高效液相色譜法測(cè)定黑白芝麻中芝麻素含量*

葉子晨，梁佳龍，劉雪英，王慶偉，李曉曄，李穆瓊

(1.第四軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)系學(xué)員隊(duì)，西安 710033;2.第四軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)系藥物化學(xué)教研室，西安 710033;3.第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院藥劑科，西安 710038)

芝麻又名胡麻，《神農(nóng)本草經(jīng)》記載:“芝麻，補(bǔ)心臟，益氣力，長(zhǎng)肌肉，填髓腦，久服強(qiáng)身”。芝麻分黑、白兩種，《本草綱目》記載:“胡麻取油，以白者為勝，服食以黑者為良。”芝麻素屬木脂素類化合物，系芝麻的主要活性成分之一 。研究表明，芝麻素具有抗氧化［1］、調(diào)節(jié)血壓［2］、保護(hù)肝臟［3］和抑制腫瘤［4］等藥理作用。筆者采用高效液相色譜(HPLC)法對(duì)黑、白芝麻中的芝麻素進(jìn)行了測(cè)定比較。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 SHIMADZU LC-2010ATH高效液相色譜儀;電子分析天平(梅特勒公司 );KQ-32000DB型數(shù)控超聲波儀(昆山超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥 黑芝麻1(購(gòu)于陜西省西安市藥材市場(chǎng)，產(chǎn)地:陜西省咸陽(yáng)市);黑芝麻2(購(gòu)于陜西省西安市華潤(rùn)萬(wàn)家超市，產(chǎn)地:湖北省咸寧市);白芝麻 (購(gòu)于陜西省西安市藥材市場(chǎng)，產(chǎn)地:陜西省咸陽(yáng)市);芝麻素對(duì)照品(陜西施普利生物科技有限公司提供，含量:98%，批號(hào):20090818001);甲醇 (色譜純，F(xiàn)isher公司 )，色譜用水為雙蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備 對(duì)照品溶液的制備:精密稱取芝麻索對(duì)照品6.11 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，低溫避光保存?zhèn)溆?。供試品溶液的制?照《中華人民共和國(guó)藥典》2005年版附錄ⅡD清炒法［5］分別炒制黑、白芝麻備用。取不同來(lái)源芝麻生品或炒制品適量，搗碎，精密稱取1.0 g，置具塞三角燒瓶中，精密加甲醇10 mL，稱質(zhì)量，低溫超聲30 min，再稱質(zhì)量，補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，靜置30 min取上清液過孔徑0.45μm有機(jī)膜過濾，濾液低溫避光保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 取芝麻素對(duì)照品溶液適量，用甲醇稀釋，以甲醇為空白對(duì)照，200～400 nm范圍掃描，結(jié)果芝麻素在203，234及287 nm有最大吸收峰，為排除雜質(zhì)對(duì)測(cè)定的影響，選擇287 nm為HPLC分析測(cè)定波長(zhǎng)。

2.3 色譜條件 色譜柱:Iinertsil ODS-3(150 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇-水 (75∶25);流速:1 mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng):287 nm，進(jìn)樣量:20μL，溫度:室溫。

2.4 方法專屬性 取適當(dāng)濃度芝麻素對(duì)照品溶液、供試品溶液，在上述色譜條件下分別進(jìn)樣，記錄色譜圖(圖1)。樣品溶液中其他未知成分與芝麻素分離完全，對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，芝麻素的保留時(shí)間為8.5 min。

圖1 3種溶液HPLC色譜圖A.對(duì)照品;B.黑芝麻樣品;C.白芝麻樣品;1.芝麻素

2.5 線性范圍考察 精密量取芝麻素對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，置于10 mL量瓶中，用甲醇逐步稀釋至刻度，搖勻得濃度分別為 0.60，3.00，6.00，14.97，29.94，59.88，89.82μg·mL-1的對(duì)照品溶液，分別吸取上述溶液20μL色譜條件下進(jìn)樣，記錄峰面積，以峰面積(Y)對(duì)濃度進(jìn)行回歸，芝麻素在0.60～89.82 mg·L-1濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為:Y=30 133.83X-3 145.52(r=0.999 9，n=3)。

2.6 精密度實(shí)驗(yàn) 取芝麻素低、中、高3種濃度對(duì)照品溶液，同一天連續(xù)進(jìn)樣3次，進(jìn)樣量20μL，測(cè)定峰面積，計(jì)算芝麻素的日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。連續(xù)3 d進(jìn)樣3次，測(cè)定峰面積，計(jì)算芝麻素的日間RSD。結(jié)果見表1，表明在該色譜條件下儀器精密度良好。

表1 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果 %

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取白芝麻品溶液，在配制后0，6，12和24 h于色譜條件下進(jìn)樣，芝麻素峰面積的RSD為0.82%。結(jié)果表明樣品溶液在該實(shí)驗(yàn)條件下24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱量同一批已知芝麻素含量的白芝麻樣品溶液1.0 mL，分成3組，每組3份，分別加入89.82μg·mL-1芝麻素對(duì)照品溶液0.2，1.0及3.0 mL。甲醇溶解定量至10 mL，搖勻，色譜條件下測(cè)定，計(jì)算芝麻素的加樣回收率。結(jié)果其平均回收率100.0%，RSD=0.81%，見表2。

表2 芝麻素的加樣回收率結(jié)果

2.9 樣品測(cè)定 精密吸取上述供試品溶液1.5 mL，置10 mL棕色量瓶中，甲醇定容，色譜條件下測(cè)定，依據(jù)工作曲線計(jì)算樣品溶液的濃度，黑、白芝麻中芝麻素的含量結(jié)果見表3。

3 討論

黑、白芝麻微量元素整體差異較明顯［6］，其中除白芝麻鈉(Na)含量大于黑芝麻3倍以上外，其余元素的含量白芝麻均低于黑芝麻。白芝麻中的硒(Se)含量為黑芝麻的 85%，鈣(Ca)、銅(Cu)、鉀(K)、鎂(Mg)、鋅(Zn)、鐵(Fe)的含量為黑芝麻的60% ～80%，而錳(Mn)含量則僅為黑芝麻含量的6%。

表3 樣品測(cè)定結(jié)果

本研究結(jié)果表明，炒制品中的芝麻素含量稍高于生品，可能是炒制后芝麻素易于溶出;所用的白芝麻中芝麻素的含量均高于兩個(gè)黑芝麻中的芝麻素;黑芝麻2生品和炒制品中的芝麻素含量很低，進(jìn)一步考察該黑芝麻出油率也很低，是否與產(chǎn)地和儲(chǔ)存時(shí)間過久有關(guān)有待于進(jìn)一步考察。筆者所用的黑芝麻1和白芝麻中芝麻素的含量均高于文獻(xiàn)報(bào)道［7］，可能與芝麻來(lái)源、芝麻素萃取方法及測(cè)定方法靈敏度不同有關(guān)。

《中華人民共和國(guó)藥典》歷版收載的均為黑芝麻，其中的活性成分芝麻素只是作為定性鑒別項(xiàng)目之一。隨著農(nóng)業(yè)科技的發(fā)展，芝麻的品種越來(lái)越多，以及相同品種有不同地域的產(chǎn)品，芝麻無(wú)論是作為油料資源，還是作為滋補(bǔ)藥，其質(zhì)量越來(lái)越受到人們的關(guān)注，因此有必要建立相關(guān)成分的測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)。筆者所建立的芝麻素測(cè)定方法簡(jiǎn)便快速、靈敏度高，可為芝麻及其制品中芝麻素的含量測(cè)定提供參考。

［1］ 吳向起，楊解人.芝麻素的抗氧化作用及其對(duì)代謝綜合征大鼠腎病的影響［J］.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2008，24(8):1065-1069.

［2］ 孔祥，楊解人.芝麻素對(duì)腎性高血壓大鼠主動(dòng)脈收縮功能一氧化氮和內(nèi)皮素含量的影響［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2006，12(4):47-49.

［3］ 崔云山，張善玉，樸惠順，等.芝麻素散劑對(duì)乙醇引起小鼠急性肝損傷的影響［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2005，16(1):6-7.

［4］ 魏艷靜，卞紅磊，余文靜，等.芝麻素對(duì)S180荷瘤小鼠的抗腫瘤作用研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2008，19(5):1075-1076

［5］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)［M］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄20.

［6］ 陳宇鴻.黑白芝麻無(wú)機(jī)元素含量測(cè)定分析［J］.微量元素與健康研究，1999，16(1):59-60.

［7］ 徐麗華，趙渤年，何心亮.黑芝麻中芝麻素的含量測(cè)定［J］.中國(guó)中藥雜志，1998，9(2):124-125.