HPLC–ELSD法測定食品中γ-氨基丁酸含量

徐自奧

（安徽省新星藥物開發(fā)有限責(zé)任公司，合肥 230088）

張軍忠

（合肥市廬江縣質(zhì)量監(jiān)督技術(shù)所，合肥 231500）

趙成仕

（安徽國家農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化與監(jiān)測中心，合肥 230051）

HPLC–ELSD法測定食品中γ-氨基丁酸含量

徐自奧

（安徽省新星藥物開發(fā)有限責(zé)任公司，合肥 230088）

張軍忠

（合肥市廬江縣質(zhì)量監(jiān)督技術(shù)所，合肥 231500）

趙成仕

（安徽國家農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化與監(jiān)測中心，合肥 230051）

建立了食品中γ-氨基丁酸的液相色譜蒸發(fā)光散射檢測儀測定方法。該方法用水或10%甲醇提取樣品，正己烷去油脂凈化，然后用液相色譜／蒸發(fā)光散射檢測儀測定。γ-氨基丁酸的濃度在0.01～0.5 mg／mL范圍內(nèi)與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r=0.999 8。食品中γ-氨基丁酸的檢出限為0.01 g／kg，加標(biāo)回收率在90%以上。該方法快速、靈敏、準(zhǔn)確。

γ-氨基丁酸；蒸發(fā)光散射檢測儀；液相色譜法

γ-氨基丁酸（GABA）是一種天然活性成分，廣泛存在于動植物體內(nèi)。植物如豆屬、參屬、中草藥等的種子、根莖和組織液中都含有γ-氨基丁酸。γ-氨基丁酸是一種天然存在的非蛋白組成氨基酸，它是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中很重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，具有極其重要的生理功能，目前在醫(yī)藥、食品、飼料等工業(yè)中已有廣泛應(yīng)用。2009年衛(wèi)生部第12號通告批準(zhǔn)γ-氨基丁酸為新資源食品，使用范圍為飲料、可可制品、巧克力和巧克力制品、糖果、焙烤食品、膨化食品，但不包括嬰幼兒食品。GB 2760-2011［1］中規(guī)定γ-氨基丁酸可以作為食品用合成香料。

γ-氨基丁酸對電化學(xué)和紫外、可見光不靈敏，目前對食品中γ-氨基丁酸的測定主要是采用衍生化-色譜法、衍生化-氨基酸分析法、衍生化-毛細管電化學(xué)法等［2-9］。衍生化法易引入衍生劑、副產(chǎn)物等，影響色譜分離、污染儀器和形成干擾峰，同時難以保證衍生化程度完全一致，直接影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。筆者利用液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測技術(shù)［10］測定食品中的γ-氨基丁酸，該方法無須衍生化等特殊條件，測量精密度和準(zhǔn)確度符合要求。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

超高壓液相色譜儀：Waters?UPLC型，配蒸發(fā)光散射檢測器，美國沃特世公司；

γ-氨基丁酸標(biāo)準(zhǔn)樣品：含量為99%，美國Sigma公司；

乙醇、正己烷：分析純；

乙腈：色譜純；

實驗用水為二次蒸餾水。

1.2 液相色譜條件

色譜柱：Waters超高壓液相色譜柱C18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流動相：水-乙腈（體積比為90∶10）；噴霧器動力：65 %；漂移管溫度：50 ℃；氣體壓力：2.76×105Pa（40 psi）；增益：50。

1.3 實驗方法

一般樣品直接稱取1.00 g試樣，加入10 mL蒸餾水，振蕩混勻，超聲15 min，離心10 min（轉(zhuǎn)速8 000～10 000 r／min），取上清液，用 0.22 mm 濾頭過濾進樣。

含淀粉量大、遇水易成糊狀的樣品，稱取1.00 g試樣，加入10 %甲醇水溶液10 mL，振蕩混勻，于常溫水浴超聲30 min，離心10 min（轉(zhuǎn)速8 000～10 000 r／min），取上清液，用0.22 mm濾頭過濾后進樣。

含油脂的樣品，按照一般樣品處理方法處理，離心后取上清液5 mL，加入正己烷1 mL，劇烈振蕩，取下液過濾進樣。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測器的選擇

由于γ-氨基丁酸的最大紫外吸收波長小于210 nm，沒有熒光，而且對電化學(xué)響應(yīng)不靈敏，液相色譜的紫外檢測器、熒光檢測器和電化學(xué)檢測器等不能用來直接測定，應(yīng)用衍生化技術(shù)則存在衍生物的穩(wěn)定性差的問題。蒸發(fā)光散射檢測器是通用型檢測器，可以檢測沒有紫外吸收的有機物質(zhì)，適用于γ-氨基丁酸的測定。所以最終確定蒸發(fā)光散射檢測器為檢測器。圖1為在測定條件下γ-氨基丁酸的蒸發(fā)光散射色譜圖。

圖1 γ-氨基丁酸的蒸發(fā)光散射色譜圖

2.2 前處理方法

γ-氨基丁酸極易溶于水，一般樣品直接用蒸餾水提取進樣即可。但含淀粉量大的樣品，遇水易成糊狀，采取高速離心等方法效果不理想。采用10 %甲醇水溶液作提取液，試樣不易成糊狀。經(jīng)試驗，γ-氨基丁酸易溶于10 %甲醇水溶液中，在常溫水浴超聲30 min，提取效果較好。遇到含油脂樣品，可以取處理好的上清液，加入正己烷去油脂。

2.3 線性關(guān)系和檢出限

分別精密配制 0.01，0.03，0.06，0.10，0.30，0.50 mg／mL的γ-氨基丁酸溶液，在確定的儀器條件下分析，以γ-氨基丁酸的質(zhì)量濃度X（mg／mL）為橫坐標(biāo)，以γ-氨基丁酸的色譜峰面積Y為縱坐標(biāo)進行線性回歸，得到回歸方程Y=1 774X，回歸系數(shù)r2=0.999 8，表明線性關(guān)系良好。當(dāng)信噪比（S／N）=3時，測得儀器檢出限為 0.001 mg／mL，食品中γ-氨基丁酸的檢出限為0.01 g／kg。

2.4 方法的精密度和回收率

取不含γ-氨基丁酸的食品作為空白基質(zhì)，分別添加0.5 mg／mL標(biāo)液0.2，0.4，1.0 mL共3組，每組6份，進行平行試驗，按照實驗方法進行前處理和儀器分析測定，計算回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表1。由表1可知，該方法的回收率為90%以上，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于4%，表明本法具有較高的測量精密度和準(zhǔn)確度。

表1 方法的精密度和回收率（n=6）

3 結(jié)語

運用蒸發(fā)光散射檢測技術(shù)測定食品中的γ-氨基丁酸，濃度在0.01～0.5 mg／mL范圍內(nèi)線性良好，該方法具有樣品前處理步驟簡單，測定快速、結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏度高等優(yōu)點。

［1］GB 2760-2011 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)［S］.

［2］夏虹，彭茂民，周有祥.發(fā)芽米中γ-氨基丁酸含量的測定［J］.食品與機械，2009，25(4)： 100-102.

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［5］孔令瑤，汪云，曹玉華.毛細管電泳-電化學(xué)法對發(fā)芽黑米胚芽中γ-氨基丁酸含量的檢測［J］.分析測試學(xué)報，2008(5)：527-530.

［6］鄭洪健，葉立斌，勵建榮，等. 2，4-二硝基氟苯柱前衍生RT-HPLC 法測定γ-氨基丁酸［J］.中國糧油學(xué)報，2011，26(4)：104-106.

［7］孔令瑤，汪云，曹玉華，等.毛細管電泳電化學(xué)法對發(fā)芽黑米胚芽中γ-氨基丁酸含量的檢測［J］.分析測試學(xué)報，2008(5)： 527-530.

［8］Tu Yunfei，Yang Xiufang， Zhang Shikang，et al. Determination of theanine andγ-aminobutyric acid in tea by high performance liquid chromatography with precolumn derivatization［J］. Chinese Journal of Chromatography，2012(2)： 184-189.

［9］錢愛萍，顏孫安，林香信，等.氨基酸自動分析儀快速測定γ-氨基丁酸［J］.福建農(nóng)業(yè)學(xué)報，2007(1)： 73-76.

［10］馬莉鋒，周立平，孫佰申，等.HPLC-ELSD法定量分析紅曲霉發(fā)酵樣品中的γ-氨基丁酸［J］.釀酒科技，2004 (6)： 88-89.

Determination ofγ-Aminobutyric Acid in Food by HPLC-ELSD

Xu Ziao
（Anhui New Star Pharmaceutical Development Co.， Ltd， Hefei 230088， China）

Zhang Junzhong
（Hefei Lujiang Municipal Bureau of Quality and Technical Supervision， Hefei 230000， China）

Zhao Chengshi
（Anhui Country Agriculture Standardization and Monitor Center， Hefei 230051， China）

The method of HPLC-ELSD for determination ofγ-aminobutyric acid in food was built，which used water or 10% methyl alcohol for the extraction agent,n-hexane for degreasing purification, and then carried out by HPLC-ELSD.The concentration ofγ-aminobutyric acid appeared good linear relationship with the chromatographic peak area in the range of 0.01-0.05 mg／mL, the correlation coefficient was 0.999 8, the detection limit ofγ-aminobutyric acid was 0.01 g／kg,and the recovery was over 90%. This method was quick, sensitive and accurate.

γ-aminobutyric acid; evaporative light-scattering detector; liquid chromatography

O657.7

A

1008–6145（2012）05–0049–03

doi ：10.3969／j.issn.1008–6145.2012.05.015

聯(lián)系人：趙成仕； E-mail： zhaochengshi2099@126.com

2012-06-16