清肺抑火口腔噴霧劑提取工藝的研究

　　摘要：目的：優(yōu)化清肺抑火口腔噴霧劑的提取工藝。方法：以梔子苷、黃芩苷含量為指標(biāo)，采用高效液相色譜法測定梔子苷、黃芩苷含量；用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計優(yōu)選最佳提取工藝。結(jié)果：最佳提取工藝為：將藥材中的梔子和黃芩藥材粉碎成細(xì)粉，加入8倍量80%乙醇浸泡60min，回流提取3次，每次60min。結(jié)論：該提取工藝簡便、合理可行。
　　關(guān)鍵詞：清肺抑火口腔噴霧劑；正交設(shè)計；提取工藝；梔子苷；黃芩苷；高效液相色譜法
　　中圖分類號：R284.2文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A
　　文章編號：1007-2349（2011）12-0057-03
　　
　　清肺抑火口腔噴霧劑處方源于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)第二十冊清肺抑火膏，由黃芩、大黃、天花粉、梔子、桔梗、前胡、苦參、知母、黃柏組成。具有清肺止咳、降火生津作用，臨床常用于肺熱咳嗽、痰涎壅盛、咽喉腫痛、口鼻生瘡、牙齒疼痛、牙齦出血、大便干燥、小便赤黃等癥。噴霧劑是由藥材提取物或藥材細(xì)粉與適宜的附加劑混合借助手動泵的壓力或其他方法將內(nèi)容物以霧狀等形態(tài)噴出的制劑［1］。中藥噴霧劑主要通過呼吸道、皮膚或黏膜等途徑給藥，與傳統(tǒng)中藥劑型相比，中藥噴霧劑具有藥物分散均勻，生物利用度高，療效快，使用方便的特點(diǎn)。同時中藥噴霧劑能使藥物直接作用于病變部位，減少藥物用量，減輕或避免藥物不良反應(yīng)，如可用于治療上呼吸道疾病、各種腔道疾病、外傷內(nèi)傷以及全身性疾病，有較好的臨床療效［2］。本實(shí)驗(yàn)以梔子苷、黃芩苷含量為考察指標(biāo)，采用高效液相色譜法測定梔子苷、黃芩苷含量；用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計對清肺抑火口腔噴霧劑的藥材提取最佳工藝進(jìn)行優(yōu)化研究。
　　1儀器與材料
　　1.1儀器與設(shè)備Agilent 1100高效液相色譜儀、DAD檢測器、四元泵、Agilent 1100工作站，Bp211D電子分析天平（德國，sartorius），F(xiàn)A1004 型電子天平（上海精科天平有限公司），RE-2000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠），KQ-500B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），DZ-2BC型真空干燥箱（天津市康司特儀器有限公司）。
　　1.2試劑與材料梔子苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110749-200714），黃芩苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：120649-200726），甲醇、乙腈（色譜純，天津市天昊化工有限公司），甲醇（分析純，天津市化學(xué)試劑批發(fā)公司），磷酸（分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心），95%食用乙醇（天津市津酒集團(tuán)），黃芩、梔子、天花粉、桔梗、知母、大黃、前胡、黃柏、苦參（天津市敬一堂藥店）。
　　2方法與結(jié)果
　　2.1正交試驗(yàn)設(shè)計
　　2.1.1因素水平［3~4］以梔子苷、黃芩苷含量為考察指標(biāo)，以對梔子、黃芩藥材的粉碎度、提取溶劑、提取次數(shù)和提取時間為考察因素，選用L9（34）正交表進(jìn)行試驗(yàn)。因素水平見表1。
　　表1因素水平
　　水平因素粉碎度/mm
　　A提取溶劑
　　B提取次數(shù)/次
　　C提取時間/min
　　D12濾，回收乙醇，濃縮至一定體積；3、6、9號80%乙醇提取液靜置，過濾，回收乙醇，濃縮至一定體積。即得1～9號提取液。
　　2.2提取液中梔子苷、黃芩苷含量測定
　　2.2.1色譜條件［1］色譜柱、流速和柱溫均為依利特C18（Φ4.6 mm×200 mm，5 μm）、1.0 mL?min-1和30 ℃；流動相：梔子苷為乙腈-水（11∶89），黃芩苷為甲醇-水-磷酸（45∶55∶0.2）；檢測波長：梔子苷為238 nm，黃芩苷為280 nm。
　　2.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取梔子苷和黃芩苷對照品適量，分別用甲醇溶解制成梔子苷對照品溶液（0.198 μg?μL-1）和黃芩苷對照品溶液（0.402 μg?μL-1）。精密吸取梔子苷對照品溶液6、8、10、12、14、16、18、20 μL和黃芩苷對照品溶液4、6、8、10、12、14 μL依法進(jìn)樣，測定梔子苷和黃芩苷峰面積積分值y（見圖1、2），建立梔子苷和黃芩苷對照品峰面積積分值y關(guān)于其進(jìn)樣量x（μg）的回歸方程分別為y=1 232.2x+154.99（r＝0.999 8）和y=1 461.5x-160.43（r＝0.999 8），其線性范圍分別為1.19～3.95 μg和1.61～5.63 μg。
　　圖1梔子苷對照品高效液相色譜圖（A.梔子苷）圖2黃芩苷對照品高效液相色譜圖（B.黃芩苷）
　　2.2.3提取液供試品溶液的制備分別精密吸取1～9號提取液適量置蒸發(fā)皿中，真空干燥（60 ℃），得到干粉，并精密稱重。精密稱取1～9號干粉各0.5 g，置具塞錐形瓶中，加甲醇20 mL超聲30 min，移置25 mL容量瓶中定容，混勻后用0.45 μm微孔濾膜過濾，得1～9號供試液。
　　2.2.4精密度試驗(yàn)分別精密吸取梔子苷和黃芩苷對照品溶液各10 μL依色譜條件進(jìn)樣，并分別重復(fù)6次，測得梔子苷和黃芩苷峰面積積分值，計算的RSD分別為1.19%和1.26%。表明儀器精密度良好。
　　2.2.5穩(wěn)定性試驗(yàn) 取某號提取供試液，按0、2、4、8、12 h不同時間間隔精密吸取10 μL進(jìn)樣，測得梔子苷峰面積積分值，計算RSD為1.09%。表明樣品溶液中梔子苷在12 h內(nèi)穩(wěn)定。再取另一號提取供試液并稀釋5倍，按0、2、4、8、24 h不同時間間隔精密吸取10 μL進(jìn)樣，測得黃芩苷峰面積積分值，計算RSD為1.77%。表明樣品溶液中黃芩苷在24 h內(nèi)穩(wěn)定。
　　2.2.6陰性對照試驗(yàn)分別取梔子陰性提取液（處方中缺梔子藥材）和黃芩陰性提取液（處方中缺黃芩藥材），按提取液供試品溶液的制備方法制備供試液，其中黃芩陰性供試液稀釋5倍，分別依法進(jìn)樣測定，其色譜在梔子苷和黃芩苷相應(yīng)保留時間無峰，說明處方中其他成分對二者的測定結(jié)果無干擾。
　　2.2.7提取液中梔子苷和黃芩苷含量測定精密吸取1～9號提取供試液10 μL分別依法進(jìn)樣，測定梔子苷的峰面積積分值（見圖3），計算梔子苷含量（見表2）；將1～9號提取供試液稀釋5倍后，各精密吸取10 μL依法進(jìn)樣，測定黃芩苷的峰面積積分值（見圖4），計算黃芩苷含量（見表2）。圖3提取液中梔子苷高效液相色譜圖（A.梔子苷）圖4提取液中黃芩苷高效液相色譜圖（B.黃芩苷）表2L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計與結(jié)果
　　試驗(yàn)號ABCD梔子苷含量
　　SSdfMSFPA0.456320.22814.210.1919B50.1668225.0834463.090.0022C5.323022.661549.140.0199誤差0.108320.0542--總56.05448---注