腐敗蛋黃卵磷脂的提取

吳漢東

（遼寧醫(yī)學(xué)院，遼寧 錦州 121001）

腐敗蛋黃卵磷脂的提取

吳漢東

（遼寧醫(yī)學(xué)院，遼寧 錦州 121001）

對(duì)腐敗蛋黃卵磷脂的提取工藝進(jìn)行初步探討。結(jié)果表明，用95%乙醇提取3次獲得約含18.5%卵磷脂的粗品卵磷脂，使用5%ZnCl2純化粗卵磷脂后的回收率約為85.4%，含量達(dá)96.8%。薄層色譜分析結(jié)果顯示自制的卵磷脂與卵磷脂樣品Rf值一致。

腐敗蛋黃；卵磷脂；有機(jī)溶劑；沉淀劑；提取

卵磷脂被譽(yù)為與蛋白質(zhì)、維生素并列的“第三營(yíng)養(yǎng)素”，廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、化工等諸多領(lǐng)域。其來(lái)源主要從大豆、動(dòng)物肝臟和蛋黃中提取。由于蛋黃卵磷脂中磷脂酰膽堿的含量高，富含飽和脂肪酸，具有更強(qiáng)的氧化穩(wěn)定性而備受關(guān)注。

目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)蛋黃卵磷脂的研究主要是針對(duì)新鮮蛋，對(duì)于腐敗蛋黃卵磷脂的提取很少涉及。在綜合國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)基礎(chǔ)上[1-4]，通過(guò)對(duì)腐敗蛋黃卵磷脂的提取工藝進(jìn)行初步探討，希望尋找一條適合制備腐敗蛋黃卵磷脂的可行方法。

1 材料與方法

1.1 主要材料與儀器

腐敗蛋由遼寧醫(yī)學(xué)院雞場(chǎng)提供；95%乙醇、丙酮、正己烷、氯仿、甲醇、鉬酸銨、硫酸銅等試劑均為分析純；硅膠GF254、羧甲基纖維素鈉、卵磷脂標(biāo)準(zhǔn)品等：購(gòu)自Sigma公司。

UV-1800紫外-可見光分光光度計(jì)：北京瑞利分析儀器公司；RE52-98旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海亞榮生化儀器廠；DZF-6020MBE真空干燥箱：上海博迅實(shí)業(yè)有限公司；KH-2000型雙波長(zhǎng)薄層色譜掃描儀、TD-II型全自動(dòng)薄層鋪板機(jī)：上?？普苌萍加邢薰?；JB50-D強(qiáng)力電動(dòng)攪拌機(jī)：上海圣科儀器設(shè)備有限公司。

1.2 卵磷脂提取方法

分離腐敗蛋黃10 g，烘干（100℃，4 h）。在蛋黃中加入一定量的95%乙醇，攪拌均勻，2000 r/min離心10 min，收集上清液。向沉淀物加入95%乙醇，重復(fù)以上步驟多次。將收集到的上清液減壓蒸餾至近干，用少量正己烷溶解，于正己烷溶液中加入冰丙酮（4℃），分離出沉淀物，真空干燥，得淡黃色的粗品卵磷脂。

將粗品卵磷脂溶于無(wú)水乙醇中，制成10%的卵磷脂乙醇溶液。再加入適量的ZnCl2的水溶液，室溫?cái)嚢瑁陕蚜字琙nCl2配合物沉淀，離心后分離沉淀并加適量冰丙酮洗滌，收集沉淀物，真空干燥，得白色的精制卵磷脂。

1.3 卵磷脂含量的測(cè)定

采用鉬酸銨定磷法[6]測(cè)定含磷量，間接反映卵磷脂的含量。

1.4 薄層色譜分析

將制備的卵磷脂樣品與標(biāo)準(zhǔn)品分別配成2%氯仿溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿:甲醇:水（60:35:4）為展開劑，層析結(jié)束后，取出晾干。再噴10%硫酸銅溶液，熱風(fēng)吹干，170℃干燥10 min顯色。

2 結(jié)果與討論

蛋黃由51.6%水分，16%蛋白質(zhì)，7%磷脂（主要為磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺）,25.4%中性脂（主要為甘油三脂、膽固醇）所構(gòu)成，其中磷脂占總脂類的21.6%（此數(shù)據(jù)因不同雞種和飼養(yǎng)方法而不同）[5]。有機(jī)溶劑法提取卵磷脂主要有2種方案，一種是先除去中性脂，再分離卵磷脂和蛋白質(zhì)；另一種是先除去蛋白質(zhì)，再分離卵磷脂和中性脂。本試驗(yàn)在前期試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，利用乙醇和正己烷將蛋黃中脂類物質(zhì)提取出來(lái)，除去蛋白質(zhì)等物質(zhì)。然后利用卵磷脂不溶于丙酮的性質(zhì)，將卵磷脂與其它脂質(zhì)和膽固醇分離開來(lái)。在進(jìn)行有機(jī)溶劑提取時(shí)，必須控制好溶劑濃度、溶劑用量、提取的溫度、次數(shù)、時(shí)間等條件。

2.1 溶劑用量的選擇

蛋黃中分別加入 5、10、15、20 mL/g的 95%乙醇室溫條件下進(jìn)行提取。如圖1所示，在一定范圍內(nèi)，卵磷脂的提取率隨乙醇用量的加大而增加。從工藝流程和經(jīng)濟(jì)兩方面考慮，乙醇用量應(yīng)選取10 mL/g左右為佳。

圖1 乙醇用量對(duì)提取率的影響Fig.1 Ethanol content on extraction rate

2.2 提取次數(shù)的選擇

選用乙醇加入量為10 mL/g方案重復(fù)提取蛋黃得到4批粗品卵磷脂，測(cè)定其含磷量。如圖2所示，第3、第4次提取的粗品卵磷脂含磷量較高，分別有3.38%、3.43%。所以提取3次為宜。

2.3 沉淀劑用量的選擇

圖2 提取次數(shù)對(duì)含磷量的影響Fig.2 Extraction times on the content of phosphorus

利用ZnCl2和卵磷脂形成配合物沉淀將卵磷脂從有機(jī)溶劑中分離出來(lái)，并除去蛋白質(zhì)、脂肪等雜質(zhì)。加入相當(dāng)于卵磷脂質(zhì)量的1%、5%、10%、15%、20%ZnCl2的水溶液，室溫下攪拌0.5 h，離心收集沉淀物。加入冰丙酮反復(fù)洗滌，收集沉淀物，干燥后稱重。如圖3所示，5%ZnCl2回收卵磷脂效果最佳，回收率約為85.4%。

圖3 氯化鋅含量對(duì)回收率的影響Fig.3 Content on the recovery of zinc chloride

2.4 薄層色譜分析

如圖4所示，自制粗品卵磷脂、純化卵磷脂經(jīng)薄層色譜分析后均有2個(gè)明顯的斑點(diǎn)，Rf值分別為0.40、0.86。與卵磷脂樣品 Rf值一致。

圖4 自制純化卵磷脂及對(duì)比Fig.4 Self-purification of lecithin and Comparison

3 結(jié)論

有研究表明，我國(guó)禽蛋因保鮮不當(dāng)?shù)膿p失占總產(chǎn)量的15%左右，如何充分利用這部分資源，變廢為寶成為禽蛋生產(chǎn)消費(fèi)領(lǐng)域需要解決的問題。本試驗(yàn)使用有機(jī)溶劑從腐敗蛋黃中提取卵磷脂、利用無(wú)機(jī)鹽沉淀純化卵磷脂，研究結(jié)果表明，在蛋黃中加入95%乙醇（10 mL/g）提取3次效果最佳，制得約含18.5%卵磷脂的粗品卵磷脂；將獲得的粗品卵磷脂溶于乙醇后，用5%ZnCl2純化的回收率約為85.4%，卵磷脂含量達(dá)96.8%；薄層色譜分析結(jié)果顯示自制的卵磷脂與卵磷脂樣品Rf值一致。

本試驗(yàn)方法操作簡(jiǎn)單、成本低且提取效率高，為提取腐敗蛋黃卵磷脂的可行方法。但可能由于蛋白質(zhì)變性的緣故，卵磷脂的提取效率還是低于新鮮蛋。所以，對(duì)于腐敗蛋黃卵磷脂的提取工藝還需進(jìn)一步研究。

[1]吳曉英，林影，葉倩君，等.蛋黃卵磷脂的制備研究[J].食品科學(xué),2004,25(5):115-118

[2]姚茂君，黃群，麻成金，等.超聲波、微波輔助萃取鵪鶉蛋黃卵磷脂的研究[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2007,33(5):148-152

[3]黃金枝，林松毅，宮新統(tǒng)，等.均勻設(shè)計(jì)法優(yōu)化蛋黃卵磷脂提取工藝的研究[J].食品科學(xué),2008,29(10):257-259

[4]A Shah,C C Akoh,R T Toledo,et al.Isolation of a phospholipid fraction from inedible egg[J].J of Supercritical Fluids，2004，30:303-313

[5]Luz E.palacios,Tong wang.Extraction of egg-yolk lecithin[J].J of the American Oil Chemists'Society，2005,82(8):565-569

[6]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典（二部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，1995：附錄ⅣB

Extraction of Lecithin from Inedible Egg Yolk

WU Han-dong
（Liaoning Medical University，Jinzhou 121001，Liaoning,China）

The extraction of lecithin from inedible egg yolk were discussed in this paper.The 18.5%rough lecithin from inedible egg yolk was extract three times with 95%ethanol under different conditions and precipitated by acetone.5%ZnCl2precipitator was used to purify rough lecithin further.About 85.4%recovery of refined lecithin was obtained,with the content of phospholipids over 96.8%.The TLC results showed that the self-preparation lecithin had two clear spots,consistent with the products.

inedible egg yolk;lecithin;organic solvent;salt precipitation;extraction

吳漢東（1975—），男（漢），講師，碩士，研究方向：畜產(chǎn)品加工。

2010-08-07