HPLC法測(cè)定清開(kāi)靈泡騰片中梔子苷的含量Δ

筆雪艷，劉曉鳳，張清波（.黑龍江省食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)所，哈爾濱市5000；.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，哈爾濱市 50040）

HPLC法測(cè)定清開(kāi)靈泡騰片中梔子苷的含量Δ

筆雪艷1＊，劉曉鳳2，張清波1（1.黑龍江省食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)所，哈爾濱市150001；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，哈爾濱市 150040）

目的：建立測(cè)定清開(kāi)靈泡騰片中梔子苷含量的方法。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱為Agilent C18（150mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-水（11∶89），檢測(cè)波長(zhǎng)為238nm，流速為1.0mL·min-1。結(jié)果：梔子苷進(jìn)樣量在0.03012～0.90360μg之間與峰面積積分值呈良好的線(xiàn)性關(guān)系（r＝0.9999）；平均回收率為97.02%，RSD＝1.0%（n＝6）。結(jié)論：本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、分離效果好，可用于清開(kāi)靈泡騰片的質(zhì)量控制。

清開(kāi)靈泡騰片；梔子苷；高效液相色譜法；含量測(cè)定

清開(kāi)靈泡騰片是由金銀花、珍珠母、板藍(lán)根、梔子、黃芩苷等8味藥組成的中藥復(fù)方制劑，具有清熱解毒、鎮(zhèn)靜安神的功效。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)》新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)第35冊(cè)[1]，目前只有黃芩苷的含量測(cè)定方法。而處方中梔子苷為梔子的有效活性成分，在清開(kāi)靈系列品種中也有關(guān)于梔子苷含量測(cè)定的報(bào)道[2，3]，但由于泡騰片中加入的輔料種類(lèi)比較多，樣品若不經(jīng)純化直接測(cè)定，基線(xiàn)飄移比較明顯，影響含量測(cè)定的準(zhǔn)確性。為了更好地控制藥品質(zhì)量，筆者建立了處方中梔子苷的含量測(cè)定方法——高效液相色譜（HPLC）法。

1 儀器與試藥

HP1100型HPLC儀、電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。

清開(kāi)靈泡騰片（哈高科白天鵝藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)：080306、080307、080308）；乙腈為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純；梔子苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110749-200309）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent C18（150mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（11∶89）；檢測(cè)波長(zhǎng)：238nm；流速：1.0mL·min-1；進(jìn)樣量：10μL。理論板數(shù)按梔子苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取梔子苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加50%甲醇制成每1mL含30μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取重量差異項(xiàng)下的本品，研細(xì)，取約2.0g，精密稱(chēng)定，置100mL量瓶中，加熱水（70～80℃）40mL，待完全泡騰后，放冷，加入甲醇40mL，搖勻，超聲處理30min，放置至室溫，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液25mL，蒸干，殘?jiān)?0%甲醇5mL使溶解，上于中性氧化鋁柱上[4]（內(nèi)徑1.8cm，100～200目，5g），加50%甲醇洗脫3次，每次10mL，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶液使溶解，并轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備

取按本品處方工藝制備的不含梔子的陰性樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.5 測(cè)定法

分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照溶液各10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定。色譜見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.對(duì)照品；B.供試品；C.陰性對(duì)照；1.梔子苷Fig 1 HPLC chromatogramsA.reference substance；B.sample；C.negative sample；1.geniposide

2.6 線(xiàn)性關(guān)系考察

精密吸取對(duì)照品溶液（0.03012mg·mL-1）1、2、5、10、15、20、30μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積。以進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程為Y＝1746.4086X－3.00061（r＝0.9999）。結(jié)果表明，梔子苷進(jìn)樣量在0.03012～0.90360μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.7 精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液10μL，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定梔子苷峰面積。結(jié)果，RSD＝0.2%（n＝5），表明儀器精密度良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品（批號(hào)：080308），按“2.3”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，分別注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果，梔子苷的平均含量為每片0.60mg，RSD＝1.2%（n＝6），表明本法重復(fù)性良好。

2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一批供試品溶液，分別于制備后0、2、4、7、15h測(cè)定。結(jié)果，RSD＝1.9%（n＝5），表明供試品溶液在15h內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 加樣回收率試驗(yàn)

取同一批已知含量（批號(hào)：080308，梔子苷含量：0.5955mg·g-1）的樣品6份，精密稱(chēng)定，分別精密加入梔子苷對(duì)照品溶液（0.1038mg·mL-1）6mL，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，分別注入液相色譜儀測(cè)定含量，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）Tab 1Results of recovery test（n＝6）

2.11 樣品含量測(cè)定

按上述色譜條件測(cè)定3批樣品含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果Tab 2 Results of content determination of sample

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

取梔子苷對(duì)照品溶液作紫外光譜掃描，結(jié)果可見(jiàn)其在237.4nm波長(zhǎng)處有最大吸收，且在（237.4±2）nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)均為穩(wěn)定吸收。故參考2005年版《中國(guó)藥典》（一部）梔子藥材中梔子苷的最大吸收波長(zhǎng)，選用238nm為本品測(cè)定波長(zhǎng)。

3.2 供試品前處理方法的選擇

筆者曾在2010年版《中國(guó)藥典》起草工作中承擔(dān)了清開(kāi)靈片、顆粒、膠囊和泡騰片的標(biāo)準(zhǔn)起草工作，在梔子苷的測(cè)定上，采用超聲提取的方法直接測(cè)定，但泡騰片的樣品基線(xiàn)的飄移比較明顯，影響含量測(cè)定的準(zhǔn)確性。試驗(yàn)中將樣品完全泡騰后，分別采用超聲提取、酸沉純化、上Al2O3柱3種處理方法進(jìn)行比較，結(jié)果上Al2O3柱純化梔子苷色譜峰分離較好。

3.3 中性氧化鋁用量及洗脫劑用量的確定

分別選擇3、5、7g中性氧化鋁，選擇50%甲醇20、30、50mL洗脫容積進(jìn)行比較，結(jié)果5g中性氧化鋁30mL即可達(dá)到分離及洗脫完全。

綜上，本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，分離效果好，可用于清開(kāi)靈泡騰片的質(zhì)量控制。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)（第35冊(cè)）[S].北京：人民衛(wèi)生出版社，2004：92

[2] 黃曉丹，傅 英，陳禧翎，等.HPLC法測(cè)定清開(kāi)靈膠囊中梔子苷的含量[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2009，16（6）：52.

[3] 趙緒元，姚金成，胡 領(lǐng)，等.反相高效液相色譜法測(cè)定清開(kāi)靈注射液中2組分的含量[J].中國(guó)藥房，2007，18（3）：202.

[4] 肖佳尚，李曉蒙，葉向陽(yáng).復(fù)方三黃消炎片中梔子苷含量測(cè)定研究[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2006，7（5）：33.

Content Determination of Geniposide in Qingkailing Effervescent Tablets by HPLC

BI Xue-yan，ZHANG Qing-bo（Heilongjiang Institute for Food and Drug Control，Harbin 150001，China）
LIU Xiao-feng（Heilongjiang University of Traditional Chinese Medicine，Harbin 150040，China）

OBJECTIVE：To establish the method for the content determination of geniposide in Qingkailing effervescent tablets.METHODS：HPLC was adopted.The separation was performed on Agilent C18（150mm×4.6mm，5μm）column with acetonitrile-water（11∶89）as mobile phase.The detection wavelength was set at 238nm.The flow rate was 1.0mL·min-1.RESULTS：The linear range of geniposide was 0.03012-0.90360μg（r＝0.9999）with an average recovery of 97.02%（RSD＝1.0%，n＝6）.CONCLUSION：The method is simple，accurate and well-separated for the quality control of Qingkailing effervescent tables.

Qingkailing effervescent tablets；Geniposide；HPLC；Content determination

R283.64；R927.2

A

1001-0408（2011）03-0240-02

2010-01-19

2010-03-29）