紫外-可見分光光度法測定環(huán)草石斛中石斛多糖的含量Δ

陳化，陳竹，梁斌，趙俊，馮子坤（1.貴州興義市人民醫(yī)院，興義市56400；.貴州省人民政府云巖賓館醫(yī)務(wù)室，貴陽市 550004；.貴州興義市吉仁堂藥業(yè)公司，興義市 56400）

紫外-可見分光光度法測定環(huán)草石斛中石斛多糖的含量Δ

陳化1＊，陳竹2，梁斌3，趙俊3，馮子坤3（1.貴州興義市人民醫(yī)院，興義市562400；2.貴州省人民政府云巖賓館醫(yī)務(wù)室，貴陽市 550004；3.貴州興義市吉仁堂藥業(yè)公司，興義市 562400）

目的：建立測定環(huán)草石斛中石斛多糖含量的方法。方法：采用紫外-可見分光光度法，以D-無水葡萄糖為對照，檢測波長為490nm。結(jié)果：D-無水葡萄糖的進(jìn)樣量在0～0.10440mg范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系（r＝0.9997）；平均加樣回收率為98.09%，RSD＝1.62%（n＝6）。結(jié)論：本法操作簡便、快捷、結(jié)果準(zhǔn)確，可用于環(huán)草石斛中石斛多糖的含量測定。

環(huán)草石斛；石斛多糖；D-無水葡萄糖；紫外-可見分光光度法

環(huán)草石斛為蘭科植物環(huán)草石斛Dendrobium loddigesii Rolfe.的新鮮或干燥莖，鮮用者采收后除去根及泥沙；干用者采收后除去雜質(zhì)，用開水略燙或烘軟，再邊搓邊烘曬，至葉鞘搓凈，干燥[1]。多糖類成分是環(huán)草石斛中的一類有效成分，具有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫力的作用。筆者采用紫外-可見分光光度法測定環(huán)草石斛中石斛多糖的含量，以為環(huán)草石斛的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

UV-2450型紫外-可見分光光度計、AUW120D型電子天平、AUY220型電子天平（日本島津公司）；HS10260D型超聲波清洗器（天津市恒奧科技發(fā)展有限公司，工作頻率：40kHz，功率：40～100W）。

濃硫酸、苯酚、乙醇均為分析純，水為蒸餾水；D-無水葡萄糖對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110833-200503，供含量測定用）；環(huán)草石斛采自貴州省興義市環(huán)草石斛主產(chǎn)區(qū)，經(jīng)云南中醫(yī)學(xué)院普春霞教授和楊耀文教授鑒定為真品，標(biāo)本存于貴州省興義市吉仁堂藥業(yè)公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液 精密稱取105℃干燥至恒重的D-無水葡萄糖對照品適量，加水制成每1mL含0.1044mg的溶液，即得。

2.1.2 供試品溶液 取本品粗粉0.15g，精密稱定，置250mL圓底燒瓶中，用5.0mL石油醚（60～90℃）回流提取0.5h，過濾，殘渣揮干溶劑后用50mL 80%乙醇回流提取1h，趁熱過濾，殘渣用熱80%乙醇洗滌3次，每次10mL，殘渣揮干溶劑后用100mL蒸餾水回流提取2次，每次1.5h，殘渣及燒瓶用熱水洗滌3次，每次10mL，合并濾液及洗滌液，放冷，轉(zhuǎn)移至250mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。

2.2 測定方法依據(jù)

以D-無水葡萄糖為對照品測定環(huán)草石斛中石斛多糖的含量，用硫酸-苯酚顯色法，在可見光區(qū)能獲得穩(wěn)定的特征吸收峰。

2.3 檢測波長的確定

分別對空白（水）顯色前后樣品、D-無水葡萄糖對照品溶液顯色前后樣品、石斛多糖溶液顯色前后樣品，在紫外-可見分光光度計上進(jìn)行全波長掃描，掃描范圍為300～900nm，得吸收光譜，詳見圖1。

從圖1中可以看出，空白（水）顯色前后樣品、D-無水葡萄糖對照品溶液顯色前樣品與石斛多糖溶液顯色前樣品沒有明顯的吸收峰，而D-無水葡萄糖對照品溶液顯色后樣品與石斛多糖溶液顯色后樣品在490nm波長處均有最大吸收，故選擇490nm作為檢測波長。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

圖1 吸收光譜圖A.顯色前的空白樣品（水）；B.經(jīng)硫酸-苯酚顯色后的空白樣品（水）；C.顯色前的D-葡萄糖對照品溶液；D.經(jīng)硫酸-苯酚顯色后的D-葡萄糖對照品溶液；E.顯色前的石斛多糖溶液；F.經(jīng)硫酸-苯酚顯色后的石斛多糖溶液Fig 1 Absorption spectrumA.blank sample before color developing（water）；B.blank sample after color developed by phenol-sulphate acid（water）；C.D-glucosum anhydricum control before color developing；D.D-glucosum anhydricum control after color developed by phenol-sulphate acid；E.dendrobium polysaccharide solution before color developing；F.dendrobium polysaccharide solution after developed by phenol-sulphate acid

精密量取對照品溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，分別置10mL具塞試管中，加水至2.0mL，加5%苯酚溶液1.0mL，搖勻，迅速加入濃硫酸5.0mL，放置5min，置沸水浴加熱20min，取出，立即置冰水浴中冷卻2min后取出，室溫放置10min（硫酸-苯酚顯色法）；另以2.0mL蒸餾水同法操作，作空白對照。照紫外-可見分光光度法[2]在490nm波長處測定吸光度。以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（c）為橫坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為A＝5.17579c+0.00573（r＝0.9997，n＝7）。結(jié)果表明，D-無水葡萄糖的進(jìn)樣量在0～0.10440mg范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2.5 樣品測定方法

精密量取供試品溶液1mL，置于10mL干燥具塞試管中，照“2.4”項下方法自“加水至2.0mL”起依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中所含D-無水葡萄糖的重量（mg），計算，即得。

2.6 精密度試驗

取同一樣品適量，顯色后重復(fù)測定6次吸光度。結(jié)果，RSD＝1.48%（n＝6），表明該方法精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液適量，顯色后分別于0、10、20、30、40、50、60min測定吸光度。結(jié)果，RSD＝0.32%（n＝7），表明供試品溶液在60min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗

取同一環(huán)草石斛藥材粉末適量，照“2.1.2”項下方法平行制備6份供試品溶液，照上述方法測定石斛多糖含量。結(jié)果，平均含量為10.11%，RSD＝1.56%（n＝6），表明該方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率試驗

取已知含量（10.11%）的同一環(huán)草石斛藥材粉末6份，每份約0.10g，精密稱定，照“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，分別精密加入D-無水葡萄糖對照品溶液（1.0326mg·mL-1）10mL，加水至刻度，搖勻，照上述方法測定石斛多糖含量，計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝6）Tab 1Results of recovery test（n＝6）

2.10 樣品含量測定

取14批環(huán)草石斛藥材粉末各適量，分別照“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，照上述方法測定樣品中石斛多糖的含量，結(jié)果見表2。

3 討論

2010年版《中國藥典》（一部）石斛的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無含量測定項[2]，環(huán)草石斛的含量測定方法也未見報道。以石斛多糖作為含量測定指標(biāo)，有利于全面評價環(huán)草石斛藥用部位的質(zhì)量。因此，本試驗對環(huán)草石斛樣品采用石油醚（60～90℃）脫脂，80%乙醇除去醇溶性糖等，經(jīng)熱水提取水溶性活性成分石斛多糖[3～5]，應(yīng)用紫外-可見分光光度法進(jìn)行含量測定。結(jié)果證明，該方法簡便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高、專屬性強(qiáng)。

本試驗對14批環(huán)草石斛藥材樣品進(jìn)行含量測定，得到石斛多糖的含量范圍為5.34%～15.61%，據(jù)此研究結(jié)果建議制定環(huán)草石斛中石斛多糖的含量標(biāo)準(zhǔn)為本品按干燥品計算，含石斛多糖以無水葡萄糖（C6H12O6）計，不得少于6.0%。

[1] 國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2000年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000：70.

[2] 國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄30、85.

[3] 孫卓然，劉 圓，李曉云，等.石斛不同種、不同藥用部位中多糖含量測定[J].時珍國醫(yī)國藥，2009，20（8）：1886.

[4] 范俊安，王繼生，張 艷，等.鐵皮石斛組培品與野生品 的形態(tài)組織學(xué)和多糖含量比較研究[J].中國中藥雜志，2005，30（21）：1648.

[5] 黃民權(quán)，黃步漢，蔡體育，等.鐵皮石解多糖的提取、分離和分析[J].中草藥，1994，25（3）：128.

Content Determination of Dendrobium Polysaccharides in Dendrobium loddigesii by UV-VIS Spectrophotometry

CHEN Hua（Xingyi Municipal People’s Hospital of Guizhou Province，Xingyi 562400，China）
CHEN Zhu（Infirmary of Yunyan Guest House of Guizhou Provincial People’s Government，Guiyang 550004，China）
LIANG Bin，ZHAO Jun，F(xiàn)ENG Zi-kun（Xingyi City Jirentang Herbal&Pharmaceutical Co.，Ltd.of Guizhou Province，Xingyi 562400，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the content determination of dendrobium polysaccharides in Dendrobium loddigesii.METHODS：UV-VIS spectrophotometry method was adopted.The spectrophotometry was used with D-glucosum anhydricum as control.The detection wavelength was set at 490nm.RESULTS：The linear range of D-glucosum anhydricum was 0～0.10440mg（r＝0.9997）with an average recovery of 98.09%（RSD＝1.62%，n＝6）.CONCLUSION：The method is simple，rapid and accurate for the content determination of dendrobium polysaccharides in D.loddigesii.

Dendrobium loddigesii；Dendrobium polysaccharides；D-glucosum anhydricum；UV-VIS spectrophotometry

R284.1；R927.2

A

1001-0408（2011）39-3690-03

Δ國家科技支撐計劃子課題（2006BAI06A11-11）

＊副主任藥師，執(zhí)業(yè)藥師。研究方向：醫(yī)院藥學(xué)與藥物研發(fā)。電話：0859-3520567。E-mail：18908597099＠189.cn

2010-10-05

2011-04-14）