氣相色譜法測(cè)定活泥鰍中硫丹及其硫酸鹽殘留

孫慧宇 ，陳君義 ，高翔 ，蔣琰 ，王云飛

(1.徐州出入境檢驗(yàn)檢疫局，江蘇徐州 221006； 2.張家港出入境檢驗(yàn)檢疫局，江蘇張家港 215600)

氣相色譜法測(cè)定活泥鰍中硫丹及其硫酸鹽殘留

孫慧宇1，陳君義2，高翔1，蔣琰1，王云飛1

(1.徐州出入境檢驗(yàn)檢疫局，江蘇徐州 221006； 2.張家港出入境檢驗(yàn)檢疫局，江蘇張家港 215600)

建立了檢測(cè)活泥鰍中α-硫丹、β-硫丹及硫丹硫酸鹽殘留量的氣相色譜法。泥鰍樣品經(jīng)過(guò)正己烷-丙酮混合液提取后，轉(zhuǎn)溶至乙腈中，冷凍去脂，再經(jīng)中性氧化鋁小柱凈化處理，用丙酮-正己烷(體積比1∶2)洗脫，洗脫液用氣相色譜-電子捕獲檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍為10～100 ng／mL，相關(guān)系數(shù)不小于0.998，硫丹定量限為3.3 μg／kg，檢出限為1.0 μg／kg。進(jìn)行4.0，8.0和10.0 μg／kg 3個(gè)濃度水平的加標(biāo)回收試驗(yàn)，回收率為91.3%～105.4%。該方法分析成本低，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，能滿足常規(guī)檢測(cè)及食品安全監(jiān)控的需要。

氣相色譜；硫丹；泥鰍

硫丹是一種非內(nèi)吸性高毒有機(jī)氯類殺蟲、殺螨劑，有觸殺和胃毒作用，作為一種高效廣譜殺蟲劑被廣泛用于果樹、茶葉等農(nóng)作物的殺蟲、殺螨。硫丹毒性較高，性質(zhì)穩(wěn)定，不易分解，殘效期長(zhǎng)，能在水域、土壤和生物體內(nèi)富集并長(zhǎng)期儲(chǔ)存，從而導(dǎo)致嚴(yán)重的污染［1］。硫丹主要損害人體中樞神經(jīng)系統(tǒng)的運(yùn)動(dòng)中樞、小腦、腦干以及肝、腎、生殖系統(tǒng)等，可引起驚厥，對(duì)人有致基因突變和致癌作用。最近研究表明，硫丹具有雌激素作用，是一種環(huán)境內(nèi)分泌干擾物［2-3］。

硫丹是α，β兩種異構(gòu)體的混合物，在泥鰍體內(nèi)的主要代謝物為硫丹硫酸鹽。近年來(lái)，隨著泥鰍等水產(chǎn)品在國(guó)際市場(chǎng)上的暢銷，硫丹殘留問(wèn)題也顯得尤為突出。日本自2006年5月開始實(shí)施《肯定列表制度》以來(lái)，在同年的7月份從我國(guó)出口的數(shù)種水產(chǎn)品中檢出硫丹殘留超標(biāo)，涉及的貨物被銷毀或退回，日本也因此啟動(dòng)了對(duì)從中國(guó)進(jìn)口的水產(chǎn)品實(shí)施硫丹監(jiān)控的檢查程序，給我國(guó)的水產(chǎn)品出口造成了嚴(yán)重的影響。日本肯定列表中要求泥鰍中硫丹的最大殘留量(MRL)為4 μg／kg。目前我國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中還沒(méi)有關(guān)于泥鰍中硫丹殘留量的檢測(cè)方法，為了打破對(duì)外貿(mào)易技術(shù)壁壘，水產(chǎn)品中硫丹殘留的快速、靈敏檢測(cè)方法的研究和建立勢(shì)在必行。

目前對(duì)于硫丹殘留量的檢測(cè)方法主要集中在植物類農(nóng)產(chǎn)品方面，對(duì)于含有脂肪等油脂性物質(zhì)的動(dòng)物類產(chǎn)品不適用。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外已陸續(xù)有對(duì)雞蛋［4］、雞肉、豬肉［5］、鰻鱺［6］、水產(chǎn)品［7］、魚組織［8-9］及土壤［10］中的硫丹殘留量進(jìn)行檢測(cè)的報(bào)道，但對(duì)泥鰍樣品的研究不多。文獻(xiàn)中樣品前處理主要是采用凝膠滲透色譜(GPC)，定量主要采用氣相色譜（電子捕獲檢測(cè)器）法 (GC-ECD)［7，8，11］和氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)［12］，這些方法都各有其優(yōu)點(diǎn)。鑒于我國(guó)許多地方實(shí)驗(yàn)室尚未裝備凝膠滲透色譜、氣質(zhì)聯(lián)用儀等設(shè)備，這些方法在我國(guó)的應(yīng)用受到一定限制。筆者選取水產(chǎn)品中基質(zhì)較為復(fù)雜的活泥鰍作為樣本，采用冷凍法去除脂肪，再經(jīng)過(guò)固相萃取凈化后采用氣相色譜測(cè)定其中硫丹及其硫酸鹽的殘留量，該方法簡(jiǎn)便易行，結(jié)果準(zhǔn)確，能滿足各國(guó)的限量要求。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜儀：Agilent 6890型，配ECD檢測(cè)器，美國(guó)安捷倫科技有限公司；

低溫高速離心機(jī)：CFL6RXⅡ型，日本HITACH公司；

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：Buchi-R-210型,瑞士BUCHI公司；

SUPELCO固相萃取儀：12位,德國(guó)CNW公司；

氮吹儀：12位N-EVP型,美國(guó)Organomation公司；

中性氧化鋁小柱：1 g／(3 mL),德國(guó)CNW公司；

α-硫丹、β-硫丹及硫丹硫酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品：德國(guó)Dr.Ehrenstorfer 公司，用色譜級(jí)正己烷配成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；

乙腈、丙酮、無(wú)水硫酸鈉：分析純；正己烷：色譜純。

1.2 樣品前處理

1.2.1 樣品的提取與去脂

稱取絞碎的均勻樣品3.00 g，置于50 mL具塞離心管中，加入丙酮-正己烷(體積比為1∶1)的混合液20 mL，渦旋2 min，混勻，振蕩30 min，以4 000 r／min離心5 min，取上層正己烷提取液，過(guò)無(wú)水硫酸鈉，重復(fù)上述步驟兩次，合并提取液，于40℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干。

用3 mL乙腈溶解提取物3次，合并乙腈提取液于15 mL具塞離心管中，于-18℃冷凍15 min，以4 000 r／min離心5 min，取上層乙腈提取液。加入3 mL乙腈于離心管中渦旋2 min混勻，冷凍，離心，取乙腈提取液。重復(fù)上述操作，合并乙腈提取液，于40℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干。

1.2.2 樣品的凈化

用4 mL正己烷分兩次溶解提取物，過(guò)預(yù)先用5 mL正己烷活化過(guò)的中性氧化鋁SPE小柱，用6 mL丙酮-正己烷(體積比為1∶2)的混合液洗脫，收集洗脫液，用氮?dú)獯蹈桑? mL正己烷溶解定容。樣品溶液經(jīng)有機(jī)相濾膜過(guò)濾后，上機(jī)測(cè)定。

1.2.3 色譜條件

色譜柱：Agilent HP-5毛細(xì)管柱(30 m ×0.3 mm ，0.25 μm)；氮?dú)猓杭兌葹?99.999%，流速為 1.0 mL／min；進(jìn)樣口溫度：250℃；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；檢測(cè)器溫度：300℃；進(jìn)樣量：1 μL。

升溫程序：初始溫度為45℃，保持1 min，以10℃／min升至200℃，再以2℃／min升至230℃，最后以10℃／min升至280℃，保持5 min。

2 結(jié)果與討論

2.1 前處理?xiàng)l件的選擇

硫丹屬于中等極性農(nóng)藥，易溶于丙酮和正己烷，實(shí)驗(yàn)表明，采用丙酮-正己烷(體積比為1∶1)的混合溶劑萃取可獲得理想效果，但這樣會(huì)使泥鰍組織中高含量的油脂幾乎同時(shí)全部被提取出來(lái)，因此要增加去油脂的過(guò)程。

考慮到脂肪和硫丹的熔點(diǎn)存在較大的差別，因此在提取后采用冷凍的方法使脂肪析出，保證硫丹仍溶于有機(jī)溶劑中，再使用中性氧化鋁小柱凈化，可去除殘余的雜質(zhì)。由于乙腈對(duì)大部分農(nóng)藥都有很好的溶解性，但對(duì)油脂的溶解性卻很差，因此當(dāng)丙酮與正己烷混合的提取溶劑被蒸干后，加入乙腈溶解，待測(cè)物可溶于乙腈中，而大部分油脂都沉淀在底部和壁上，通過(guò)冷凍進(jìn)一步降低油脂在乙腈中的溶解度，使被測(cè)物與油脂分離。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，樣品經(jīng)冷凍去脂后再采用中性氧化鋁小柱凈化，不僅去除了殘余脂肪和雜質(zhì)，而且對(duì)回收率的影響也不大。硫丹標(biāo)準(zhǔn)品和泥鰍樣品加標(biāo)后的氣相色譜圖見圖1。

圖1 α-硫丹、 β-硫丹和硫丹硫酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品（a）及泥鰍樣品（b)加標(biāo)氣相色譜圖

2.2 線性關(guān)系及檢測(cè)下限

實(shí)驗(yàn)采用外標(biāo)法定量，將濃度為1 000 mg／L的硫丹標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用色譜純正己烷逐級(jí)稀釋成濃度分別為 10，20，40，60，80，100 ng／mL 的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行色譜測(cè)定，以濃度c(ng／mL)為橫坐標(biāo)，各組分峰面積A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)（r）見表1。

表1 不同待測(cè)組分的線性方程及檢出限

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，硫丹及硫丹硫酸鹽在10～100.0 ng／mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，可以滿足定量分析要求。按照式(1)計(jì)算樣品中硫丹類物質(zhì)的含量：

式中：X——硫丹類物質(zhì)的含量，μg／kg；

c——樣品提取液的質(zhì)量濃度，ng／mL；

V——定容體積，mL；

m——樣品質(zhì)量，g。

按此方法檢測(cè)，硫丹類物質(zhì)在泥鰍中的定量限為 3.3 μg／kg，檢出限為 1.0 μg／kg。

2.3 加標(biāo)回收率和測(cè)量精密度

以陰性泥鰍樣品作為測(cè)試樣品，在4.0，8.0，10.0 μg／kg 3個(gè)濃度水平上進(jìn)行添加回收試驗(yàn)，并按照上述方法進(jìn)行提取、凈化和測(cè)定，在相同條件下每個(gè)水平測(cè)試6個(gè)平行樣，測(cè)定結(jié)果見表2。由表2可知，硫丹及其硫酸鹽的回收率為91.3%～105.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于7%。

表2 泥鰍樣品中不同添加水平的回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）

2.4 方法適用性

利用該方法對(duì)泥鰍樣品進(jìn)行檢測(cè)，在150多批樣品中檢出陽(yáng)性樣品(含量超過(guò)4.0 μg／kg) 3批，其中檢出α-硫丹1批，檢出硫丹硫酸鹽2批，回收率穩(wěn)定。

3 結(jié)論

在不具備凝膠滲透色譜和質(zhì)譜檢測(cè)器的條件下，用氣相色譜（電子捕獲檢測(cè)器）法檢測(cè)活泥鰍中α-硫丹、β-硫丹及硫丹硫酸鹽的殘留量，該方法經(jīng)濟(jì)省時(shí)、結(jié)果準(zhǔn)確，能滿足大部分進(jìn)口國(guó)對(duì)硫丹最大殘留限量的檢測(cè)要求。

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Determination of Endosulfans and Their Metabolites Residues in Live Loach by Gas Chromatography

Sun Huiyu1， Chen Junyi2， Gao Xiang1， Jiang Yan1， Wan g Yunfei1
(1. Xuzhou Entry-Exit Inspection & Quarantine Bureau， Xuzhou 221006， China;2. Zhangjiagang Entry-Exit Inspection & Quarantine Bureau， Zhangjiagang 215600， China)

A gas chromatography method was developed for the analysis ofα-endosulfan,β-endosulfan and endosulfan sulfate residues in live loach. The target compounds were extracted byn-hexane-acetone (volume ratio was 1∶1) from samples,and then distributed in acetonitrile. After being frozen to remove fat and cleaned up with alumina-N column, the extract was eluted with a mixture ofn-hexane-acetone (volume ratio was 2∶1). The eluate was collected and concentrated to 1 mL for analysis. The determination was performed on gas chromatography with electron capture detector, and the external calibration standard was used for quantification. The compounds showed perfect linearity in the range of 10-100 ng／mL withr≥ 0.998,the quantification limit of endosulfans was 3.3 μg／kg, and the detection limit was 1.0 μg／kg. Spiked at levels of 4.0，8.0，10.0 μg／kg, the experiments

a recovery range of 91.3%-105.4%. This method provided accurate results with less time consuming and lower cost, which would meet the requirements of the routine testing and food safety monitoring.

gas chromatography; endosulfans; loach

O657.7

A

1008–6145(2012)05–0046–03

doi ：10.3969／j.issn.1008–6145.2012.05.014

聯(lián)系人：陳君義； E-mail： jylychen2819@163.com

2012-07-18