飼料維生素C添加量對(duì)半滑舌鰨幼魚存活、生長、及組織中抗壞血酸含量的影響＊

李 華，王小潔，麥康森，張文兵，徐 瑋，劉付志國

（中國海洋大學(xué)海水養(yǎng)殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東青島266003）

飼料維生素C添加量對(duì)半滑舌鰨幼魚存活、生長、及組織中抗壞血酸含量的影響＊

李 華，王小潔＊＊，麥康森，張文兵，徐 瑋，劉付志國

（中國海洋大學(xué)海水養(yǎng)殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東青島266003）

在半滑舌鰨（Cynoglossus semilaevis）基礎(chǔ)飼料中添加0、10、50、150、450和1 500mg／kg的維生素C（維生素C多聚磷酸酯形式），制成6種實(shí)驗(yàn)飼料，分別對(duì)初始體質(zhì)量為（4.21±0.02）g（實(shí)驗(yàn)Ⅰ）、（116.93±0.91）g（實(shí)驗(yàn)Ⅱ）2個(gè)規(guī)格各6組半滑舌鰨進(jìn)行10周的攝食生長試驗(yàn)。每組設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)分別60尾（實(shí)驗(yàn)Ⅰ）、18尾（實(shí)驗(yàn)Ⅱ），研究飼料中維生素C對(duì)半滑舌鰨幼魚存活、生長和組織中抗壞血酸含量的影響。結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)Ⅰ中，半滑舌鰨的存活率、增重率、特定增長率和飼料轉(zhuǎn)化率隨著飼料中維生素C添加量增加，有上升趨勢(shì)，但差異不顯著（P＞0.05）。肝臟、腎臟、肌肉中抗壞血酸含量均隨飼料中維生素C添加量增加而顯著上升（P＜0.05）；實(shí)驗(yàn)Ⅱ中，半滑舌鰨的存活率、飼料轉(zhuǎn)化率隨飼料中維生素C添加量增加有上升趨勢(shì)，但差異不顯著（P＞0.05），增重率和特定生長率不受飼料中維生素C顯著影響（P＞0.05）。當(dāng)飼料中維生素C添加量超過50mg／kg時(shí)，隨添加量增加肝臟、腎臟、肌肉中抗壞血酸含量均顯著上升并高于對(duì)照組（P＜0.05）。以上結(jié)果表明在本實(shí)驗(yàn)條件下，半滑舌鰨幼魚基礎(chǔ)飼料中無需添加額外的維生素C即可滿足幼魚正常生長發(fā)育的需要。

半滑舌鰨；維生素C；存活；生長；組織抗壞血酸

維生素C，或稱L－抗壞血酸，在魚類的生長過程中發(fā)揮重要作用［1－2］，可促進(jìn)鐵的吸收，是魚類組織膠原蛋白合成過程中脯氨酸羥基化必需的物質(zhì)，具有廣泛的生理和免疫作用，能夠促進(jìn)養(yǎng)殖動(dòng)物快速生長，緩解養(yǎng)殖魚類的應(yīng)激狀態(tài)，增強(qiáng)機(jī)體抵抗病原微生物感染能力及免疫功能［3－6］。多脊椎動(dòng)物具有合成維生素C的能力，但大多數(shù)魚類由于體內(nèi)缺乏L－古洛內(nèi)酯氧化酶，不能合成維生素C，因而必須從食物中獲?。?］。關(guān)于養(yǎng)殖魚類飼料中維生素C需要量已有不少報(bào)道，這些研究結(jié)果因魚的品種、維生素C劑型及評(píng)價(jià)指標(biāo)不同而不盡一致。

半滑舌鰨（Cynoglossus semilaevis）是我國第1種進(jìn)行人工養(yǎng)殖的舌鰨科魚類，俗稱牛舌頭、鰨目、鰨米、龍利，屬鰈形目Pleuronectiformes、舌鰨科Cynoglossidae，自然分布于我國沿海海區(qū)，以渤海、黃海為多，是名貴的底棲大型魚類［8－10］。目前，由于具有良好的市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)價(jià)值，有“富貴魚”、“海洋中的黃金”之稱［11］。半滑舌鰨生長快，適應(yīng)范圍廣，營養(yǎng)價(jià)值高，是我國北方沿海極具養(yǎng)殖潛力的海水養(yǎng)殖魚類之一。但是，其營養(yǎng)需求研究才剛剛開始起步，目前僅見蛋白質(zhì)需求、飼料中適宜的脂肪及碳水化合物水平［12］，而關(guān)于半滑舌鰨維生素、礦物質(zhì)等微量元素營養(yǎng)需要量的研究還未見報(bào)道。魚類對(duì)維生素C的需求量受不同生長發(fā)育階段的影響。在魚類生長初始階段，其生長迅速，代謝旺盛，因此需要更多的維生素C來維持其正常的生理功能［13］，較大的魚體，由于其體內(nèi)貯存維生素C較多，生長慢，消耗率低，從而導(dǎo)致了較低的維生素C需求量［14］。本實(shí)驗(yàn)研究飼料中維生素C添加水平對(duì)半滑舌鰨2個(gè)規(guī)格幼魚存活、生長及組織中抗壞血酸積累量的影響，以期為半滑舌鰨顆粒飼料配制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)飼料

以魚粉、大豆?jié)饪s蛋白為蛋白源，魚油、豆油、大豆卵磷脂為脂肪源，面粉作為糖源配制基礎(chǔ)飼料（見表1）。在基礎(chǔ)飼料中分別添加相當(dāng)于抗壞血酸含量為0、10、50、150、450和1 500mg／kg的維生素C多聚磷酸酯（LAPP），從而配制出6種實(shí)驗(yàn)飼料，其中基礎(chǔ)飼料中含有維生素C 3.59mg／kg。所有原料經(jīng)粉碎后過60目篩。將所有原料和魚油、豆油、大豆卵磷脂混勻，然后加水制成團(tuán)狀，制成直徑3mm的顆粒后鼓風(fēng)烘干12h，于－20℃冷庫保存?zhèn)溆谩?/p>

表1 基礎(chǔ)飼料配方及其營養(yǎng)成分Table 1 Ingredient and proximate composition of the basal diet

1.2 實(shí)驗(yàn)魚及飼養(yǎng)管理

生長實(shí)驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ分別選用當(dāng)年同一批孵化的規(guī)格一致的半滑舌鰨幼魚，飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)于煙臺(tái)海陽黃海水產(chǎn)有限公司進(jìn)行。試驗(yàn)采用流水養(yǎng)殖系統(tǒng)，流速保持在10L／min左右。實(shí)驗(yàn)開始前先用基礎(chǔ)飼料進(jìn)行馴化，為期2周。實(shí)驗(yàn)開始前，將實(shí)驗(yàn)魚禁食24h。實(shí)驗(yàn)Ⅰ挑選均體質(zhì)量為（4.21±0.2）g的實(shí)驗(yàn)魚隨機(jī)分成6組，每組設(shè)置3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)60尾。每天飽食投喂3次（06：00、14：00和22：00），實(shí)驗(yàn)為期10周。實(shí)驗(yàn)期間水溫變化范圍20～10℃，鹽度變化范圍24～26，溶氧含量≥6mg／L，pH＝7.9～8.0。實(shí)驗(yàn)Ⅱ挑選均體質(zhì)量為（116.93±0.93）g的實(shí)驗(yàn)魚隨機(jī)分成6組，每組設(shè)置3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)18尾。每天飽食投喂2次（06：30和18：30），實(shí)驗(yàn)為期10周。實(shí)驗(yàn)期間水溫變化范圍24.1～18.8℃，鹽度變化范圍24～26，溶氧含量≥6mg／L，pH＝7.9～8.0。

1.3 樣品收集

實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，將魚禁食24h，然后確認(rèn)每個(gè)桶中魚的數(shù)量并稱魚體總質(zhì)量。實(shí)驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ每個(gè)桶分別隨機(jī)取10、5條魚保存于－20℃中，用于魚體成分測(cè)定。然后再從每個(gè)桶中分別隨機(jī)取10、5條魚，保存于－20℃中至組織抗壞血酸分析時(shí)。組織抗壞血酸分析時(shí)冰浴中解剖取其肝臟、腎臟和背部相同部位的肌肉分別測(cè)定抗壞血酸含量。

1.4 樣品分析測(cè)定方法

半滑舌鰨魚體成分測(cè)定參照AOAC［15］的方法：魚體粗蛋白含量采用凱氏自動(dòng)定氮儀測(cè)定，魚體粗脂肪含量采用索氏抽提儀測(cè)定，魚體灰分含量采用馬福爐灼燒24h后測(cè)定，魚體水分含量采用鼓風(fēng)烘箱105℃烘干24h后測(cè)定。

組織中維生素C的測(cè)定參照Ai等的方法進(jìn)行［16］。稱取肝臟或肌肉約2g，腎臟約1g，分別放到50、5mL離心管中，分別加入9、4倍體積預(yù)冷的5%偏磷酸溶液，在冰浴狀態(tài)下勻漿2min，然后離心6min（2 739r／min）。上清液用0.22μm的濾膜過濾后進(jìn)行高效液相色譜分析。儀器為Agilent 1100型HPLC儀，Zobar C18反相色譜柱，4.6nm×250nm。流動(dòng)相為0.05mol／L KH2PO4（用磷酸將pH值調(diào)至3.0），流速為0.6mL／min，檢測(cè)波長為254nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量為20μL。適量的抗壞血酸（Sigma Chemicals Co.）溶解在超純水中作為標(biāo)準(zhǔn)樣品。

1.5 數(shù)據(jù)計(jì)算和統(tǒng)計(jì)方法

存活率SR（%）＝終末尾數(shù)／初始尾數(shù)×100；

增重率WGR（%）＝（末體質(zhì)量－初體質(zhì)量）／初體質(zhì)量×100；

特定生長率SGR＝（ln末體質(zhì)量－ln初體質(zhì)量）／養(yǎng)殖天數(shù)×100；

飼料轉(zhuǎn)化率FER＝魚體增重／飼料攝入量［17］。

采用SPSS 16.0for Windows對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行單因子方差分析（ANOVA），若差異達(dá)到顯著，則進(jìn)行Tukey多重比較（Tukey HSD test），顯著水平為0.05。實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（mean±S.E.，n＝3）。

2 結(jié)果

2.1 半滑舌鰨存活和生長

實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，實(shí)驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ未添加維生素C的飼料組均未發(fā)現(xiàn)活力下降、厭食、脊柱彎曲或鰭下出血等維生素C缺乏癥，但是未添加維生素C的飼料組死亡率升高，隨著飼料中維生素C添加量增加，存活率有上升趨勢(shì)但各處理組沒有顯著差異（P＞0.05）（見表2）。實(shí)驗(yàn)Ⅰ中，魚體增重率、特定增長率和飼料轉(zhuǎn)化率隨著飼料中維生素C添加量增加，有上升趨勢(shì)，但差異不顯著（P＞0.05）。實(shí)驗(yàn)Ⅱ中，飼料轉(zhuǎn)化率隨飼料中維生素C添加量增加有上升趨勢(shì)，但差異不顯著（P＞0.05），增重率和特定生長率無顯著差異（P＞0.05）。

表2 飼料中添加維生素C對(duì)半滑舌鰨存活率、增重率、特定增長率及飼料轉(zhuǎn)化率的影響（平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤，n＝3）Table 2 SR，WGR，SGR and FER of juvenile tonguefish fed the experimental diet for 10weeks（mean±S.E.，n＝3）

2.2 半滑舌鰨水分、粗蛋白、粗脂肪及灰分含量

由表3可以看出，經(jīng)過10周的生長實(shí)驗(yàn)，飼料中不同的維生素C水平對(duì)魚體的水分、粗蛋白、粗脂肪和灰分含量沒有顯著影響（P＞0.05）（見表3）。實(shí)驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ水分含量分別為80.31%～80.87%、76.75%～77.18%，粗蛋白12.97%～13.52%、15.93%～16.91%；粗脂肪在3.94%～4.14%、4.16%～4.49%，灰分1.95%～2.02%、2.18%～2.32%。

表3 飼料維生素C對(duì)半滑舌鰨魚體成分的影響（平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤，n＝3）Table 3 Whole－body composition of tonguefish fed the experimental diet for 10weeks（%fresh weight）（mean±S.E.，n＝3）

2.3 半滑舌鰨組織中抗壞血酸含量

由表4可見，肝臟抗壞血酸含量隨飼料中維生素C添加量增加而顯著上升（P＜0.05），超過50mg／kg添加組的腎臟和肌肉中抗壞血酸含量隨添加量增加顯著上升且顯著高于對(duì)照組和10mg／kg添加組（P＜0.05）；當(dāng)飼料中維生素C添加量超過50mg／kg時(shí)，隨添加量增加肝臟、腎臟、肌肉中抗壞血酸含量均顯著上升并高于對(duì)照組（P＜0.05）。

表4 飼料維生素C對(duì)半滑舌鰨肝臟、腎臟和肌肉中抗壞血酸含量的影響（平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤，n＝3）Table 4 Liver，kidney and muscle ascorbic acid concentrations of tonguefish fed the experimental diet（mean±S.E.，n＝3）

3 討論

對(duì)點(diǎn)帶石斑魚（Epinephelus coioides）［18］、大黃魚（Pseudosciaena crocea）［19］、金頭鯛（Sparus aurata）［20］等的研究表明，飼料中添加維生素C能提高魚體存活率。經(jīng)過10周的生長實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ中，飼料中維生素C添加量的增加提高了半滑舌鰨幼魚的存活率，但影響不顯著（P＞0.05）。對(duì)照組半滑舌鰨幼魚并未出現(xiàn)之前在其它魚類維生素C需要量的研究如斑點(diǎn)叉尾鮰（Ictalurus punctatus）［21］、印度鯉（Cirrhina mrigala）［22］、日本鸚鵡魚（Oplegnathus fasciatus）幼魚［23］和雜交羅非魚（Orechromis niloticus×O.aureus）［24］中報(bào)道的生長不良、攝食下降、脊柱側(cè)凸和脊柱前彎等缺乏癥。本研究中，飼料中添加維生素C對(duì)半滑舌鰨幼魚的生長無顯著影響，這與之前的大西洋鮭（Salmo salar L.）［25］、金頭鯛［20］及大黃魚［19］研究中的結(jié)果相似。Henrique等對(duì)金頭鯛的研究中認(rèn)為，由于對(duì)照組肝臟和脾臟中抗壞血酸含量已經(jīng)消耗到極低水平（脾臟0.5μg／g，肝臟3.5μg／g），故認(rèn)為可能是由于組織中初始儲(chǔ)存量較高，使得在抗壞血酸消耗期仍能保持正常的生理功能，而非因?yàn)樵现泻芯S生素C。Ai等認(rèn)為維生素C對(duì)大黃魚生長影響不顯著的原因有兩點(diǎn)：其一研究中大黃魚SGR相對(duì)較低，代謝率相應(yīng)較低，因此對(duì)維生素C的需求量也相應(yīng)較低；其二研究用大黃魚規(guī)格較大，可能儲(chǔ)存較多的維生素C，因此需要更長的時(shí)間來消耗。本研究對(duì)照組組織中抗壞血酸含量均很低，故生長差異不顯著很可能由于半滑舌鰨幼魚初始組織中抗壞血酸積累量比較大，在10周的實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)足以維持半滑舌鰨的正常生理功能，亦不出現(xiàn)維生素C缺乏癥，而不是基礎(chǔ)飼料中含有的少量維生素C（3.59mg／kg）。因此，建議進(jìn)行更長周期的生長實(shí)驗(yàn)來研究維生素C對(duì)半滑舌鰨的生長的影響。

實(shí)驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ中，對(duì)半滑舌鰨魚體組成的分析表明，2個(gè)規(guī)格魚體中水分、粗蛋白、粗脂肪和灰分含量都不受飼料中維生素C添加水平的影響。這與對(duì)羅非魚（Oreochro misspilurus）［1］、翹嘴紅鲌（Culter alburnus）［26］及軍曹魚（Rachycenlron canadumL.）［27］的研究結(jié)果一致。但對(duì)點(diǎn)帶石斑魚［18］的研究顯示，飼料中維生素C缺乏或過高的均可導(dǎo)致體脂含量下降，這可能是維生素C參與體脂肪代謝的結(jié)果，其作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

肝臟、肌肉及腎臟中的維生素C含量經(jīng)常被用作評(píng)價(jià)魚類維生素C營養(yǎng)狀態(tài)的指標(biāo)［16，19，28－30］。Dabrowski等［32］認(rèn)為維持組織中維生素C穩(wěn)定狀態(tài)所需要的維生素C即為維生素C最適需要量。在本研究中，兩個(gè)實(shí)驗(yàn)半滑舌鰨肝臟、腎臟及肌肉中的維生素C含量均隨著飼料維生素C水平升高而顯著升高，但沒有出現(xiàn)在對(duì)鱸魚（Lateolabrax japonicas）、大西洋鮭、大黃魚等研究中報(bào)道的隨著飼料維生素C添加量增加肝臟維生素C含量增加并最終達(dá)到穩(wěn)定的情況［16，19，21，24－25，31－34］，而Shiau和Hsu也認(rèn)為飼料中維生素C的增加不會(huì)使羅非魚肝臟中維生素C含量達(dá)到比較穩(wěn)定的狀態(tài)［24］。這些差異可能主要是因?yàn)閷?shí)驗(yàn)魚種類、實(shí)驗(yàn)飼料和不同的維生素C添加量所致。這也說明要達(dá)到組織中維生素C穩(wěn)態(tài)，可能需要更高的飼料維生素C添加量。建議今后研究中進(jìn)一步提高維生素C最高添加量，來進(jìn)一步研究飼料中添加維生素C對(duì)組織中抗壞血酸含量的影響。

本實(shí)驗(yàn)條件下，在飼料中添加維生素C對(duì)半滑舌鰨2個(gè)規(guī)格幼魚的存活、生長均沒有產(chǎn)生顯著影響，只顯著提高了組織中抗壞血酸的含量。因此，就存活、生長而言，在本實(shí)驗(yàn)條件下，本基礎(chǔ)飼料配方足以滿足半滑舌鰨2個(gè)規(guī)格幼魚生長發(fā)育的營養(yǎng)需要，無需額外補(bǔ)充維生素C。

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Effects of the Different Levels of Dietary Vitamin C on Survival，Growth and Tissue Ascorbic Acid Concentration in Tonguefish Cynoglossus semilaevis

LI Hua，WANG Xiao－Jie，MAI Kang－Sen，ZHANG Wen－Bing，XU Wei，LIUFU Zhi－Guo
（The Key Laboratory of Mariculture，Ministry of Education，Ocean University of China，Qingdao 266003，China）

This study was conducted to investigate the effect of dietary vitamin C on survival，growth and tissue ascorbic acid concentration in tonguefish（Cynoglossus semilaevis）.0，10，50，150，450and 1500mg／kg vitamin C（L－ascorbyl－2－polyphosphate）were supplemented respectively in basal diet to formulate six practical diets.Two 10－week feeding experiments were carried out using different size of fish（initial body weight：（4.21±0.02）g in ExperimentⅠand（116.93±0.91）g in ExperimentⅡ）.Each diet of the two experiments was randomly fed to triplicate groups of fish which showed apparent satiation in floating water system.Each group was stocked with 60and 18fish respectively in experimentⅠandⅡ.The results showed that：In experimentⅠ：Survival rate，weight gain rate，specific growth rate and feed efficiency ratio showed an increasing tendency with the increase of dietary vitamin C，but without significant difference（P＞0.05）.The ascorbic acid concentrations in liver，kidney and muscle increased significantly with increasing dietary vitamin C（P＜0.05）intake.In experimentⅡ：Survival rate，weight gain rate，specific growth rate and feed efficiency ratio were not influenced significantly by dietary vitamin C.When supplemented with more than 50mg／kg vitamin C，the ascorbic acid concentrations in liver，kidney，and muscle increased significantly with the increase of dietary vitamin C，which significantly higher than the unsupplemented group（P＜0.05）.The results above suggest that，though dietary vitamin C has benificial effect on survival to some extent，it is not necessary to supply extra vitamin C in the basic diet of tonguefish under the present experimental conditions.

Cynoglossus semilaevis；vitamin C；survival；growth；tissue ascorbic acid concentration

S963.73；S965.399

A

1672－5174（2012）1－2－075－06

國家鲆鰈類產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目（nycytx－50－G07）資助

2011－03－03；

2011－04－27

李 華（1984－），女，碩士生。E－mail：lihua2011666＠163.com

＊＊通訊作者：E－mail：xjwang＠ouc.edu.cn

責(zé)任編輯 王 莉