微小RNA-21在膀胱癌中的表達(dá)及其臨床意義

戰(zhàn) 鵬 張 明 范海濤 溫都蘇 李然偉 劉祿成 (吉林大學(xué)第二醫(yī)院泌尿外科，吉林 長春 130041)

MiRNA是體內(nèi)一大類內(nèi)源性表達(dá)的小分子非編碼RNA，稱為微小RNA。這些小分子RNA參與人類基因組中1/3左右基因的表達(dá)調(diào)控，并在細(xì)胞分化、增殖、凋亡甚至腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用〔1，2〕。目前，與腫瘤相關(guān)的一些miRNA已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)，其中miRNA-21被認(rèn)為是一種癌基因，參與多種病理生理過程，在腫瘤細(xì)胞的遷移、浸潤和轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用〔3，4〕。本實驗采用免疫組織化學(xué)(SP)法檢測miRNA-21在膀胱癌中的表達(dá)情況，并分析其與膀胱癌生物行為的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料 收集我院2005年1月至2011年12月間膀胱癌石蠟包埋標(biāo)本50例。全部病例術(shù)前均未放療、化療及免疫治療。其中男性33例，女性17例;年齡27～81歲。腫瘤細(xì)胞分級：G1 13例，G2 26例，G3 11例。腫瘤臨床分期按世界衛(wèi)生組織TNM分期校準(zhǔn)：A期15例，B期21例，C期9例，D期5例。同期收集膀胱鏡下膀胱黏膜正常組織石蠟標(biāo)本20例，經(jīng)病理證實為正常組織或慢性炎癥。所有標(biāo)本常規(guī)石蠟切片4 μm厚。miRNA-21單克隆抗體購自美國Sigma公司。SP試劑盒及DAB顯色液均購自中杉生物技術(shù)公司。

1.2 免疫組化染色 切片常規(guī)脫蠟，梯度酒精脫水，30%H2O2甲醇封閉內(nèi)源性過氧化物酶，枸櫞酸高壓修復(fù)，小牛血清封閉，DAB顯色，蘇木精襯染，用PBS作陰性對照。

1.3 結(jié)果判定 細(xì)胞呈黃褐色著色為表達(dá)陽性，無著色為表達(dá)陰性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，數(shù)據(jù)以x±s表示，均數(shù)間比較用t檢驗。

2結(jié)果

2.1 miRNA-21蛋白的表達(dá) miRNA-21主要定位于胞核，在膀胱癌中陽性表達(dá)率為76%(38/50)，膀胱正常組織中陽性表達(dá)率僅為5%(1/20)，兩者比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見圖1。

圖1 miRNA-21在膀胱癌組織及正常組織中陽性表達(dá)(×200)

2.2 miRNA-21蛋白表達(dá)與膀胱癌細(xì)胞分級和臨床分期的關(guān)系 表1顯示在miRNA-21表達(dá)中，浸潤肌層和細(xì)胞分級高者陽性表達(dá)高于局限在黏膜層和細(xì)胞分級低者，即miRNA-21的表達(dá)率A期＜B期＜C期＜D期;G1級＜G2級＜G3級;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的表達(dá)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。上述幾組間相互比較，雖然組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，但隨著臨床分期和細(xì)胞分級增高其陽性表達(dá)率逐漸升高，說明miRNA-21表達(dá)與膀胱癌的惡性度和嚴(yán)重性呈正相關(guān)，與年齡和性別無關(guān)。見表1。

表1 50例膀胱癌miRNA-21表達(dá)與臨床病理學(xué)因素的關(guān)系〔n(%)〕

3討論

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)腫瘤中最常見的惡性腫瘤，其發(fā)生發(fā)展也是一個多基因變化的復(fù)雜過程，以往的研究幾乎都集中在編碼蛋白的癌基因或抑癌基因上。近年來發(fā)現(xiàn)一類內(nèi)源性短鏈RNA，即非編碼蛋白的miRNA。這種miRNA能通過mRNA部分互補或完全互補結(jié)合，抑制其翻譯或?qū)е缕浣到舛鸬皆谵D(zhuǎn)錄后水平沉默基因表達(dá)的作用;甚至一種miRNA可調(diào)控上百種靶基因表達(dá)，由于其高效調(diào)控癌基因或抑癌基因的特性，所以其在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用〔5，6〕。雖然目前對miRNA的研究只是初淺的，但已發(fā)現(xiàn)并鑒定的miRNA多達(dá)650種，其中將近70%miRNA具有癌基因或抑癌基因的生物活性，故被認(rèn)為其在腫瘤的研究與治療中具有誘人前景和巨大潛力。Oulas等〔7〕用微陳列芯片首次在乳腺癌中篩選出異常表達(dá)的miRNA譜，發(fā)現(xiàn)有29條miRNA表達(dá)失調(diào)，其中17條表達(dá)上調(diào)，以miRNA-21上調(diào)最為顯著，提示其在乳腺癌中可能起致癌作用。這種作用在后續(xù)肺癌、胰腺癌、胃癌、肝癌、卵巢癌和前列腺癌等多種腫瘤研究中也得到進(jìn)一步證實〔8，9〕，提示 miRNA-21對腫瘤的致癌作用具有普遍性。

本實驗結(jié)果表明miRNA-21可能在膀胱癌的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色，初步判定miRNA-21蛋白在膀胱中的表達(dá)可作為與膀胱癌浸潤、轉(zhuǎn)移有關(guān)的重要指征之一，并對膀胱癌的預(yù)后評估和靶向治療有一定實用價值。但miRNA-21過表達(dá)能否作為膀胱癌預(yù)后不良的獨立因素尚需大宗病例進(jìn)一步研究。

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8 Elliott A，Adams J，Al-Hajj M.The ABCs of cancer stem cell drug resistance〔J〕.Drugs，2010;13(9)：632-7.

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