白黎蘆醇抑制動脈粥樣硬化炎性反應的研究進展

李 琳，孫 林

（昆明醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院心內科，昆明 650101）

動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）是一種慢性炎性反應。近年來，從信號轉導和基因調控水平的研究揭示炎癥貫穿了AS發(fā)生和發(fā)展的所有環(huán)節(jié)。白黎蘆醇（resveratrol）是一種多酚類化合物，可通過抗炎作用起到心血管保護作用。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，白黎蘆醇通過保護細胞內皮功能、調控炎性細胞因子及介導炎癥相關信號轉導通道保護血管內皮功能、調控炎性反應的發(fā)生發(fā)展全過程，為AS的防治提供新的思路和方法?，F(xiàn)就白黎蘆醇抑制AS炎性反應的研究進展進行綜述。

1 白黎蘆醇的生物藥理作用

1989年WHO“莫尼卡項目”的流行病學調查發(fā)現(xiàn)，法國人冠狀動脈粥樣硬化性心臟?。ê喎Q冠心病）發(fā)病率和病死率比其他西方國家低得多，這一現(xiàn)象被稱為“法蘭西奇跡”。這與法國人進餐時飲用的紅葡萄酒有關，其中起主要作用的就是白藜蘆醇。白黎蘆醇化學名稱為 3，4'，5，-三羥基二苯乙烯，在葡萄中的含量尤為豐富，每克新鮮的葡萄皮中含50～100 μg，在紅葡萄酒中其濃度高達 1．5～3．0 mg/L。白黎蘆醇有抗炎癥、抗氧化應激、抗血小板聚集、抗增殖［1，2］、抑制脂質過氧化，增強膽固醇流出［3］，抗動脈硬化等作用。

2 AS的發(fā)病機制

AS發(fā)病機制錯綜復雜，尚不完全清楚。AS發(fā)病學說，如血栓形成學說、脂質浸潤學說、平滑肌細胞增殖學說、氧化應激學說、同型半胱氨酸學說等都不足以完全解釋AS性疾病的發(fā)病基礎。直到20世紀末，AS的另一重大學說——炎 癥 學 說 才 由Ross［4］正式提出。隨著一些化學因子和細胞因子不斷檢出，進一步說明炎癥貫穿了AS性疾病的發(fā)生和發(fā)展的所有環(huán)節(jié)，從脂紋現(xiàn)象到斑塊形成乃至斑塊破裂、血栓形成導致臨床事件的各個階段，都可以看作是血管對損傷的炎癥作用。

3 白黎蘆醇通過保護血管內皮功能抑制AS炎性反應的發(fā)生發(fā)展

血管內皮受損是冠狀AS的中心環(huán)節(jié)。內皮損傷表現(xiàn)為血管舒縮功能失調、凝血纖溶穩(wěn)態(tài)失衡、脂蛋白通透性改變等。內皮損傷參與炎性反應主要表現(xiàn)單核細胞和T淋巴細胞與內膜的黏附性增加。AS初始，單核細胞趨化蛋白1（monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1）可促進單核細胞激活并分化成巨噬細胞，進一步使低密度脂蛋白（lower density lipoprotein，LDL）氧化成氧化型低密度脂蛋白（oxidation lower density lipoprotein，ox-LDL），巨噬細胞通過不斷攝取ox-LDL變?yōu)楦缓|的泡沫細胞，此過程對AS發(fā)生發(fā)展起重要作用。在此過程中，免疫球蛋白超家族中的細胞黏附分子包括細胞間黏附分子1和血管細胞黏附分子1可介導單核細胞與內皮細胞牢固結合，然后遷入內膜下。有研究表明［5］，白黎蘆醇通過介導核因子 кB（nuclear factor kappa B，NF-кB）等不同信號通路通道，可以抑制MCP-1的合成與分泌，從而有效地抑制單核細胞的趨化。白黎蘆醇在體外減少血管細胞黏附分子1和細胞間黏附分子1的表達，以及抑制單核細胞向內皮細胞的黏附，從而在AS起步階段起到抑制作用［6］。

此外，內皮功能受損可引起血小板參與的炎性反應。內皮細胞釋放的擴血管物質前列環(huán)素及一氧化氮除了具有血管活性外，兩者還具有抑制血小板黏附和聚集的作用，目前認為血小板也是一種炎性細胞，活化的血小板可分泌炎性介質。研究發(fā)現(xiàn)［7］，高膽固醇飲食喂養(yǎng)的兔子呈現(xiàn)血管內皮功能降低，其血漿中一氧化氮水平明顯降低。隨著白黎蘆醇的攝入，血漿一氧化氮水平明顯提高，其抑制血小板活化的作用也明顯增強。這些結果表明，白黎蘆醇改善血管內皮功能，抑制與血小板相關的炎性反應，表現(xiàn)出心臟保護作用。

4 白黎蘆醇通過調控炎性因子抑制粥樣硬化斑塊的進展與破裂

免疫細胞（如中性粒細胞、巨噬細胞）是炎癥過程中的關鍵組成部分，這些細胞產生多種不同的促炎性因子，并且相互作用促進斑塊的進展乃至破裂，在AS炎癥過程中起重要作用。

4．1 白細胞介素1β 白細胞介素1β（interleukin-1 bata，IL-1β）抑制炎性反應的主要機制是:①IL-1β可以抑制內皮細胞的增殖，誘導其表達黏附分子，引起單核-巨噬細胞和T淋巴細胞的聚集和浸潤，從而啟動AS形成;②纖維蛋白水解過程減弱時，IL-1β調節(jié)內皮細胞產生促凝活性以促進血栓形成;③IL-1β促進內皮細胞產生前列腺素和血小板活性因子;④IL-1β還參與脂代謝、單核細胞的增殖與分化、細胞外基質和血小板源生長因子的產生，而且能增加血管通透性;在缺血性心臟病的冠狀動脈內皮細胞中確也發(fā)現(xiàn)了IL-1β的顯著增加。白黎蘆醇通過抑制IL-1β所介導的NF-кB通路的表達，從而抑制細胞因子的活化，降低炎性反應［8］。

4．2 白細胞介素6 白細胞介素6（interleukin-6，IL-6）通過誘導血小板源生長因子促進血管平滑肌增殖，促進血管內皮細胞增生，誘導趨化因子和黏附分子的表達、釋放，促進白細胞浸潤，削弱內皮產生一氧化氮的能力。這些共同作用將導致促凝活性增強，促進AS的形成。前瞻性的研究表明，IL-6是健康人發(fā)生心血管事件的獨立預測因子。白黎蘆醇通過抑制IL-6基因啟動子活性，可以明顯抑制血管平滑肌細胞中IL-6基因的轉錄和蛋白的表達，這種抑制呈劑量依賴性。白黎蘆醇也通過抑制NF-κB的活性，從而抑制IL-6基因的表達［9］。

4．3 C反應蛋白 C反應蛋白（C-reactive protein，CRP）是肝臟合成的急性期反應蛋白，能明顯下調內皮合成一氧化氮、刺激內皮釋放內皮素1和IL-6、上調黏附分子、促使MCP-1分泌以便巨噬細胞吞噬LDL。高敏C反應蛋白是AS性疾病和冠心病的獨立危險因素，其循環(huán)中濃度升高作為冠心病的早期診斷和病情檢測的指標。Karlsen等［10］發(fā)現(xiàn)，至少患有一個冠心病危險因素的志愿者連續(xù)服用4周的越橘（含大量的白黎蘆醇）后，結果顯示血漿中CRP、IL-6等所致的單核細胞的數量比對照組（服用4周的水）明顯降低;并觀察到越橘中多酚化合物——白黎蘆醇，能抑制單核細胞中NF-κB激活，從而抑制炎性反應的進程。

4．4 腫瘤壞死因子 α 動物實驗［11］發(fā)現(xiàn)，動脈粥樣斑塊明顯的實驗組腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-alpha，TNF-α）水平較對照組明顯升高，說明TNF-α與AS的發(fā)生有密切關系。其機制可能是:①通過細胞毒作用損傷血管內皮細胞，通透性增高，血中膽固醇易于在管壁內沉積形成粥樣斑塊。②TNF-α與血管內皮細胞表面受體結合，使纖溶酶原激活劑抑制物生成增多，使促凝與抗凝之間平衡失調，最終導致纖溶酶活性低下，血栓形成。③下調血栓調節(jié)素的表達，抑制具有凝血作用的蛋白C的激活。④刺激內皮細胞合成并釋放具有組織因子樣促凝血作用的IL-1，與TNF-α產生協(xié)同作用。白黎蘆醇通過抑制TNF-α刺激內皮細胞黏附分子的表達，從而抑制內皮細胞活化。白黎蘆醇還能通過抑制TNF-α誘導的血管平滑肌細胞的增殖、平滑肌細胞基質金屬蛋白酶的表達，起到抗AS的作用［12］。

5 白黎蘆醇通過介導不同炎癥相關信號通路及信號轉導分子抗AS

5．1 NF-κB信號通路 NF-κB是一種由Rel家族蛋白構成的二聚體轉錄因子。諸多炎性介質的基因序列中有NF-κB的結合位點，NF-κB的激活導致炎癥中大量因子的表達，包括細胞因子如TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1、化學增活素以及細胞黏附分子，引起持續(xù)的炎性反應破壞血管內皮細胞層，促進AS的發(fā)展。在早期LDL修飾和炎性介質形成過程中有幾種重要的酶，包括環(huán)氧合酶2、誘導型一氧化氮合酶等，這些酶均受NF-κB調控。

Leiro等［13］研究表明，白黎蘆醇明顯阻止 NF-κB家族基因的表達以及抑制黏附分子和急性期反應蛋白的生成。白黎蘆醇及其衍生物調控炎性介質的轉錄機制包括 C/EBP、Fos/Jun、激活蛋白以及 NF-κB。其抑制NF-κB的作用突顯白黎蘆醇的抗炎作用。白黎蘆醇作為NF-κB的抑制劑，減弱由TNF-α誘導的冠狀動脈內皮細胞的活化，減弱促炎因子的表達［14］。同樣，對于由血管緊張素Ⅱ激活所介導的炎性反應，白黎蘆醇通過抑制NF-κB通路，明顯降低細胞因子的表達［15］。白黎蘆醇通過干預NF-κB信號轉導通路，可以抑制眾多炎性介質的激活與生成，這提示白黎蘆醇可作為一種新的安全的藥物抑制慢性炎癥、抑制AS的形成與發(fā)展。

5．2 Janus激酶/信號轉導活化子和轉導子信號通路（Janus kinase signal transduction and transcription activator，JAK-STAT）Janus激酶（JAK）包括 JAK1、JAK2、JAK3和Tyk2。JAK的酪氨酸磷酸化底物是信號轉導活化子和STAT家族成員。研究發(fā)現(xiàn)大量的細胞因子、生長因子和激素均能激活JAK和（或）STAT蛋白。例如，IL-6可與其受體結合后激活JAK1和STAT3。干擾素α激活JAK1和JAK2后通常再激活STAT蛋白。IL-10可以通過不同的受體分別激活與它們相連的JAK1和Tyk2。JAK-STAT通路激活后可以啟動促炎細胞因子的表達。白黎蘆醇通過抑制STAT3磷酸化，減少IL-6介導的細胞黏附因子在內皮細胞中的基因表達［16］。

5．3 絲裂原活化蛋白激酶信號轉導通路 絲裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase，MAPK）是一類絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，哺乳細胞至少克隆了ERK1/2、JNK、p38和NEK5四個MAPK家族。MAPK對細胞的增殖、分化、凋亡及應激反應具有重要的調控作用。MAPK通路對調節(jié)TNF-α、IL-1、IL-6等炎性因子的釋放起重要作用，而TNF-α、IL-1、IL-6等又能激活NF-κB。因此，AMPK通路對NF-κB的活化可能有重要的調控作用。

白黎蘆醇通過抑制MAPK的磷酸化對細胞凋亡起到保護作用［17］。在人類肥大細胞系炎性反應機制中，NF-κB與MAPK充當了關鍵的角色，白黎蘆醇通過降低細胞內鈣離子水平、抑制ERK 1/2及NF-κB的活化從而抑制TNF-α、IL-6、IL-8及環(huán)氧合酶2的表達;通過白黎蘆醇治療后，ERK1/2的磷酸化程度明顯下降［18］。還有研究表明［19］，攝取白黎蘆醇達到一定濃度后，通過激活血小板一氧化氮合酶這種途徑，能明顯提升一氧化氮的水平、增強一氧化氮合酶的活性、降低p38 MAPK的磷酸化，起到抗炎作用。

5．4 Toll樣受體/髓性分化因子88信號通路 Toll樣受體（Toll-like receptors，TLR）具有兩個特征性的結構域，分別是TIR和LRR。其中TIR結構域在轉導TLR信號通路中具有重要作用。TIR通過一系列信號轉導作用，最終形成兩條信號通路:一條最終導致NF-κB活化，另一條則活化MAPK。當TLR通路激活后可促進炎性因子的表達。TLR可協(xié)同p38 MAPK、NF-κB等激活血管平滑肌細胞中炎性因子的轉錄過程。最近研究表明，TLR-4競爭結合的特定的脂多糖通過血管平滑肌細胞及ERK1/2中轉錄過程的激活，導致 IL-6的增多，在這個過程中，p38 MAPK、NF-κB 及 C/EBP 充當著激活的作用［20］。在動物實驗炎性反應中［21］，白黎蘆醇能明顯抑制TLR的表達，有效抑制脂質過氧化反應，減少反應性氧化產物的產生及炎性因子的表達。

6 小結

AS是一種慢性炎癥狀態(tài)。炎性因子在AS的發(fā)生發(fā)展中的互相作用及信號轉導通路在炎癥中的分子機制是AS研究中的一個新領域。白黎蘆醇通過保護血管內皮功能、調控眾多炎性介質及介導炎癥相關信號通道調控炎癥發(fā)生發(fā)展的全過程。隨著對白黎蘆醇抑制AS炎性反應的機制研究的深入開展，應不斷探索和開辟研究的新視角，為臨床AS疾病的防治提供新的靶點和思路。

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