α1-腎上腺素受體在缺氧性肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖中的作用*

姚香蘭， 薛全福， 趙琪平

(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所，中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理和病理生理學(xué)系，北京100005)

腎上腺素α1受體(α1adrenoceptor，α1AR)激動(dòng)使肺小動(dòng)脈收縮，β2受體(β2adrenoceptor，β2AR)激動(dòng)則引起舒張，我室以往研究表明常壓慢性缺氧(10%O2)引起大鼠肺動(dòng)脈高壓時(shí)肺小動(dòng)脈α1AR 增多，β2AR 受體減少［1，2］。這種受體失衡參與缺氧性肺動(dòng)脈高壓的發(fā)生和發(fā)展［3］。

已有實(shí)驗(yàn)表明:兒茶酚胺對(duì)主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的增殖有促進(jìn)作用。兒茶酚胺通過(guò)α1AR 刺激主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞引起增殖，而β2AR 的激活則抑制其增殖。缺氧引起的肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(pulmonary artery smooth muscle cells，PASMCs)增生、肥大與肺血管重構(gòu)和肺動(dòng)脈高壓形成有關(guān)。但在PASMCs 上，腎上腺素能受體在常氧和缺氧情況下是否也有類同作用，尚少報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)選用離體培養(yǎng)的PASMCs，給予缺氧處理，用［3H］－TdR 摻入法觀察缺氧對(duì)PASMCs 增殖的作用;加用各種受體激動(dòng)劑或拮抗劑，激活或抑制α1AR 及激活β2AR，觀察α1AR 和β2AR 在缺氧后PASMCs 增殖中的作用;又采用RNA 分子雜交(Northern blotting)的方法檢測(cè)缺氧后PASMCs c－fos、c－myc、α1AR 和β2AR mRNA 表達(dá)的變化，在分子水平探討缺氧引起PASMCs 增殖的機(jī)制。

Ca2+與血管平滑肌細(xì)胞增殖及血管收縮有關(guān)，又是腎上腺素能受體信息傳遞的重要第二信使。缺氧后大鼠PASMCs 胞內(nèi)Ca2+增高已有報(bào)道［14］，但其動(dòng)態(tài)變化的報(bào)道少見(jiàn)。本實(shí)驗(yàn)用Fura－2/AM 測(cè)定了不同缺氧時(shí)間(3－24 h)PASMCs 胞內(nèi)Ca2+濃度(intracellular calcium concentration，［Ca2+］i)的動(dòng)態(tài)變化，并分析其與c－fos、c－myc 基因表達(dá)和細(xì)胞增殖的關(guān)系，探討其在缺氧性肺動(dòng)脈高壓發(fā)病學(xué)中的意義。

材 料 和 方 法

1 材料

大鼠c－fos cDNA 和人c－myc cDNA 均為中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤研究所遺傳室惠贈(zèng)。632 bp α1AR cDNA 探針為美國(guó)University of Arkansas for Medical Sciences，Cornett 博士惠贈(zèng)。人β2AR cDNA 探針為美國(guó)Duke University Medical Center，Kobilka 博士惠贈(zèng)。雞GAPDH 質(zhì)粒由中國(guó)疾病預(yù)防控制中心劉秉慈教授惠贈(zèng)。缺口平移試劑盒購(gòu)自華美公司，［α－32P］CTP 購(gòu)自北京福瑞公司。Random Primer 標(biāo)記試劑盒購(gòu)自Promega。

2 方法

2.1 貼塊法培養(yǎng)PASMCs 及細(xì)胞的鑒定 無(wú)菌取新生牛肺外及肺內(nèi)1－2 級(jí)肺動(dòng)脈，于超凈工作臺(tái)內(nèi)，用生理鹽水洗凈血跡，縱向剖開(kāi)肺動(dòng)脈分離中膜，于胎牛血清中剪碎成1 mm ×1 mm ×1 mm 大小組織塊，以貼塊法均勻鋪于培養(yǎng)瓶底部培養(yǎng)PASMCs，4 周后用0.05%胰酶消化液，使從組織塊中長(zhǎng)出的細(xì)胞脫壁后均勻分布于瓶底，繼續(xù)培養(yǎng)至傳代。將培養(yǎng)的原代和傳至6 代的PASMCs 種至載玻片上，在10%FCS 加MEM 中培養(yǎng)72 h，以0. 01 mol/L PBS 洗玻片，4 ℃丙酮固定10 min，自然干燥。以稀釋的小鼠抗平滑肌細(xì)胞肌動(dòng)蛋白抗體(α－actin)作為Ⅰ抗，進(jìn)行免疫組化染色，以鑒定PASMCs。同時(shí)以同樣方法染色人乳腺血管和人結(jié)腸血管作陽(yáng)性對(duì)照，用不加Ⅰ抗的樣品作陰性對(duì)照。

2.2 PASMCs 缺氧模型的建立和分組及DNA 合成的測(cè)定 培養(yǎng)的PASMCs 分為缺氧實(shí)驗(yàn)組和常氧對(duì)照組，缺氧組細(xì)胞置于自制的有機(jī)玻璃小室(有進(jìn)、出氣孔)，將此小室置于37 ℃恒溫箱內(nèi)，給缺氧小室內(nèi)通入95%N2+5%CO2混合氣，3 L/min 共8 min，置換出小室內(nèi)空氣，以0.5 L/min 繼續(xù)通入混合氣，5 h 后，血?dú)夥治鰞x測(cè)定培養(yǎng)基中PO2達(dá)50 mmHg(為6.6%O2，相當(dāng)于給整體動(dòng)物10%O2處理時(shí)肺泡和血液中氧濃度)以0.4 L/min 持續(xù)通氣，血?dú)獗O(jiān)測(cè)PO2，維持PO2≈50 mmHg。常氧組細(xì)胞置于5%CO2、95% 空氣培養(yǎng)箱內(nèi)。

培養(yǎng)的PASMCs 傳至3－6 代時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，將培養(yǎng)瓶中細(xì)胞消化后計(jì)數(shù)，以1 ×104細(xì)胞種于96 孔培養(yǎng)板常規(guī)培養(yǎng)72 h，以無(wú)血清MEM 再培養(yǎng)72 h，將PASMCs 分為4 組:(1)無(wú)受體藥物干預(yù)組:為對(duì)照組，不加受體激動(dòng)劑或拮抗劑;(2)α1AR 激活組:加α1AR 激動(dòng)劑脫羥腎上腺素(10－6mol/L)，再加育亨賓(10－6mol/L)拮抗α2AR、心得安(10－6mol/L)拮抗β1AR 及β2AR，最終僅α1AR 被激活。(3)α1AR 阻斷組:加腎上腺素(10－6mol/L)激活α 和βAR，再加派唑嗪(10－6mol/L)阻斷α1AR;(4)β2AR 激活組:加β2激動(dòng)劑異丙腎上腺素(10－6mol/L)，再加酚妥拉明(10－6mol/L)拮抗α1AR 及α2AR，氨酰心安(10－6mol/L)拮抗β1AR，最終僅β2AR 被激活。

缺氧實(shí)驗(yàn)組和常氧對(duì)照組都包括這4 組，向每孔細(xì)胞中加入1 mCi/L(37 MBq/L)［3H］－TdR，缺氧12 h、24 h、36 h 后，以常規(guī)方法收集細(xì)胞，液閃計(jì)數(shù)，得到TdR 摻入DNA 的量，反映細(xì)胞增殖程度。

2.3 PASMCs 胞內(nèi)鈣濃度的測(cè)定 培養(yǎng)的PASMCs分為缺氧實(shí)驗(yàn)組和常氧對(duì)照組，缺氧實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞置于細(xì)胞缺氧箱中，按上述方法缺氧3 h、6 h、12 h、24 h。缺氧結(jié)束后，以HBSS 洗缺氧實(shí)驗(yàn)組及常氧對(duì)照組細(xì)胞各3 次，加5 mL HBSS 于培養(yǎng)瓶中，用橡皮刮輕輕刮下貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞，臺(tái)盼藍(lán)排斥試驗(yàn)檢查細(xì)胞成活率達(dá)95%以上。按文獻(xiàn)［5］方法，以島津RF－5000 型熒光分光光度計(jì)測(cè)定細(xì)胞內(nèi)鈣濃度。

2.4 PASMCs c－fos、c－myc 表達(dá)和α1AR mRNA、β2AR mRNA 的Northen blotting 分析 缺氧及常氧組細(xì)胞總RNA 的提取均按《Molecular Cloning》第2版方法［6］進(jìn)行。本實(shí)驗(yàn)提取的細(xì)胞總RNA 在260 nm 和280 nm 的紫外吸光度比值均大于1.8，總RNA電泳上樣量為20 μg。

采用大鼠c－fos cDNA(用EcoR I 酶從質(zhì)粒切取8.8 kb 片段)和人c－myc cDNA(用EcoR I、HindⅢ雙酶從質(zhì)粒切取8.5 kb 片段)作探針，進(jìn)行c－fos 和c－myc Northen blotting 分析。細(xì)胞缺氧方法同前，觀察缺氧30 min、1 h、2 h、3 h、6 h、24 h 后PASMCs c－fos 和c－myc 表達(dá)的變化。又將缺氧細(xì)胞分2 組進(jìn)行藥物干預(yù):(1)α1AR 激活組，用藥同前述;(2)α1AR 阻斷組:用藥同前述。在藥物干預(yù)的同時(shí)進(jìn)行30 min、1 h 缺氧，觀察α1AR 激活或阻斷時(shí)對(duì)PASMCs c－fos 和c－myc 表達(dá)的影響。

同上述方法提取細(xì)胞總RNA。采用大鼠α1AR cDNA(由EcoR I 酶切質(zhì)粒后得到632 bp 片段)和人β2AR cDNA(質(zhì)粒經(jīng)EcoR I 酶切后得到2.0 kb 片段)作探針，進(jìn)行PASMCs α1AR mRNA 及β2AR mRNA 的Northen blotting 分析，觀察缺氧6 h、12 h、24 h后的變化。以上實(shí)驗(yàn)均同時(shí)以三磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)cDNA 探針作為內(nèi)對(duì)照。α1AR、β2AR 及GAPDH cDNA 用Random Primer 標(biāo)記試劑盒進(jìn)行核素標(biāo)記(［α－32P］CTP 的探針標(biāo)記摻入率約60%，探針?lè)派浔然疃冗_(dá)1010counts·min－1·g－1DNA)。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié) 果

1 原代和第6 代PASMCs 細(xì)胞特征

原代及傳至第6 代的PASMCs 經(jīng)α－actin 單抗進(jìn)行免疫組化染色，陽(yáng)性對(duì)照顯示:人結(jié)腸血管壁、肌層、黏膜肌層、腺體周圍肌上皮和乳腺血管平滑肌胞漿內(nèi)呈彌漫強(qiáng)陽(yáng)性，而組織間成纖維細(xì)胞、腺上皮和血管內(nèi)皮均為陰性，說(shuō)明α－actin 單抗是平滑肌型actin 特異的單抗。培養(yǎng)的PASMCs 表面均呈棕黃色actin 強(qiáng)陽(yáng)性，與陽(yáng)性對(duì)照人結(jié)腸血管中動(dòng)脈平滑肌棕黃色染色一致，表明培養(yǎng)的PASMCs 均為血管平滑肌細(xì)胞，且傳至6 代時(shí)仍保持原來(lái)的細(xì)胞特征。

2 缺氧后PASMCs 增殖的變化及其與α1AR 和β2AR 的關(guān)系

缺氧12 h 的PASMCs，［3H］－TdR 摻入已有增高，但與對(duì)照組比無(wú)顯著差異。缺氧24 h 和36 h后，則顯著高于對(duì)照組(P ＜0.01)。而α1AR 被抑制的PASMCs，［3H］－TdR 摻入顯著低于單純?nèi)毖踅M(均P ＜0.01)。β2AR 激活的PASMCs，［3H］－TdR摻入雖比單純?nèi)毖踅M低，但無(wú)顯著差異，見(jiàn)表1。

3 缺氧后PASMCs 胞漿游離鈣濃度的變化

缺氧3 h，PASMCs 胞漿游離鈣濃度已開(kāi)始升高，但與對(duì)照組比無(wú)顯著差異。缺氧6 h、12 h 及24 h，均顯著高于對(duì)照組(P ＜0.01)，見(jiàn)圖1。

4 缺氧PASMCs 的c－fos 和c－myc 表達(dá)水平變化及其與α1AR、β2AR 的關(guān)系

缺氧與對(duì)照PASMCs 的c－fos 及c－myc Northen blotting 檢測(cè)結(jié)果顯示，缺氧30 min，c－fos 和c－myc表達(dá)升至高峰。缺氧1 h、2 h 及3 h、6 h 和24 h 時(shí)，c－fos 和c－myc 表達(dá)仍顯著高于對(duì)照，但比缺氧30 min 時(shí)的值低，見(jiàn)圖2、3A。

PASMCs 的α1AR 被激活時(shí)，缺氧30 min 和1 h后，c－fos 和c－myc mRNA 表達(dá)增高。α1AR 被阻斷時(shí)，缺氧30 min 和1 h 后，c－fos 和c－myc 表達(dá)明顯減少，見(jiàn)圖3B。

表1 缺氧不同時(shí)間后PASMCs［3H］－TdR 摻入DNA 合成的變化及α1AR 和β2AR 對(duì)其的影響Table 1. Changes of incorporation of ［3H］－ TdR in hypoxic PASMCs and the effect of α1AR and β2 AR on the incorporation(103counts/min. ±sE.n=12)

表1 缺氧不同時(shí)間后PASMCs［3H］－TdR 摻入DNA 合成的變化及α1AR 和β2AR 對(duì)其的影響Table 1. Changes of incorporation of ［3H］－ TdR in hypoxic PASMCs and the effect of α1AR and β2 AR on the incorporation(103counts/min. ±sE.n=12)

##P ＜0.01 vs control (normoxic PASMCs);＊＊P ＜0.01 vs no AR intervation (hypoxic PASMCs).

Group No AR intervention α1 AR activation α1 AR blockade β2 AR activation Control 1 273.08 ±61.42 3 227.17 ±127.91 819.60 ±24.15 836.08 ±45.04 Hypoxia 6 h 1 580.33 ±54.96 4 254.91 ±351.63 1 654.92 ±52.28 1 573.17 ±137.59 Hypoxia 12 h 7 882.55 ±206.52## 11 229.36 ±670.80##＊＊ 4 026.79 ±388.83##＊＊ 7 692.91 ±178.57##Hypoxia 24 h 7 938.67 ±298.38## 12 644.80 ±936.80##＊＊ 2 219.58 ±122.67##＊＊ 6 574.33 ±386.15##

Figure 1. Change of［Ca2+］i in hypoxic PASMCs. ± sE. n =6. ##P ＜0.01 vs normoxic PASMCs(control);＊＊P ＜0.01 vs 3 h hypoxic PAMSCs.圖1 缺氧不同時(shí)間后肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞［Ca2+］i的變化

5 缺氧PASMCs α1AR mRNA 和β2AR mRNA 水平變化

Northen blotting 的結(jié)果表明:缺氧6 h，PASMCs α1AR mRNA 水平與對(duì)照組比無(wú)明顯改變，缺氧12 和24 h 后，則顯著高于對(duì)照組。而PASMCs β2AR mRNA水平在缺氧6 h 和12 h 后，與對(duì)照組比無(wú)明顯差異，而在缺氧24 h 后，明顯高于對(duì)照組(均P ＜0.01)，見(jiàn)圖4。

Figure 2. Scanning densitometry of Northern blotting for c－fos and c－myc mRNA in PASMCs. ±sE.n=3. * P ＜0.05，＊＊P ＜0.01 vs normoxic PASMCs(control);##P ＜0.01 vs other hypoxic PASMCs.圖2 缺氧不同時(shí)間后肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞c－fos 及c－myc mRNA 的動(dòng)態(tài)變化

Figure 3. Changes of c－fos and c－myc mRNA after different hypoxic time in PASMCs(A)and the effect of α1AR(B).N:normoxia(control);AR(+):AR activation;AR(－):AR inhibition.圖3 Northern blotting 顯示缺氧不同時(shí)間后肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞c－fos 及c－myc mRNA 的變化及α1AR 對(duì)其的影響

Figure 4. Expression of α1AR and β2AR mRNA in PASMCs exposed to hopoxia and normoxia.A:Northern blotting results;B:densitometry analysis. ±sE.n=3. ##P ＜0.01 vs control .N:normoxia(control).圖4 Northern blotting 顯示缺氧時(shí)PASMCs α1AR 及β2AR mRNA 的變化

討 論

1 缺氧后肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖的變化及α1AR和β2AR 在其中的作用

體外實(shí)驗(yàn)證明兒茶酚胺具有有絲分裂原樣作用，特異地作用于α1AR，從而刺激主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖。而β2AR 激活則抑制主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的這一增殖［7］。本實(shí)驗(yàn)中［3H］－TdR 摻入結(jié)果表明，缺氧后PASMCs DNA 合成增加，有細(xì)胞增殖。α1AR被激活后，增殖更明顯，而α1AR 被阻斷時(shí)，缺氧引起的PASMCs 增殖明顯受抑制，與文獻(xiàn)中上述主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的結(jié)果相似。這說(shuō)明缺氧也可通過(guò)α1AR 刺激PASMCs 增殖，參與缺氧肺動(dòng)脈高壓的形成。PASMCs 上分布的αAR 雖然主要是α1AR。但也有少量α2AR。我室以往的研究表明大鼠缺氧性肺動(dòng)脈高壓時(shí)，肺組織α1AR 增高的同時(shí)α2AR 也增高。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)α1AR 被抑制后，雖然α2AR 未被抑制，但缺氧后PASMCs 的DNA 合成仍明顯低于單純?nèi)毖鹾统Ｑ踅M。這提示即使α2AR 有促進(jìn)PASMCs增殖的作用，也遠(yuǎn)小于α1AR。此外β2AR 被激活時(shí)，缺氧所引起的PASMCs 增殖僅稍有降低，與對(duì)照相比無(wú)顯著變化，與主動(dòng)脈的結(jié)果不完全相同，可見(jiàn)缺氧引起PASMCs 增殖主要是通過(guò)α1AR 實(shí)現(xiàn)的，β2AR 無(wú)明顯作用。常氧組實(shí)驗(yàn)還表明，常氧情況下，α1AR 也有促進(jìn)PASMCs 增殖的作用，β2AR 仍對(duì)增殖無(wú)明顯影響。

2 缺氧后PASMCs c－fos、c－myc、α1AR 和β2AR mRNA 表達(dá)的改變及其意義

c－fos 和c－myc 是細(xì)胞核內(nèi)原癌基因，與細(xì)胞的增殖密切相關(guān)。有人已在培養(yǎng)的血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)中觀察到，VSMCs 增殖時(shí)，c－fos 和c－myc和c－myb 均處于激活狀態(tài)。而用c－myc 的反義寡聚核苷酸轉(zhuǎn)染VSMCs 后，能降低c－myc 的表達(dá)，VSMCs 增殖也明顯受到抑制［8］。本實(shí)驗(yàn)觀察到缺氧30 min，PASMCs 的c－fos 和c－myc 表達(dá)達(dá)高峰，缺氧1 h 至24 h 時(shí)其表達(dá)均高于對(duì)照，與缺氧后PASMCs［3H］－TDR 摻入的變化是一致的。但缺氧后c－fos 和c－myc 的變化發(fā)生更早，說(shuō)明c－fos 和c－myc 是早期生長(zhǎng)反應(yīng)性基因。c－myc 可能通過(guò)直接刺激PASMCs DNA 復(fù)制或在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控促進(jìn)PASMCs 增殖，而c－fos 只限于轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控。本實(shí)驗(yàn)觀察到α1AR 激活時(shí)PASMCs 的c－fos 和c－myc 表達(dá)增加，而α1AR 抑制時(shí)，其表達(dá)減少，由此推斷在整體情況下，缺氧通過(guò)α1AR 引起c－fos 和c－myc 表達(dá)增加，導(dǎo)致肺動(dòng)脈平滑肌層增厚使管腔狹窄，促進(jìn)肺動(dòng)脈高壓的形成。

缺氧后PASMCs 的α1AR mRNA 水平也明顯升高，進(jìn)而PASMCs α1AR 合成也會(huì)增多。α1AR 的增多既可直接刺激PASMCs DNA 合成，又可能通過(guò)上述信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，促進(jìn)PASMCs 的增殖。

實(shí)驗(yàn)中還檢測(cè)到β2AR mRNA 水平升高。如前所述，PASMCs 上主要有α1AR 和β2AR，但α1AR 是β2AR 的3 倍，即α1AR 總量遠(yuǎn)多于β2AR。缺氧后PASMCs β2AR mRNA 水平雖增加，使β2AR 合成增多，但由于其總量遠(yuǎn)少于α1AR，因此缺氧后PASMCs仍以α1AR 的增多為主，最終使PASMCs 增殖，肺血管發(fā)生重建。

3 缺氧后PASMCs 胞內(nèi)Ca2+濃度的變化

已有表明細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+升高是VSMCs 增殖的最有效刺激。本實(shí)驗(yàn)PASMCs 缺氧6 h 后胞內(nèi)Ca2+濃度即明顯增高，而DNA 合成在缺氧后6 h 僅有輕度增加，缺氧12 h 后才有明顯增加，說(shuō)明缺氧通過(guò)增加PASMCs 上α1AR，使PASMCs 胞內(nèi)Ca2+增加，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖，12 h 后還可能通過(guò)其它信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑加強(qiáng)細(xì)胞增殖。有人認(rèn)為細(xì)胞內(nèi)Ca2+升高還可能通過(guò)激活原癌基因(c－fos 和c－myc 等)啟動(dòng)VSMCs 增殖［9］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，缺氧后PASMCs胞內(nèi)Ca2+的增加晚于c－fos 和c－myc 表達(dá)的增多，提示只在晚期才通過(guò)c－fos 和c－myc 起作用。而缺氧早期PASMCs c－fos 和c－myc 表達(dá)增加有其它因素參與。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)首次觀察到缺氧后PASMCs α1AR mRNA 和β2AR mRNA 均增多，肺動(dòng)脈α1AR與β2AR 相比本來(lái)就占優(yōu)勢(shì)，缺氧后α1AR mRNA 表達(dá)增多，將導(dǎo)致細(xì)胞合成α1AR 增多。既可使缺氧時(shí)肺血管收縮加強(qiáng)，又使肺血管平滑肌細(xì)胞增殖，引起血管壁增厚而發(fā)生肺血管重建。有報(bào)道α1DAR 或α1BAR 基因缺失或敲除的小鼠，經(jīng)受10%低氧21 d，其肺動(dòng)脈肥厚和管腔狹窄遠(yuǎn)低于同樣缺氧的基因正常小鼠［10］。取經(jīng)受10%低氧9 d 的大鼠肺動(dòng)脈做器官培養(yǎng)，去甲腎上腺素作用7 h 后，肺動(dòng)脈DNA 和蛋白含量較正常對(duì)照大鼠增加3 倍，蛋白合成增加更多，應(yīng)用α1AR 拮抗劑可抑制這種增加［11］。我室曾用β2AR 激動(dòng)劑舒喘靈加強(qiáng)肺小動(dòng)脈舒張，可減輕10%低氧引起大鼠肺動(dòng)脈高壓［12］;又用α1AR 拮抗劑哌唑嗪抑制肺小動(dòng)脈收縮，可降低大鼠肺動(dòng)脈高壓［3］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明α1AR 激活能使肺血管收縮，還能引起肺血管平滑肌細(xì)胞增殖，缺氧引起胞內(nèi)Ca2+升高和原癌基因(c－fos 和c－myc)激活，可能參與該細(xì)胞的增殖，故可針對(duì)α1AR 致細(xì)胞增殖通路中的不同環(huán)節(jié)進(jìn)行干預(yù)，為臨床進(jìn)行肺動(dòng)脈高壓防治提供新啟發(fā)。目前臨床也開(kāi)始應(yīng)用α1AR 拮抗劑哌唑嗪，而且新型選擇性節(jié)后αAR 拮抗劑烏拉地爾(urapidil)［3］、新型T－通道Ca2+拮抗劑、c－myc 的反義寡聚核苷酸等均有人應(yīng)用。對(duì)肺動(dòng)脈高壓患者進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，凡NO 吸入或靜脈注射依前列醇(epoprastenol)后有降肺動(dòng)脈壓效應(yīng)者(即mPAP 能降10 mmHg或更多者)，長(zhǎng)期應(yīng)用(＞1 年)Ca2+拮抗劑地爾硫卓、尼莫地平或絡(luò)活喜，確能提高肺動(dòng)脈高壓患者5 年生存率［13］?？傊?，應(yīng)用縮血管和舒血管因子及影響細(xì)胞增殖機(jī)制的研究成果，尋找和應(yīng)用糾正肺血管收縮和舒張失衡及減少增殖的藥物，單藥或聯(lián)合用藥，仍是當(dāng)前肺動(dòng)脈高壓防治研究的動(dòng)向［14］。

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