HPLC法測定止咳丸中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量

　　摘 要：目的：建立HPLC法測定止咳丸中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法。方法：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1%磷酸（5：95）為流動相；檢測波長為205 nm。理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計算應不低于3000。結(jié)果：鹽酸麻黃堿在0.018 4～2.760 0 μg（r=0.999 93）；鹽酸偽麻黃堿在0.026 4～3.168 μg（r=0.999 98）之間范圍內(nèi)呈良好線性關系。樣品中鹽酸麻黃堿平均回收率為97.88%，RSD= 2.08%；鹽酸偽麻黃堿平均回收率為97.86%，RSD= 2.01%。結(jié)論：該法操作簡便，結(jié)果準確，重現(xiàn)性好，可用于控制止咳丸的質(zhì)量。
　　關鍵詞：止咳丸；鹽酸麻黃堿；鹽酸偽麻黃堿；HPLC
　　中圖分類號：R282.5 文獻標識碼：A
　　文章編號：1007-2349（2011）06-0078-02
　　
　　止咳丸是云南省的傳統(tǒng)中成藥品種，由云南名中醫(yī)翟玉六先生創(chuàng)制于清光緒33年（1908年），翟玉六大藥房獨家經(jīng)銷，由于療效卓著，舊時已創(chuàng)下名牌，成為云南家喻戶曉的常備治咳良藥。收載于《衛(wèi)生部藥品標準》（中藥成方制劑第十一冊）［2］，標準編號為WS3-B-2096-96。因麻黃為本品處方中的君藥，且根據(jù)止咳丸標準提高課題任務書及國家藥典會的“立項綜合意見單”的專家意見，選取麻黃中的主要成分鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿作為含量測定指標。
　　
　　1 儀器與試藥
　　
　　島津 1100系列高效液相色譜儀（包括真空脫氣泵，四元泵，自動進樣器，DAD檢測器）；止咳丸（由昆明中藥廠有限公司提供，批號：100319、100439、100501）；鹽酸麻黃堿對照品（171241-200404）、鹽酸偽麻黃堿對照品（171237-200505），均由中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用。乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。
　　
　　2 實驗方法及結(jié)果
　　
　　2.1 對照品溶液的制備 取鹽酸麻黃堿對照品、鹽酸偽麻黃堿對照品適量，精密稱定，分別加0.1 moL/L鹽酸溶液制成每1 mL各含10 μg的溶液，作為對照品溶液。
　　2.2 供試品溶液的制備 取止咳丸適量，除去糖衣，研細，取細粉約4 g，精密稱定，置500 mL的錐形瓶中，加氯化鈉7.5 g，再加入消泡劑1 g，加5 moL/L氫氧化鈉溶液70 mL，搖散，超聲處理30 min，再搖散，加水60 mL，蒸餾，用預先盛有0.5 moL/L鹽酸溶液5 mL的100 mL量瓶收集蒸餾液近90 mL，加水至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
　　2.3 檢測波長的確定 取鹽酸麻黃堿對照品溶液（23 μg/mL）及鹽酸偽麻黃堿溶液（1.32 μg/mL），分別在紫外可見分光光度儀上進行鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的紫外光譜掃描，得到鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的紫外吸收光譜，可見鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿在205 nm處有最大吸收，故選擇205 nm作為鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的檢測波長。鹽酸麻黃堿紫外吸收光譜和鹽酸偽麻黃堿紫外吸收光譜見圖1、2。
　　2.4 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1%磷酸（5：95）為流動相；檢測波長為205 nm。理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計算應不低于3000。取對照品溶液和供試品溶液各20 μL注入液相色譜儀進行測定［1］。色譜圖見圖3和圖4。
　　結(jié)果表明：供試品鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿與前后鋒的分離度、拖尾因子均能滿足《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥD高效液相色譜法項下規(guī)定，理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計算均大于3000。
　　2.5 陰性對照實驗 取處方中除麻黃外的其他藥味，按處方劑量及制法和工藝要求制備缺麻黃陰性對照樣品制成陰性對照溶液，用與樣品相同的色譜條件測定。色譜圖見圖5。結(jié)果表明空白樣品的色譜圖中在與對照品相同保留時間（±5%）位置上沒有吸收峰，說明該制劑中除麻黃外的其他藥味和輔料對鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量測定沒有干擾。
　　2.6 線性與范圍 精密取鹽酸麻黃堿對照品溶液分別稀釋成0.92、4.14、6.9、12.5、23.0、46.0、69.0、92.0、138 μg/mL的對照品溶液，精密吸取上述溶液各20 μL，分別進樣，以對照品量（μg）為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程：Y=2 362.269 10X-13.540 62（r=0.999 93），結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿在0.018 4～2.760 0 μg之間呈良好線性關系。
　　精密取鹽酸偽麻黃堿對照品溶液分別稀釋成1.32、7.92、13.2、26.4、52.8、79.2、105.6、158.4 μg/mL的對照品溶液，精密吸取上述溶液各20 μL，分別進樣，以對照品量（μg）為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程：Y=2 323.111 10X-7.449 98（r=0.999 98），結(jié)果表明，鹽酸偽麻黃堿在0.026 4～3.168 μg之間呈良好線性關系。
　　2.7 穩(wěn)定性實驗 取同一供試品溶液，分別于0、4、8、12、20 h各進樣20 μL，按上述色譜條件進行測定，測得其鹽酸麻黃堿峰面積值分別為：386.820 89，389.396 12，388.024 84，386.923 80，384.610 84，RSD=0.455%；測得其鹽酸偽麻黃堿峰面積值分別為：151.975 13，157.575 74，156.058 81，154.100 69，156.055 10，RSD=1.39%。結(jié)果表明，在20 h內(nèi)供試品溶液中的鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿是穩(wěn)定的。
　　2.8 精密度實驗 取供試品溶液、對照品溶液，于測定條件下分別進樣20 μL，重復進樣6次，測定峰面積。結(jié)果供試品溶液中的鹽酸麻黃堿RSD為1.85%和鹽酸偽麻黃堿RSD為1.76%，對照品溶液中鹽酸麻黃堿RSD為0.95%和鹽酸偽麻黃堿RSD為1.02%。結(jié)果表明精密度良好。
　　2.9 重現(xiàn)性實驗 取批號為100319的止咳丸，按正文所列的含量測定方法，分別制備9份供試品溶液，分別測定鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量；結(jié)果鹽酸麻黃堿RSD為1.98%和鹽酸偽麻黃堿RSD為1.87%。
　　2.10 回收率實驗 精密稱定已知含量的樣品，共6份，分別精密加入適量鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿，采取全程加樣法；在上述色譜條件下測定，樣品中鹽酸麻黃堿平均回收率為97.88%，RSD= 2.08%；鹽酸偽麻黃堿平均回收率為97.86%，RSD= 2.01%。
　　2.11 樣品含量測定 取本品3批6個樣品，依法配制供試品溶液，精密吸取各20 μL，注入液相色譜儀，測定鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿峰面積，含量結(jié)果見表1。
　　
　　3 討論
　　
　　止咳丸收載于《衛(wèi)生部藥品標準》（中藥成方制劑第十一冊），標準編號為WS3-B-2096-96。原標準無含量測定，因麻黃為本品處方中的君藥，且根據(jù)止咳丸標準提高課題任務書及國家藥典會的“立項綜合意見單”的專家意見，選取麻黃中的主要成分鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿作為含量測定指標；曾對乙腈-0.1%磷酸（0.1%三乙胺）（5∶95）；乙腈-0.1%磷酸（5∶95）上述流動相，經(jīng)試驗比較，采用乙腈-0.1%磷酸（5∶95）作為流動相，鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿與其他組分的分離度能達到要求，空白試驗也無干擾，故采用。對止咳丸中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量測定的分析方法驗證結(jié)果表明，該法操作簡便，結(jié)果準確，重現(xiàn)性好，可用于控制止咳丸的質(zhì)量。
　　
　　參考文獻：
　?。?］國家藥典委員會.中國藥典［M］.一部.北京：化學工業(yè)出版社，2010.
　?。?］中華藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準.中藥成方制劑［M］.北京：化學工業(yè)出版社，1997：29.
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