高溫與氨氮復(fù)合脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦滲透調(diào)節(jié)的影響

熊大林，段亞飛，陳成勛，孫永旭，董宏標(biāo)，詹愛(ài)軍，張家松

( 1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院 南海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部南海漁業(yè)資源開(kāi)發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東省漁業(yè)生態(tài)環(huán)境重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510300; 2.天津農(nóng)學(xué)院 水產(chǎn)學(xué)院，天津 300384; 3.深圳市檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院，廣東 深圳 518010 )

凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeusvannamei)是我國(guó)重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)蝦類(lèi)。隨著對(duì)蝦集約化養(yǎng)殖程度的提高、環(huán)境脅迫頻發(fā)，導(dǎo)致對(duì)蝦死亡率居高不下，造成養(yǎng)殖業(yè)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。氨氮是對(duì)蝦養(yǎng)殖中重要的環(huán)境脅迫因子[1-3]。尤其在廣東高溫季節(jié)，水環(huán)境中氨氮含量驟升現(xiàn)象經(jīng)常發(fā)生，高含量的氨氮脅迫造成對(duì)蝦抗病力降低、免疫力下降和病原易感性增加等，危害對(duì)蝦的存活和生長(zhǎng)[4-7]。凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)適宜溫度為25～32 ℃[8]，當(dāng)溫度超過(guò)33 ℃，生長(zhǎng)速率和存活率降低[9]。水溫27 ℃、pH 8.15、鹽度20條件下，氨氮對(duì)體長(zhǎng)5 cm的凡納濱對(duì)蝦的72 h半致死質(zhì)量濃度為31.44 mg/L[10]，隨著凡納濱對(duì)蝦的生長(zhǎng)，其對(duì)氨氮的敏感度會(huì)有所降低。氨氮質(zhì)量濃度受溫度的影響，非離子氨含量與溫度呈正相關(guān)[11-12]。隨著溫度的升高，氨氮對(duì)短溝對(duì)蝦(Penaeussemisulcatus)[13]、河蜆(Corbiculafluminea)[14]的半致死質(zhì)量濃度不斷降低，毒性不斷增強(qiáng)。

甲殼動(dòng)物對(duì)環(huán)境脅迫的生理適應(yīng)性與其滲透壓調(diào)節(jié)活動(dòng)密切相關(guān)。Lignot等[15]認(rèn)為，機(jī)體滲透壓變化可作為監(jiān)測(cè)甲殼動(dòng)物生理狀況和受環(huán)境脅迫影響的指標(biāo)之一。甲殼動(dòng)物的滲透壓調(diào)節(jié)方式分為非等滲細(xì)胞外調(diào)節(jié)和等滲細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)兩類(lèi)，前者主要依靠Na+/K+-ATP酶等離子轉(zhuǎn)運(yùn)酶調(diào)節(jié)機(jī)體無(wú)機(jī)離子的含量，而后者則是彌補(bǔ)非等滲細(xì)胞外調(diào)節(jié)的缺陷，利用游離氨基酸平衡組織和血淋巴之間的滲透壓[16-17]。此外，Na+/K+-ATP酶及游離氨基酸還具有調(diào)節(jié)能量輸出及氨解毒作用[18-19]。研究發(fā)現(xiàn)，在環(huán)境脅迫下，Na+/K+-ATP酶α、Na+/K+-ATP酶β等離子通道相關(guān)基因、水通道蛋白基因表達(dá)量和酶活性增加[20-22]；酶在細(xì)胞膜上的定位顯示，部分酶作用于細(xì)胞質(zhì)上，促進(jìn)滲透壓的調(diào)節(jié)[23]。甲殼動(dòng)物在受到鹽度、氨氮、多氯聯(lián)苯等脅迫時(shí)，其游離氨基酸含量均發(fā)生顯著變化[24-26]。由此可知，游離氨基酸和ATP酶在甲殼動(dòng)物逆境的滲透壓調(diào)節(jié)過(guò)程中發(fā)揮重要作用。

然而，目前關(guān)于高溫與氨氮復(fù)合脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦游離氨基酸含量以及Na+/K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性的影響研究尚未見(jiàn)報(bào)道，其對(duì)解析環(huán)境脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦滲透壓調(diào)節(jié)的影響機(jī)理具有重要意義。因此，筆者測(cè)定由正常水溫30 ℃急升至33 ℃，不同氨氮質(zhì)量濃度脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦鰓中Na+/K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性以及肌肉和鰓中游離氨基酸含量的影響，旨在探討高溫與氨氮復(fù)合脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦滲透調(diào)節(jié)的影響作用，以期為凡納濱對(duì)蝦的健康養(yǎng)殖提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)于2018年7月在中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所深圳試驗(yàn)基地進(jìn)行。健康凡納濱對(duì)蝦平均體質(zhì)量(6.77±0.51) g，于200 L玻璃纖維桶中，每桶50尾，暫養(yǎng)7 d。暫養(yǎng)期間水溫30 ℃、鹽度30、pH 8.4，持續(xù)充氧，每日更換2/3體積海水，按其體質(zhì)量5%定時(shí)投喂對(duì)蝦配合飼料。

1.2 急性升溫下氨氮脅迫試驗(yàn)

將暫養(yǎng)7 d的健康凡納濱對(duì)蝦隨機(jī)分為24組，每組50尾。試驗(yàn)設(shè)置2個(gè)溫度梯度，每溫度下設(shè)置4個(gè)氨氮質(zhì)量濃度組，共8個(gè)試驗(yàn)組，每組3個(gè)平行。溫度設(shè)常溫對(duì)照(30 ℃)、高溫脅迫(33 ℃)；氨氮脅迫設(shè)對(duì)照(0 mg/L)、低質(zhì)量濃度(5 mg/L)、中質(zhì)量濃度(15 mg/L)和高質(zhì)量濃度(25 mg/L)。33 ℃組水溫用加熱棒在1 h內(nèi)由30 ℃急升至33 ℃，并進(jìn)行恒溫控制。各組水體氨氮質(zhì)量濃度分別以氯化銨溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)，每4 h使用靛酚藍(lán)分光光度法(GB 17378.4—2007)檢測(cè)水中氨氮質(zhì)量濃度，維持質(zhì)量濃度穩(wěn)定。試驗(yàn)期間，每日換水1/3，日常管理與暫養(yǎng)期間相同。于脅迫72 h后，每組分別取10尾凡納濱對(duì)蝦的鰓組織和40 g肌肉組織，冷凍保存在液氮中，用于測(cè)定酶活性和游離氨基酸含量。

1.3 ATP酶活性測(cè)定

鰓組織樣品冰上解凍后，于預(yù)冷的0.9%生理鹽水中漂洗去除組織液，濾紙拭干；稱量質(zhì)量后置于離心管中，按照m(組織)∶V(生理鹽水)=1∶9的比例混合，低溫研磨制成組織勻漿后，4 ℃、1000 r/min離心5 min，取上清液用于測(cè)定酶活性。

采用南京建成生物工程研究所的試劑盒測(cè)定Na+/K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性以及總蛋白含量?？偟鞍缀康臏y(cè)定采用考馬斯亮藍(lán)法。

1.4 游離氨基酸含量測(cè)定

參考《實(shí)用食物營(yíng)養(yǎng)成分分析手冊(cè)》[27]中游離氨基酸的提取方法，將各組鰓和肌肉樣品分別制成勻漿，稱取15 mg置于水解管中，加入6 mol/L鹽酸10 mL以及新蒸餾的苯酚3滴，再將水解管冷凍3 min后抽真空，充入高純氮?dú)?；再抽真空充氮?dú)猓貜?fù)3次后，將充足氮?dú)獾乃夤苊芊夂笥?10 ℃干燥水解22 h。水解完成后取出冷卻，將水解液過(guò)濾，用去離子水反復(fù)沖洗水解管，將水解液全部轉(zhuǎn)移到50 mL容量瓶?jī)?nèi)，用去離子水定容。吸取濾液1 mL于5 mL容量瓶?jī)?nèi)，用真空干燥器在40 ℃干燥，殘留物用1 mL水溶解，再干燥，反復(fù)進(jìn)行2次，最后蒸干，用1 mL pH 2.2的緩沖液溶解。

準(zhǔn)確吸取0.20 mL混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)液，用pH 2.2的緩沖液稀釋至5 mL，此標(biāo)準(zhǔn)稀釋液濃度為 0.5 nmol/μL，作為上機(jī)測(cè)定用的氨基酸標(biāo)準(zhǔn)，以外標(biāo)法用氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)定樣品測(cè)定液的氨基酸含量(w)。

式中，n為上機(jī)樣品液中氨基酸量，f為樣品的稀釋倍數(shù)，Mr為氨基酸的相對(duì)分子質(zhì)量，m為樣品質(zhì)量(g)，V為上機(jī)時(shí)的進(jìn)樣量。

1.5 數(shù)據(jù)分析

所得數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行方差分析和多重比較(LSD法和Duncan法)，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 高溫與氨氮復(fù)合脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦鰓中ATP酶活性的影響

高溫與氨氮復(fù)合脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦鰓中Na+/K+-ATP酶活性的影響見(jiàn)圖1。同一溫度下，30 ℃時(shí)僅25 mg/L氨氮組Na+/K+-ATP酶活性顯著升高(P<0.05)；33 ℃時(shí)Na+/K+-ATP酶活性隨氨氮質(zhì)量濃度的升高呈現(xiàn)顯著先升后降又升的趨勢(shì)(P<0.05)。同一氨氮質(zhì)量濃度下，氨氮質(zhì)量濃度為5 mg/L時(shí)，33 ℃組Na+/K+-ATP酶活性顯著高于30 ℃組(P<0.05)；而氨氮質(zhì)量濃度為0、15、25 mg/L時(shí)，33 ℃組Na+/K+-ATP酶活性顯高溫與氨氮復(fù)合脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦鰓中Ca2+-ATP酶活性的影響見(jiàn)圖2。同一溫度下，30 ℃時(shí)僅5 mg/L氨氮組Ca2+-ATP酶活性顯著升高(P<0.05)，而33 ℃組Ca2+-ATP酶活性隨氨氮質(zhì)量濃度的升高呈現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)(P<0.05)，氨氮質(zhì)量濃度為15 mg/L時(shí)酶活性最高。同一氨氮質(zhì)量濃度下，氨氮質(zhì)量濃度為15 mg/L時(shí)，33 ℃組Ca2+-ATP酶活性顯著高于30 ℃組(P<0.05)；而氨氮質(zhì)量濃度為0、5、25 mg/L時(shí)，33 ℃組Ca2+-ATP酶活性顯著低于30 ℃組(P<0.05)。

著低于30 ℃組(P<0.05)。

圖1 高溫與氨氮復(fù)合脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦鰓中Na+/K+-ATP酶活性的影響Fig.1 Combined effects of high temperature and ammonia stress on Na+/K+-ATPase activity in the gills of Pacific white shrimp L. vannamei不同字母表示同一溫度下不同氨氮質(zhì)量濃度組間差異顯著(P<0.05)； *表示同一氨氮質(zhì)量濃度下不同溫度組間差異顯著(P<0.05)；下同.Means with different letters are significant diferences between different ammonia concentrations in each temperature treatment (P<0.05)； * indicates significant differences between two temperatures within the same ammonia treatment (P<0.05); et sequentia.

圖2 高溫與氨氮復(fù)合脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦鰓中Ca2+-ATP酶活性的影響Fig.2 Combined effects of high temperature and ammonia stress on Ca2+-ATPase activity in the gills of Pacific white shrimp L. vannamei

2.2 高溫與氨氮復(fù)合脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦鰓中游離氨基酸含量的影響

高溫與氨氮復(fù)合脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦鰓中游離氨基酸含量的影響見(jiàn)表1。同一溫度下，30 ℃時(shí)僅5 mg/L氨氮組游離氨基酸總含量顯著降低(P<0.05)，其他氨氮組間差異不顯著。而33 ℃時(shí)游離氨基酸總含量隨氨氮質(zhì)量濃度的升高呈先升后降的趨勢(shì)(P<0.05)，氨氮質(zhì)量濃度為5 mg/L時(shí)游離氨基酸總含量最高。同一氨氮質(zhì)量濃度下，氨氮質(zhì)量濃度為5 mg/L時(shí)，33 ℃組游離氨基酸總含量顯著高于30 ℃組(P<0.05)，而在氨氮質(zhì)量濃度為15 mg/L和25 mg/L時(shí)均顯著低于30 ℃組(P<0.05)。脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、谷氨酸、賴氨酸和精氨酸是鰓中游離氨基酸的主要成分，其中脯氨酸和甘氨酸含量在30 ℃和33 ℃氨氮脅迫下的變化趨勢(shì)與游離氨基酸總含量一致。

表1 高溫與氨氮復(fù)合脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦鰓中游離氨基酸含量的影響 mg/g

2.3 高溫與氨氮復(fù)合脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦肌肉中游離氨基酸含量的影響

高溫與氨氮復(fù)合脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦肌肉中游離氨基酸含量的影響見(jiàn)表2。同一溫度下，30 ℃時(shí)游離氨基酸總含量隨氨氮質(zhì)量濃度的升高而顯著升高(P<0.05)，而33 ℃時(shí)游離氨基酸總含量隨氨氮質(zhì)量濃度的升高呈先降后升的趨勢(shì)(P<0.05)。同一氨氮質(zhì)量濃度下，33 ℃組游離氨基酸總含量在氨氮質(zhì)量濃度15 mg/L和25 mg/L時(shí)均顯著低于30 ℃組(P<0.05)。甘氨酸、精氨酸、脯氨酸、丙氨酸、谷氨酸和絲氨酸是肌肉中游離氨基酸的主要成分，其中30 ℃和33 ℃氨氮脅迫下，丙氨酸均隨氨氮質(zhì)量濃度的升高顯著升高，且同一氨氮質(zhì)量濃度下33 ℃組均顯著高于30 ℃組(P<0.05)；精氨酸和脯氨酸含量的變化與游離氨基酸總含量的變化趨勢(shì)一致。

表2 高溫與氨氮復(fù)合脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦肌肉中游離氨基酸含量的影響 mg/g

3 討 論

3.1 高溫與氨氮復(fù)合脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦鰓中ATP酶活性的影響

離子轉(zhuǎn)運(yùn)酶在甲殼動(dòng)物滲透壓調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。機(jī)體依靠離子轉(zhuǎn)運(yùn)酶將離子跨膜運(yùn)輸，抑制環(huán)境變化造成的離子被動(dòng)擴(kuò)散，維持血淋巴滲透壓和離子平衡[28]。當(dāng)環(huán)境因子的改變使甲殼動(dòng)物排氨受阻時(shí)，幾種膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(H+-ATP酶、Na+/H+交換劑、Na+通道)會(huì)與Rhesus(Rh)糖蛋白共同實(shí)現(xiàn)Na+/NH4+交換，促進(jìn)氨排泄和Na+吸收[29]。Pinto等[23]的研究表明，氨氮脅迫72 h，亞馬遜沼蝦(Macrobrachiumamazonicum)Na+/K+-ATP酶和V型H+-ATP酶活性比對(duì)照組升高了1.5～2.0倍；氨氮質(zhì)量濃度變化導(dǎo)致V型H+-ATP酶在鰓支柱細(xì)胞的頂端凸緣和支柱細(xì)胞內(nèi)均存在，由此推斷蝦通過(guò)提高離子轉(zhuǎn)運(yùn)途徑調(diào)節(jié)滲透壓平衡，促使部分新合成的酶定位到細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，提高NH3向NH4+的囊泡轉(zhuǎn)化。離子轉(zhuǎn)運(yùn)酶的調(diào)節(jié)能力也會(huì)受到氨氮脅迫量的影響。Lee等[30]研究表明，氨氮脅迫8 h后，高氨氮脅迫組(10.106 mg/L和20.093 mg/L)中國(guó)明對(duì)蝦(Fenneropenaeuschinensis)的Na+/K+-ATP酶活性顯著低于低氨氮脅迫組(5.043 mg/L和0.037 mg/L)。Shrivastava等[20]將鯉魚(yú)(Cyprinuscarpio)在氨氮濃度為0.27 mmol/L(10% 96 h半致死濃度)的環(huán)境下預(yù)適應(yīng)3～7 d后，再轉(zhuǎn)至1.35 mmol/L氨氮濃度(50% 96 h半致死濃度)下脅迫12 h和48 h，鯉魚(yú)存活時(shí)間更長(zhǎng)，與Na+/NH4+交換有關(guān)的Rhesus (Rh)糖蛋白、Rhcg-α和Rhcg-β mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著上調(diào)，且Na+/H+交換劑(NHE-3)、Na+/K+-ATP酶活性和mRNA表達(dá)同樣顯著升高。在致死和亞致死氨氮脅迫下機(jī)體的滲透壓調(diào)節(jié)效果明顯，但氨氮脅迫時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或含量較高時(shí)，調(diào)節(jié)效應(yīng)會(huì)減弱。

本試驗(yàn)中，無(wú)氨氮脅迫時(shí)，33 ℃組凡納濱對(duì)蝦Na+/K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性比30 ℃組顯著降低，表明急性升溫會(huì)抑制凡納濱對(duì)蝦滲透壓調(diào)節(jié)相關(guān)酶活性。在33 ℃時(shí)氨氮脅迫下，Na+/K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性在低、中質(zhì)量濃度組呈現(xiàn)出不同的變化。低氨氮質(zhì)量濃度時(shí)Na+/K+-ATP酶活性升高，中氨氮質(zhì)量濃度時(shí)活性最低，與Na+/K+-ATP酶不同，Ca2+-ATP酶活性在低氨氮質(zhì)量濃度時(shí)增加不顯著，而在中氨氮質(zhì)量濃度時(shí)達(dá)到最高。這表明高溫與氨氮復(fù)合脅迫下低濃度氨氮對(duì)凡納濱對(duì)蝦滲透壓調(diào)節(jié)能力有一定的誘導(dǎo)作用，凡納濱對(duì)蝦通過(guò)Na+/K+-ATP酶調(diào)節(jié)滲透壓以及排氨的能力最強(qiáng)。已有研究表明，水中鹽度、K+、Mg2+和Ca2+之間具有交互作用，對(duì)凡納濱對(duì)蝦的生長(zhǎng)存活和Na+/K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、Mg2+-ATP酶活性均有顯著影響[31]。因此，推測(cè)在低、中質(zhì)量濃度氨氮脅迫下，Na+/K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶協(xié)同發(fā)揮滲透壓調(diào)節(jié)作用，但氨氮影響了水體中的離子變化，引起機(jī)體對(duì)離子的吸收存在差異，造成兩種酶之間出現(xiàn)相反情況，并且在此影響下中質(zhì)量濃度組Na+/K+-ATP酶活性比高質(zhì)量濃度組還要低。在高氨氮質(zhì)量濃度時(shí)，33 ℃下Na+/K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性均顯著低于30 ℃時(shí)的酶活性，可能是脅迫造成鰓組織損傷，導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞膜通透性增加，離子轉(zhuǎn)運(yùn)能力降低，影響了機(jī)體的滲透壓調(diào)節(jié)功能。

3.2 高溫與氨氮復(fù)合脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦組織中游離氨基酸含量的影響

游離氨基酸為重要平衡組織和血淋巴間滲透壓的細(xì)胞滲透調(diào)節(jié)物[32]。張丹等[24]研究表明，凡納濱對(duì)蝦在周期性鹽度波動(dòng)下，隨著鹽度的升高，肌肉和鰓游離氨基酸總量均有增加趨勢(shì)；其中甘氨酸、精氨酸、脯氨酸、丙氨酸和谷氨酸是肌肉游離氨基酸的主要成分，而鰓中甘氨酸、丙氨酸、谷氨酸、精氨酸和脯氨酸比例較高。當(dāng)機(jī)體遭遇環(huán)境脅迫時(shí)，游離氨基酸還具有排氨和能量輸出的功能。甘氨酸、丙氨酸和脯氨酸是對(duì)蝦滲透壓主要效應(yīng)物[33]，其中丙氨酸還是氨解毒途徑中的重要效應(yīng)物[25]。三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus)受鹽度脅迫時(shí)，隨鹽度的升高，甘氨酸、丙氨酸和脯氨酸的含量顯著增加，鹽度50時(shí)氨基酸上升幅度分別為鹽度10時(shí)的1.84倍、1.59倍和5.60倍[34]。精氨酸是一氧化氮合成的前體，一氧化氮能夠刺激哺乳動(dòng)物的肝臟和肌肉中的葡萄糖攝取和氧化以及脂肪酸氧化[35]，在機(jī)體抵御病原感染中發(fā)揮重要作用[36-38]。Costas等[39]研究發(fā)現(xiàn)，塞內(nèi)加爾舌鰨(Cynoglossussenegalensis)離水在空氣中暴露3 min，血清中精氨酸含量降低。凡納濱對(duì)蝦受急性低溫脅迫時(shí)，血清中精氨酸含量隨溫度降低而顯著升高[40]。

本試驗(yàn)中，凡納濱對(duì)蝦肌肉中甘氨酸、精氨酸、脯氨酸、丙氨酸、谷氨酸和絲氨酸為游離氨基酸的主要成分，而鰓中游離氨基酸主要為脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、谷氨酸、賴氨酸和精氨酸，這與張丹等[24]的研究結(jié)果相似。33 ℃時(shí)氨氮脅迫下，鰓組織中游離氨基酸含量在低氨氮質(zhì)量濃度5 mg/L時(shí)顯著升高，而在高氨氮質(zhì)量濃度15 mg/L和25 mg/L時(shí)均顯著降低；肌肉中游離氨基酸含量在氨氮質(zhì)量濃度5、15 mg/L和25 mg/L時(shí)均顯著降低。在30 ℃氨氮脅迫下，凡納濱對(duì)蝦鰓中甘氨酸與脯氨酸含量顯著升高，而在33 ℃和氨氮復(fù)合脅迫下，凡納濱對(duì)蝦鰓中甘氨酸與脯氨酸含量以及肌肉中精氨酸和脯氨酸顯著降低。與游離氨基酸含量變化趨勢(shì)一致；無(wú)論是30 ℃氨氮脅迫還是33 ℃氨氮脅迫下，凡納濱對(duì)蝦肌肉中丙氨酸均隨氨氮質(zhì)量濃度的升高顯著增加，且33 ℃組顯著高于30 ℃組。由此推測(cè)，單一因素的氨氮脅迫對(duì)對(duì)蝦滲透壓調(diào)節(jié)有誘導(dǎo)作用，機(jī)體為實(shí)現(xiàn)氨解毒代謝，不斷以氨基酸的形式將氨代謝；而高溫與氨氮復(fù)合脅迫下，機(jī)體的解毒代謝達(dá)到負(fù)荷，排氨能力受到影響，不利于對(duì)蝦滲透壓的調(diào)節(jié)。

4 結(jié) 論

高溫與氨氮復(fù)合脅迫72 h，凡納濱對(duì)蝦鰓中Na+/K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性以及肌肉和鰓中游離氨基酸含量均發(fā)生顯著變化，表明高溫與氨氮復(fù)合脅迫造成對(duì)蝦滲透壓生理調(diào)節(jié)功能紊亂。本試驗(yàn)中的幾種生理指標(biāo)對(duì)高溫和氨氮復(fù)合脅迫的反應(yīng)均較為敏感，可以作為對(duì)蝦滲透壓生理調(diào)節(jié)研究的評(píng)價(jià)指標(biāo)。