.027)，與患者性別、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小及分化程度無關(guān)(P>0.05)(表 1)。

表1 胃癌組織中PPARγmRNA表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 PPARγ mRNA與胃癌患者預后的關(guān)系

53例胃癌患者平均中位生存時間為47個月，PPARγ mRNA高表達的胃癌患者中位生存時間為60個月，PPARγ mRNA低表達的胃癌患者中位生存時間為36個月。Kaplan-Meier曲線分析(圖1)。Log-rank檢驗表明，PPARγ mRNA高表達患者的生存率高于低表達者(P=0.015)。

圖1 胃癌PPARγ mRNA不同表達水平組患者的生存曲線(月)

3 討論

胃癌是常見的惡性腫瘤，2008年全世界新增胃癌患者，占全部腫瘤的7.8%[1]。目前，胃癌患者的主要治療手段是手術(shù)治療，但患者術(shù)后的生存期并不樂觀，其死亡率僅次于肺癌、肝癌，全球每年新發(fā)胃癌病例41%發(fā)生在中國；中國占全球每年胃癌死亡人數(shù)的35%[2]。

近年來,胃癌的分子生物學和發(fā)病機制的研究揭示了胃癌是1種異質(zhì)性腫瘤,腫瘤的個體化治療日益受到重視。傳統(tǒng)的胃癌預后指標TNM分期，已無法滿足個體化治療的要求。

隨著分子生物學的研究進展，過氧化物酶體增殖物激活受體( PPARs)與腫瘤的關(guān)系越來越引起人們的重視。過氧化物酶體增殖物激活受體(PPARs)，是一類核轉(zhuǎn)錄超家族,它對基因的表達具有調(diào)節(jié)和轉(zhuǎn)錄作用，因而它調(diào)節(jié)著多種生理過程，在一些疾病中扮演著重要角色。它包括PPARα、PPARβ及PPARγ 3種亞型。它們分布在不同的組織中，具有調(diào)節(jié)細胞的生長、分化、凋亡和代謝平衡等多種生物功能。PPARγ是核受體超家族的成員，當被配體激活并與維甲類X受體(retinoid X receptor，RXR)形成異二聚體后，可以結(jié)合位于目標基因上游的過氧化物酶增殖體反應(yīng)元件( peroxisome proliferating response element，PPRE)，調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄。

PPARγ在乳腺、結(jié)腸、肺、卵巢、前列腺，甲狀腺等多種組織中表達。文獻報道PPARγ活化后，通過誘導腫瘤細胞凋亡和阻滯細胞周期等作用來發(fā)揮腫瘤的抑制效應(yīng)[3]。

目前對于PPARγ mRNA與胃癌的生物學特性及預后之間的關(guān)系研究較少。我們采用real-time PCR定量方法測定PPARγ mRNA在胃癌中的表達，結(jié)果顯示PPARγ mRNA在胃癌組織中的表達明顯高于正常組織，與王麗萍[4]、Yao[5]報道的一致。我們的研究結(jié)果表明PPARγmRNA的表達量與TNM分期有關(guān)，和患者的性別、年齡、組織分化、腫瘤大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)。以上研究結(jié)果提示：PPARγ與腫瘤的發(fā)生、腫瘤的進展有關(guān)。

我們通過對PPARγ mRNA表達量和胃癌手術(shù)后生存期的研究發(fā)現(xiàn)，PPARγ mRNA表達量高的患者中位生存期為60個月，PPARγ mRNA表達量低的患者中位生存期達36個月，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。國外學者在對結(jié)腸癌、肺癌、舌癌[6，7]的研究中發(fā)現(xiàn)PPARγ高表達腫瘤患者預后較低表達者好。這表明，PPARγ mRNA表達水平對判斷胃癌預后有重要的臨床意義，是1個有價值的預后指標。

PPAR-γ激動劑在腫瘤細胞系中已經(jīng)顯示出抗腫瘤增殖作用[8，9]。研究表明PPARγ通過多種途徑發(fā)揮腫瘤抑制效應(yīng)，主要包括:①阻滯細胞周期；②誘導細胞凋亡；③抑制炎癥反應(yīng)和血管生成；④抑制腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移。臨床研究[10,11]也顯示接受PPARγ激活劑治療的患者，發(fā)生肺癌的風險低，提示PPARγ具有保護作用。

綜上所述，胃癌組織中PPARγ mRNA的表達與胃癌的分期和預后密切相關(guān)，PPARγmRNA在胃癌組織中的表達，有可能成為1個有用的預后指標，對胃癌的發(fā)展和預后做出準確的判斷，同時發(fā)揮化學預防和治療的作用，更好地進行胃癌的個體化治療。

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