小葉龍船花對(duì)醋酸鉛引起氧化壓力的抑制作用

梁 萱， 莫 果， 陳 欣， 杜云云， 劉 紅，3*， 賈桂云

（1.海南師范大學(xué) 化學(xué)與化工學(xué)院，海南 海口571158；2.海南師范大學(xué) 物理與電子工程學(xué)院，海南 ?？?71158；3.海南省熱帶藥用植物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南 ?？?71158）

小葉龍船花對(duì)醋酸鉛引起氧化壓力的抑制作用

梁 萱1， 莫 果1， 陳 欣1， 杜云云2， 劉 紅1，3*， 賈桂云1

（1.海南師范大學(xué) 化學(xué)與化工學(xué)院，海南 海口571158；2.海南師范大學(xué) 物理與電子工程學(xué)院，海南 ?？?71158；3.海南省熱帶藥用植物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南 海口571158）

為了探討小葉龍船花乙醇提取物對(duì)醋酸鉛引起的雌鼠氧化壓力的抑制作用，將60只雌鼠分6組喂食，時(shí)間為2周，測(cè)定小葉龍船花提取物對(duì)小鼠的體重和肝腎的重量、血液生化指標(biāo)和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX）活力和丙二醛（MDA）的影響，并對(duì)肝組織進(jìn)行切片掃描.結(jié)果表明：?jiǎn)为?dú)服用小葉龍船花提取物對(duì)小鼠體重和肝、腎的重量，血液生化指標(biāo)及肝切片掃描圖片無(wú)明顯變化，但明顯提高了GSH-PX酶活力，降低MDA值；但在醋酸鉛引起的氧化壓力的條件下，小葉龍船花提取物能明顯提高GSH-PX酶活力，改善血液生化指標(biāo).此外，這種改善在先口服醋酸鉛后口服小葉龍船花提取物組表現(xiàn)的最顯著.

小葉龍船花；醋酸鉛；氧化壓力

鉛中毒被認(rèn)為由氧化壓力引起的主要途徑，氧化壓力也是造成現(xiàn)代人肌膚衰老的重要原因.小葉龍船花（Ixora coccinea L.）又名山丹、仙丹花，為茜草科常綠小灌木，分布于廣東、廣西、臺(tái)灣、福建、海南等地[1].Latha and Panikkar（1998）報(bào)道小葉龍船花提取物有抗腫瘤作用[2].Moni Rani Saha（2008）認(rèn)為小葉龍船花提取物的有體外抗自由基能力，認(rèn)為起到抗氧化作用的主要是黃酮、甾醇類和單寧等物質(zhì)[3].研究小葉龍船花提取物對(duì)醋酸鉛引起的雌鼠氧化壓力的抑制作用.實(shí)驗(yàn)分6組，分別測(cè)定6組小鼠體重、血液生化指標(biāo)和抗氧化指標(biāo)MDA和GSH-PX[4-6]，并對(duì)肝組織切片掃描，期望小葉龍船花提取物為人們的疾病提供新的治療途徑.

1 材料與方法

1.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器

RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；721型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海第三分析儀器廠）；電子天平（OEM型奧豪斯國(guó)際貿(mào)易（上海有限公司）；DHG-9246A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；TDL-5-A型離心機(jī)（海南新衛(wèi)醫(yī)藥有限公司）.

1.2 藥品

小葉龍船花乙醇（95%）提取物，注射用醋酸鉛，測(cè)試用GSH-PX和MDA試劑盒由南京建成生物工程研究所提供（規(guī)格：100T）；ALT（丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶）、AST（谷草轉(zhuǎn)氨酶）、TP（總蛋白）、ALB（白蛋白）、BUN（尿素氮）和TG（甘油三酯）等試劑由本校附屬醫(yī)院提供.

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康昆明種雌鼠60只，體重30±2g，由四川大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供.

1.4 方法

1.4.1 小葉龍船花提取物的提取

晴天采摘小葉龍船花的花，置于熱風(fēng)干燥箱40℃干燥，將干燥的花粉碎至50目，正己烷浸泡2d，過(guò)濾得到浸出液，濾渣再用無(wú)水乙醇浸泡2d.取乙醇浸提液至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中濃縮得到紅色濃縮液，將濃縮液用硅膠100～200目柱過(guò)柱，以正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇為1∶4∶3的混合液作為洗脫劑，分離得紅色液體.

1.4.2 氧化壓力雌鼠模型的建立和有關(guān)測(cè)定方法

建立醋酸鉛引起的雌鼠氧化壓力模型，分為6組，每組10只雌鼠.飼養(yǎng)2周：第1組：每日口服100 mg/kg小葉龍船花提取物（N1）；第2組：每日口服20 mg/kg醋酸鉛（N2）；第3組：先每日口服100 mg/kg小葉龍船花提取物1周，后每日口服20 mg/kg醋酸鉛1周（N3）；第4組：先每日口服20 mg/kg醋酸鉛1周，后每日口服100 mg/kg小葉龍船花提取物1周（N4）；第5組：同時(shí)每日口服20 mg/kg醋酸鉛和100 mg/kg小葉龍船花提取物（N5）；第6組：正常組（N6）.觀察這些動(dòng)物每天的毒性跡象.每日記錄食物攝入和體重.在實(shí)驗(yàn)14d結(jié)束后，收集眼眶靜脈血，一部分用于分析ALT、AST、BUN、TP、ALB和TG.另一部分按GSH-PX和MDA試劑盒方法測(cè)定其吸光度值.

2 結(jié)果

1）體重和肝腎變化

與N6組相比,其他五組雌鼠的體重都減輕，其中N2組及N4組減輕的相對(duì)較少，N5組減輕最多，結(jié)果見(jiàn)表1.雌性小鼠肝腎重量的影響見(jiàn)表2，與N6組相比，各組雌鼠肝重及腎重均減少，但變化不大，僅N5組肝腎重明顯降低，統(tǒng)計(jì)分析（p＜0.05）顯示對(duì)肝腎重量并無(wú)很大影響.

2）血液生化指標(biāo)

表3列出了血液的生物化學(xué)指標(biāo)，N1組和N6組的血液生化指標(biāo)沒(méi)有顯著差異.N2組增加ALT、AST和 BUN值，減少TP、ALB和TG值.N3、N4和N5三組明顯改善血液指標(biāo)，減少TG和BUN指標(biāo)，其中N3組降低TG和BUN效果最好.

3）小葉龍船花提取物對(duì)GSH-PX酶活力及MDA的影響

表4顯示小葉龍船花提取物對(duì)GSH-PX酶活力和MDA的影響.數(shù)據(jù)表明：與N6組相比，N2組肝組織MDA顯著增加，GSH-PX酶活力水平顯著降低.

表1 灌胃對(duì)雌性小鼠體質(zhì)量（g）的影響Tab.1 The effect on weight of female rats after oral administration

而N1組對(duì)肝組織MDA影響較小，但GSH-PX酶活力水平增大.N3、N4和N5三組均有增加GSH-PX酶活力，降低MDA的作用，其中N5組明顯增加GSH-PX酶活力水平，N4組顯著降低MDA水平，實(shí)驗(yàn)表明小葉龍船花提取物對(duì)由醋酸鉛引起的肝組織的損傷具有保護(hù)作用.

表2 灌胃對(duì)雌性小鼠肝腎重量影響Tab.2 Effects on liver and kidney weight of female rats after oral administration

4）肝切片掃描

附圖1肝切片的顯微照片包括：N1組（A1，A2）呈現(xiàn)或多或少正常的肝細(xì)胞，核子和中央靜脈（40×，20×）；N2組呈現(xiàn)門管擴(kuò)張及擴(kuò)散到不同區(qū)域的單核炎癥細(xì)胞大量聚合（B2）（20×），脂肪變性及核間夾雜，核子支離破碎和固縮（B1）（40×）；

N3組（C1，C2）呈現(xiàn)同樣的門管擴(kuò)張（40×，20×）；N4組（D1，D2）呈現(xiàn)正常肝細(xì)胞明顯結(jié)構(gòu)（40×，20×）；N5組（E1，E2）呈現(xiàn)肝細(xì)胞泡囊核突出（40×，20×）；N6組（F）呈現(xiàn)正常肝細(xì)胞及中央靜脈.

3 討論

本實(shí)驗(yàn)研究小葉龍船花提取物對(duì)氧化壓力的抑制作用.結(jié)果表明，小葉龍船花提取物能抑制醋酸鉛引起的雌鼠氧化壓力.先治療口服小葉龍船花提取物后口服醋酸鉛時(shí)，可以起到降低甘油三酯的作用，減少醋酸鉛引起的氧化壓力作用，研究結(jié)果為相關(guān)疾病的治療提供了理論依據(jù).

表3 雌性小鼠血液指標(biāo)Tab.3Serum biochemical parameters in female rats

表4 不同給藥方式對(duì)雌性小鼠全血GSH-PX酶活力及MDA值的影響Tab.4 Effects of different treatments on MDA and GPX in blood of rats in different treatment groups

[1]中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志(第三十九卷)[M].北京:科學(xué)出版社,1988:38．

[2]Latha P G,Panikkar K R.Cytotoxic and antitumour prin?ciples from Ixora coccinea flowers[J].Cancer Lett 1998,130:197-202.

[3]Saha M R,Alam M A,Akter R,et al.In-vitro free radical scavenging activity of Ixora coccinea L[J].Bangladesh J Pharmacol 2008,3:90-96.

[4]李亞.旦淀粉樣蛋白對(duì)衰老模型大鼠學(xué)習(xí)記憶及大腦皮層內(nèi)脂褐素含量的影響[J].中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志,2001,15(4):311-313.

[5]Haman A D.A theory based on free radical and radiation[M].Univ Califormia Ra-diation Ladiation Laboratory Report,1995:3078.

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Inhibitory Effect of Ixora Coccinea L.Against Lead Acetate-induced Oxidative Stress

LIANG Xuan1，MO Guo1，CHEN Xin2，DU Yunyun2，LIU Hong1，3＊，JIA Guiyun1
（1.College of Chemistry and Chemical Engineering，Hainan Normal University，Haikou571158，China；2.College of Physics and Electronic Engineering，Hainan Normal University，Haikou571158，China；3.Hainan Provincial Key Lab of Tropical Pharmaceutical Herb Chemistry，Haikou571158，China）

In order to study the antioxidant activity of the ethanol extract of Ixora coccinea L.flowers against lead ace?tate(LA)-induced oxidative stress in female rats,60 female rats were divided into 6 groups to be fed,The feeding time was two weeks to evaluate the effect on the body weight,the liver and kidney weight,the Serum biochemical parameters and Glutathione peroxidase（GSH-PX）and Propanedial（MDA）in female rats,and the slice scanning of the liver tis?sue.The Results indicated that the Ixora coccinea L.Flowers extract alone did not induce any significant changes in body weight gain,serum biochemical chemistry or the histological picture of the liver.However,it increased significantly the level of and decreased the level of MDA.However,under the conditions of the lead acetate-induced oxidative stress,The extract succeeded to increase significantly the level of GSH-PX and improve biochemical parameters.Moreover,this im?provement was pronounced in the animals treated with the extract after LA intoxication.

Ixora coccinea；Lead acetate；Oxidative stress

TQ 072

A

1674-4942（2011）02-0194-04

2011-03-08

海南師范大學(xué)國(guó)家大學(xué)生創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)計(jì)劃資助項(xiàng)目（091165814）；海南師范大學(xué)物理化學(xué)重點(diǎn)學(xué)科資助項(xiàng)目

*通訊作者

畢和平