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    紫外分光光度法測定硫酸長春新堿的含量

    2011-11-27 08:23:26琦,徐玫,趙輝,楊
    關(guān)鍵詞:粉針劑長春新堿光度法

    袁 琦,徐 玫,趙 輝,楊 浩

    (河南大學(xué) 藥學(xué)院,河南,開封475004)

    長春花為夾竹桃科長春花屬中一種重要的藥用植物,長春新堿和長春堿是長春花中具有抗腫瘤活性的二聚吲哚類生物堿[1]。長春新堿通過作用于腫瘤細(xì)胞微管蛋白而干擾腫瘤細(xì)胞代謝,臨床主要用于治療急性淋巴細(xì)胞白血病,也用于治療乳腺癌、支氣管肺癌、軟組織肉瘤及神經(jīng)母細(xì)胞瘤等[2]。對硫酸長春新堿的研究主要是基于其對神經(jīng)系統(tǒng)毒性和局部刺激性,由此開發(fā)了各種新劑型,如采用與抗體結(jié)合[3-4]、脂質(zhì)體包裹[5]以及控釋膜[6]等,以減輕它的毒副作用。

    長春新堿是一種二聚吲哚類生物堿,見光或遇熱易變質(zhì)。HPLC法雖然具有較強(qiáng)的分離能力,但測定需要較長時間,藥品易隨時間延長發(fā)生變化,導(dǎo)致HPLC法的準(zhǔn)確度降低。而硫酸長春新堿粉針劑中干擾組分較少,可采用分離能力較差的紫外分光光度法測定含量。我們采用紫外分光光度法測定硫酸長春新堿粉針劑中硫酸長春新堿的含量,顯示該方法簡單快速,且具有較高的準(zhǔn)確度和精密度,可用于硫酸長春新堿的含量測定。

    1 儀器與試劑

    UV-1600型紫外-可見分光光度計(北京瑞利);試劑均為分析純;硫酸長春新堿粉針劑(廣東嶺南制藥有限公司,批號090803);硫酸長春新堿對照品(中國藥品生物制品檢定所);稀氨水(實驗室自制)。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 溶液的制備

    2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取硫酸長春新堿對照品0.948mg,加甲醇1mL溶解后轉(zhuǎn)入50mL量瓶,并用甲醇多次洗滌容器,洗液并入量瓶中,稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液。

    2.1.2 供試品溶液的制備 精密稱取硫酸長春新堿粉針劑4.603mg,加甲醇1mL溶解后轉(zhuǎn)入50mL量瓶,并用甲醇多次洗滌容器,洗液并入量瓶中,稀釋至刻度,搖勻,既得。

    2.2 測定方法

    取硫酸長春新堿對照品溶液,稀釋后以甲醇做對照液,在190~340nm波長范圍內(nèi)掃描,可知樣品在220、240、297nm波長處均有吸收峰。HPLC檢測雜質(zhì)在220nm和240nm處有吸收,故選擇297nm處作為紫外法測定硫酸長春新堿含量的檢測波長。

    2.3 方法學(xué)考察

    2.3.1 重復(fù)性實驗 取供試品溶液6份,照“2.2”項下方法測得吸光度值分別為0.366、0.365、0.366、0.365、0.365、0.366,RSD 為0.02%。

    2.3.2 穩(wěn)定性實驗 取硫酸長春新堿粉針劑0.5mg溶于25mL容量瓶中,照“2.2”項下方法,按紫外分光光度法,分別于0.00、2.20、4.50、5.67、6.70h進(jìn)行測定,其吸光度A分別為0.325、0.312、0.301、0.302、0.299,RSD 為22.08%。由結(jié)果可知,藥品前4h變化較大,后面幾乎無變化。說明硫酸長春新堿不穩(wěn)定,見光或遇熱易變質(zhì)。

    2.3.3 加樣回收率實驗 取9個10mL的容量瓶,分別精密加入供試品溶液4.0mL,再分別精密加入3.0、4.0、5.0mL對照品溶液,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,制備低、中、高3種濃度的供試品溶液,每種濃度制備3份樣品,按“2.2”項下方法測得吸光度值,計算含量。實驗結(jié)果表明,本法具有良好的回收率。結(jié)果見表1。

    表1 加樣回收率實驗

    2.3.4 線性范圍 精密量取硫酸長春新堿對照品溶液,加甲醇定量溶解,配制成40、20、10、4、1mg/L的溶液,按照“2.2”項下方法測得吸光度值。以吸光度A為縱坐標(biāo),溶液中硫酸長春新堿的濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,(圖1)?;貧w方程為:Y=0.018 6 X+0.013 5,r=0.997 8。

    結(jié)果表明,硫酸長春新堿在1~40mg/L范圍內(nèi)與吸光度A呈良好線性關(guān)系。

    2.4 樣品測定

    分別取3個批號的硫酸長春新堿粉針劑各3份,按“2.2”項下方法測定含量,計算出每個樣品占標(biāo)示量的百分含量。這3個批號樣品占標(biāo)示量的平均值分別為100.2%、99.7%和100.1%,含量符合要求。

    圖1 紫外分光光度法的線性關(guān)系

    3 結(jié)論

    應(yīng)用本文建立的測定方法,可以對硫酸長春新堿粉針劑中的硫酸長春新堿含量進(jìn)行測定。經(jīng)研究證明,該方法準(zhǔn)確度和精密度均符合要求,可用于該制劑的質(zhì)量控制,并能確保產(chǎn)品質(zhì)量。

    4 討論

    在本實驗過程中,曾以C18為固定相,水-甲醇(45∶55,磷酸調(diào)pH至3.0)為流動相,柱溫30℃,20μL進(jìn)樣,分別以220、240、297nm為檢測波長。在220nm和240nm處檢測時,樣品有干擾組分的色譜峰,而在297nm波長下樣品峰單一,說明雜質(zhì)在220nm和240nm處有吸收,在297nm處無吸收。

    HPLC法具有較強(qiáng)的分離能力,但在弱酸性流動相及30℃柱溫時,樣品易受到干擾,且HPLC法測定需要較長時間,藥品隨時間的延長也會發(fā)生變化,最終導(dǎo)致HPLC法的準(zhǔn)確性較差。紫外分光光度法操作簡便迅速,測定條件溫和,具有較高的準(zhǔn)確度、精密度。所以在測定注射用硫酸長春新堿粉針劑時最好選用紫外分光光度法,而對于體內(nèi)實驗或?qū)ζ渌麆┬瓦M(jìn)行分析測定時,可以考慮選用分離效能較高的HPLC法。

    [1]李浩,李一澎,盧國杰.長春堿、長春新堿提取分離方法研究[J].應(yīng)用化學(xué),2008,37(9):993.

    [2]潘岳峰,王慧敏,張玥,等.大孔吸附樹脂分離純化長春花中長春堿和長春新堿[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2009,16(4):51.

    [3]Rowland G F,Simmonds R G,Gore V A.Drug Localisation and Growth Inhibition Studies of Vindesine-monoclonal Anti-CEA Conjugates in a Human Tumour Xenograft[J].Cancer Immunol Immunother,1986,21(3):183.

    [4]余竹元,馬瑾瑜.長春新堿-抗體結(jié)合物的抗肝癌作用[J].腫瘤,1989,9(4):154.

    [5]Webb M S,Harasym T O,Masin D,et al.Sphingomyelincholesteral Liposomes SiginificantlyEnhance the Pharmacokinetic and Therapeutic Properties of Vincristine in Murine and Human Tumour Models[J].B J cancer,1995,72(4):896.

    [6]孫勇,周海英.硫酸長春新堿控釋膜藥效學(xué)實驗研究[J].中國藥房,2000,11(2):59.

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