蜂膠軟膠囊的體外溶出度測(cè)定

王靈波，蔣旭凱

(1.浙江省慈溪市第二人民醫(yī)院藥劑科，315315;2.湖州師范學(xué)院生命科學(xué)院，313000)

蜂膠是蜜蜂從長(zhǎng)膠源植物的樹(shù)芽、樹(shù)皮等部位采集的樹(shù)脂，再混以蜜蜂舌腺和蠟腺等腺體的分泌物，經(jīng)蜜蜂反復(fù)代謝合成的一種膠狀物質(zhì)。其功效主要成分是黃酮類化合物，研究顯示其具有抗菌消炎、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化［1-4］等多種功效，現(xiàn)已成為各國(guó)科學(xué)研究的熱點(diǎn)。蜂膠軟膠囊是采用優(yōu)質(zhì)提純蜂膠加工溶解后，以適當(dāng)比例加入輔料中制成的軟膠囊。查閱相關(guān)資料發(fā)現(xiàn)，目前關(guān)于蜂膠軟膠囊的溶出度測(cè)定研究報(bào)道較少。筆者以蜂膠黃酮溶出度為評(píng)價(jià)指標(biāo)，研究蜂膠軟膠囊的體外溶出度。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 ZRS-8型智能溶出儀(天津大學(xué)無(wú)線電廠)，752型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海光譜儀器有限公司)，KQ-100B型超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司)，BS124S型電子天平 (賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)，數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱(上海博訊實(shí)驗(yàn)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)。

1.2 樣品和試劑 純蜂膠(廣州禾杰蜂業(yè)有限公司)，蜂膠軟膠囊(廣州禾杰蜂業(yè)有限公司，規(guī)格:每粒0.5 g，批號(hào):091201，091202，091203)，鹽酸(浙江衢州巨化集團(tuán))，蘆丁對(duì)照品(含量≥99%，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):100080-200306)，聚乙二醇400(上海市南群化工有限公司)，丙三醇(北京市化工技術(shù)有限公司)。所用輔料為藥用規(guī)格，所用試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶出介質(zhì)的選擇［5］蜂膠軟膠囊標(biāo)示含量每粒0.5 g，含蜂膠總黃酮含量為30.13 mg。為模擬胃液酸度，選擇0.1 mol·L-1鹽酸(9→1 000 mL)為蜂膠軟膠囊溶出度測(cè)定介質(zhì)，可滿足溶出條件。

2.2 線性關(guān)系考察

2.2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 分別稱取蘆丁對(duì)照品和純蜂膠適量，以0.1 mol·L-1鹽酸為溶劑，超聲處理溶解，用紫外分光光度計(jì)在200～400 nm范圍內(nèi)掃描，結(jié)果見(jiàn)圖1和圖2。從紫外光譜圖所見(jiàn)，蘆丁和純蜂膠吸收?qǐng)D譜基本一致，純蜂膠中除黃酮外的其他物質(zhì)對(duì)其吸光度的影響可忽略不計(jì)。在265 nm和(372±5)nm處都有特征吸收峰，265 nm處吸光度最大，故選取265 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線建立［6-7］精密稱取105℃干燥至恒質(zhì)量的蘆丁對(duì)照品0.100 2 g，加0.1 mol·L-1鹽酸溶液，在50～60℃超聲(功率250 W，頻率20 kHz)30 min使其溶解并放冷至室溫，并定容至100 mL量瓶中，吸取5.0 mL置于500 mL量瓶中，加0.1 mol·L-1鹽酸溶液，充分振蕩均勻，稀釋至刻度，此時(shí)蘆丁濃度10μg·mL-1。分別精密吸取該溶液 1.0，2.0，4.0，6.0，7.0，8.0 mL，置 于 10 mL 比 色 管 中，加0.1 mol·L-1鹽酸溶液至10 mL，制成蘆丁濃度為1.0，2.0，4.0，6.0，7.0，8.0 μg·mL-1溶液，以 0.1 mol·L-1鹽酸溶液作參比液，在265 nm處測(cè)定吸光度值，以吸光度(A)對(duì)蘆丁濃度(C)作直線回歸，得線性回歸方程:A=0.093 1C-0.058 8，r=0.999 5，表明蘆丁在1.0～8.0μg·mL-1濃度范圍內(nèi)A和濃度呈良好的線性關(guān)系。

圖1 蘆丁紫外吸收光譜Fig．1 Ultraviolet absorption spectrum of rutoside

圖2 純蜂膠紫外吸收光譜Fig．2 Ultraviolet absorption spectrun of propolis

2.3.4 精密度實(shí)驗(yàn) 取線性關(guān)系下配制的4.0，6.0，8.0μg·mL-13種樣品溶液，測(cè)定上述3種濃度溶液吸光度各6次。RSD=0.54%(n=18)，精密度符合規(guī)定。

2.3.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn)［8］精密稱取同一批軟膠囊內(nèi)容物(不含空膠囊黃酮含量81.43 mg·g-1)共6份，各加入一定量對(duì)照品溶液(4μg·mL-1)，依法測(cè)定。平均加樣回收率為99.35%，RSD=1.51%(n=6)。

2.4 軟膠囊溶出影響因素的考察

2.4.1 溶出方法選擇 分別按溶出度測(cè)定法(《中華人民共和國(guó)藥典》2010版附錄XC［9］-轉(zhuǎn)籃法和槳法)測(cè)定，取樣品1粒，以0.1 mol·L-1鹽酸溶液1 000 mL為介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為100 r·min-1，溫度(37.0±0.5)℃，分于10，20，30，45，60 min 時(shí)取樣 5 mL(隨即補(bǔ)充同溫空白介質(zhì)5 mL)，經(jīng)孔徑0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液，作為供試品溶液，精密量取續(xù)濾液2.00 mL，置10 mL比色管中。加0.1 mol·L-1鹽酸至刻度，用紫外分光光度計(jì)測(cè)其吸光度值，計(jì)算累積溶出百分率。結(jié)果表明，當(dāng)采用轉(zhuǎn)籃法100 r·min-1測(cè)定本品溶出度，45 min取樣測(cè)定，溶出度達(dá)86.73%，且溶出均勻，而采用槳法100 r·min-1時(shí)，溶出度只有80.05%，且囊殼溶解后易附著于杯底，阻止藥物的溶出，溶出均一性差，故選擇轉(zhuǎn)籃法作為樣品溶出度的測(cè)定方法。

2.4.2 轉(zhuǎn)速的選擇 取同批次樣品3粒，投入3個(gè)溶出杯中，分別以 50，75，100 r·min-1的轉(zhuǎn)速，45 min 時(shí)按“2.4.1”取樣，測(cè)定溶出度，當(dāng)轉(zhuǎn)速為 50，75和100 r·min-1時(shí)，45 min溶出度分別75.27%，83.52%，85.86%。為使樣品充分溶出，采用轉(zhuǎn)速100 r·min-1，該轉(zhuǎn)速也是《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版(二部)收載的有關(guān)膠囊劑溶出度測(cè)定所選用的常用轉(zhuǎn)速。

2.5 溶出度測(cè)定

2.5.1 溶出均一性 分別將同批6粒蜂膠軟膠囊置于6個(gè)溶出杯中，轉(zhuǎn)速為100 r·min-1，參照“2.4.1”分別于 10，20，30，45，60，70 min 取樣測(cè)定，按回歸方程計(jì)算累計(jì)溶出量。結(jié)果見(jiàn)表1，結(jié)果表明，樣品溶出均一性良好。

以時(shí)間(t，min)為橫坐標(biāo)，平均累積溶出百分率(%)為縱坐標(biāo)作圖，見(jiàn)圖3。

2.5.2 溶出參數(shù)提取 由威布爾(Weibull)分布函數(shù)可推導(dǎo)出 lnln{1/［1-F(t)］}=m ln(t- τ)-ln t0。借助Excle［10］，根據(jù)同批次不同時(shí)間平均累積溶出量求得Y=1.087 3X-3.408 4，lnln{1/［1-F(t)］}=1.087 3ln t-ln t0，得出溶出參數(shù) T50=16.41，Td=22.

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 空白干擾實(shí)驗(yàn) 取樣品空膠囊和輔料(聚乙二醇400和丙三醇)分別制成溶液，測(cè)定A值，結(jié)果顯示，空膠囊和輔料對(duì)蜂膠軟膠囊A值測(cè)定基本無(wú)影響。

2.3.2 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取濃度為6.0μg·mL-1的樣品溶液6份，平行測(cè)定其A值，平均A值為0.502，RSD=0.33%，重復(fù)性良好。

2.3.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取濃度為8.0μg·mL-1的樣品溶液，分別于 0.5，1.0，1.5，2.0，2.5h 測(cè)定其 A，結(jié)果平均A為0.679，RSD=0.19%，表明樣溶液在2.5 h內(nèi)穩(wěn)定。98，T80=35.6，m=1.087 3。

表1 樣品累計(jì)溶出量Tab．1 Cumulative dissolution of the samples %

圖3 蜂膠軟膠囊溶出曲線Fig．3 Dissolution curves of propolis soft capsules

2.5.3 不同批次軟膠囊溶出度測(cè)定 選取3批蜂膠膠囊，每批6粒，依本文溶出度測(cè)定法測(cè)定其45 min時(shí)溶出量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 3批次樣品45 min時(shí)溶出度Tab．2 Dissolution of the three batchs of samp les at 45 m in %

3 討論

由表2可知，3批蜂膠膠囊在45 min的溶出量均大于標(biāo)示含量的80%，符合《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版二部的要求，表明本溶出度實(shí)驗(yàn)及測(cè)定條件穩(wěn)定可行。溶出方法選用轉(zhuǎn)籃法，以0.1 mol·L-1鹽酸溶液(9→1 000 mL)為溶出介質(zhì)，體積1 000 mL，轉(zhuǎn)速100 r·min-1，恒溫(37.0±0.5)℃，采用紫外分光光度法測(cè)定吸光度，測(cè)定波長(zhǎng)265 nm，45 min時(shí)取樣，測(cè)定吸光度，計(jì)算溶出度。該方法可靠、準(zhǔn)確、快速，可作為蜂膠軟膠囊的溶出度的測(cè)定方法，能為考察和控制蜂膠軟膠囊的質(zhì)量提供參考，若樣品45 min時(shí)的藥物溶出標(biāo)示量＞80%為合格。

本文中蜂膠軟膠囊的溶出速率不是很快，45 min溶出度未達(dá)到90%，可能是由于軟膠囊制劑的溶出度測(cè)定不同于一般的片劑和硬膠囊，本品內(nèi)容物為油狀混懸液，囊殼破裂后遇水溶性的溶出介質(zhì)，油相有時(shí)因不能較快分散而易結(jié)成塊狀物，影響主藥的溶出。且囊殼中含明膠，長(zhǎng)期放置易粘連老化，溶出實(shí)驗(yàn)時(shí)易堵塞籃孔，對(duì)藥物的溶出有阻礙作用。

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