脂氧素A4對(duì)急性壞死性胰腺炎大鼠肝損傷的保護(hù)作用

周春華 方華梅 呼闖營(yíng) 王少峰

·短篇論著·

脂氧素A4對(duì)急性壞死性胰腺炎大鼠肝損傷的保護(hù)作用

周春華 方華梅 呼闖營(yíng) 王少峰

脂氧素(lipoxins，LX)即脂加氧酶相互作用的產(chǎn)物(1ipoxygenases interaction product)，是二十烷家族中花生四烯酸一類(lèi)的代謝產(chǎn)物。其中LXA4是花生四烯酸脂加氧酶代謝產(chǎn)物，系體內(nèi)重要的內(nèi)源性促炎癥消退介質(zhì)。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)LXA4及其穩(wěn)定類(lèi)似物對(duì)多種炎癥細(xì)胞和炎癥相關(guān)基因有顯著的負(fù)性調(diào)節(jié)作用，是炎癥反應(yīng)的重要“剎車(chē)信號(hào)”或“停止信號(hào)”[1-2]。本研究探討LXA4類(lèi)似物(lipoxin A4 methyl ester，LXA4-ME)對(duì)急性壞死性胰腺炎(ANP)大鼠肝損傷的保護(hù)作用，為臨床重癥急性胰腺炎(SAP)的治療探索新的策略。

一、材料與方法

1．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組：健康雄性SD大鼠60只，體重200～220 g，清潔級(jí)別，購(gòu)自蘇州愛(ài)爾麥特科技有限公司，許可證號(hào)SCXK(蘇)2009-001。實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。按照數(shù)字表法隨機(jī)將大鼠分為假手術(shù)組、ANP組和LXA4組，各20只。采用胰膽管逆行注射5%牛磺膽酸鈉(sigma公司)50 mg/kg體重方法建立ANP模型，假手術(shù)組僅開(kāi)腹翻動(dòng)胰腺后關(guān)腹。LXA4組在ANP造模后即刻尾靜脈注射LXA4-ME(Cayman公司)87.5 μg/kg體重，約1 ml；假手術(shù)組、ANP組尾靜脈注射等量生理鹽水。術(shù)后12 h處死大鼠。

2．腹水量、胰腺及肝臟組織形態(tài)學(xué)觀察：采用干棉球吸取腹水，稱(chēng)重，計(jì)算腹水量。取胰腺頭部及肝臟右外葉標(biāo)本，常規(guī)切片，HE染色。由兩位資深病理科醫(yī)師盲法閱片，參考Schmidt等[3]和Mota等[4]的標(biāo)準(zhǔn)分別對(duì)胰腺和肝臟組織行病理學(xué)評(píng)分。

3．血漿淀粉酶、總膽紅素、ALT測(cè)定：取血分離血漿，自動(dòng)生化儀測(cè)定血漿淀粉酶、總膽紅素、ALT含量。

4．組織髓過(guò)氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)含量測(cè)定：試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所，按照說(shuō)明書(shū)操作。

5．血清TNF-α、IL-1β、IL-10、可溶性E-選擇素(sE-selectin)含量測(cè)定： ELISA試劑盒購(gòu)自上海西唐生物科技公司，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作。

二、結(jié)果

1．大鼠腹水量及胰腺、肝臟病理學(xué)變化：假手術(shù)組大鼠無(wú)腹水形成；ANP組大鼠腹腔可見(jiàn)大量血性或淡紅色腹水，平均(12.3±1.9)ml；LXA4組腹水量為(6.8±1.2)ml，較ANP組明顯減少(P<0.05)。假手術(shù)組大鼠胰腺未見(jiàn)明顯改變(圖1左a)。ANP組見(jiàn)胰腺重度水腫、出血、壞死，胰周、后腹膜和腸系膜可見(jiàn)明顯皂化斑；鏡下見(jiàn)胰腺大片壞死、出血，間質(zhì)明顯腫脹，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)(圖1左b)，胰腺病理評(píng)分為(11.3±1.5)分。LXA4組胰腺組織腫脹和壞死范圍較ANP組有所減輕，后腹膜和腸系膜皂化斑減少；鏡下壞死及出血范圍減輕(圖1左c)，胰腺病理評(píng)分為(8.7±1.3)分，較ANP組顯著降低(P<0.05)。假手術(shù)組肝臟色澤鮮紅；鏡下肝索結(jié)構(gòu)完好(圖1右a)。ANP組見(jiàn)肝臟充血、腫脹；鏡下見(jiàn)肝索結(jié)構(gòu)紊亂，胞質(zhì)空泡化，核固縮多見(jiàn)，匯管區(qū)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯(圖1右b)，肝臟病理評(píng)分為(7.9±0.8)分。LXA4組肝細(xì)胞損傷較ANP組有所減輕，匯管區(qū)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少(圖1右c)，病理評(píng)分為(4.1±0.8)分，較ANP組顯著降低(P<0.05)。

圖1假手術(shù)組(a)、ANP組(b)和LXA4組(c)胰腺(左列)及肝臟(右列)病理學(xué)改變(HE ×100)

2．血淀粉酶、總膽紅素、 ALT、TNF-α、IL-1β、IL-10、sE-selectin含量變化：ANP組血淀粉酶、總膽紅素、ALT、TNF-α、IL-1β、IL-10、sE-selectin含量均顯著高于假手術(shù)組(P<0.05),而LXA4組上述指標(biāo)均較ANP組明顯降低(P<0.05，表1)。

3．胰腺及肝臟組織MPO活性、MDA含量變化：ANP組胰腺和肝臟組織MPO活性及MDA含量均較假手術(shù)組明顯升高(P<0.05)，而LXA4組上述指標(biāo)均較ANP組明顯降低(P<0.05，表2)。

表1 各組大鼠血淀粉酶、總膽紅素、ALT、TNF-α、IL-1β、IL-10、sE-selectin含量變化

注：與假手術(shù)組比較，aP<0.05;與ANP組比較，bP<0.05

表2 各組大鼠胰腺、肝臟組織MPO活性、MDA含量變化

注：與假手術(shù)組比較，aP<0.05;與ANP組比較，bP<0.05

討論肝損傷是SAP的并發(fā)癥之一，發(fā)生最早、發(fā)生率高，損傷的程度與SAP的病情程度呈正相關(guān)。SAP引起肝損傷的機(jī)制為SAP合并全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)或多臟器功能不全(MOF)時(shí)白細(xì)胞被大量激活，通過(guò)黏附分子的介導(dǎo)在促炎因子TNF-a、IL-1β激活的內(nèi)皮細(xì)胞表面黏附、聚集，繼而滲出，對(duì)臟器產(chǎn)生損傷作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，ANP組存在明顯肝損傷，其肝臟病理學(xué)評(píng)分、血總膽紅素及ALT水平均較假手術(shù)組明顯升高，而LXA4組能夠明顯改善ANP大鼠的胰腺及肝臟病理?yè)p傷。

LXA4與其特異性G-蛋白耦聯(lián)受體(ALXR)相結(jié)合，該受體在中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等細(xì)胞中表達(dá)[5]。它在體內(nèi)生物合成，但易被代謝失活。目前已合成其穩(wěn)定的類(lèi)似物L(fēng)XA4-ME。研究發(fā)現(xiàn)[6-8]，LXA4及LXA4-ME對(duì)微循環(huán)障礙、器官缺血再灌注損傷、腸黏膜炎癥、急性肺損傷等疾病均有一定的療效。本結(jié)果顯示，LXA4能夠通過(guò)減少ANP大鼠中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)及氧化應(yīng)激水平,下調(diào)促炎因子(TNF-α、IL-1β)和黏附分子(E-selectin)的表達(dá)，增加抗炎因子表達(dá)(IL-10)，從而對(duì)ANP大鼠肝損傷起到保護(hù)作用。

LXA4并不參與生理過(guò)程的維持，屬于“促進(jìn)炎癥消退”的代表物質(zhì)，不會(huì)干擾機(jī)體正常生理活動(dòng)[9]，極有可能為臨床上SAP治療提供一種新的策略。

[1] O′Sullivan TP, Vallin KS, Shah ST,et al. Aromatic lipoxin A4 and lipoxin B4 analogues display potent biological activities. J Med Chem,2007,50:5894-5902.

[2] Gilroy DW,Lawrence T,Perretti M,et al．Inflammatory resolution：new opportunities for drug discovery,Nat Rev Drug Diseov,2004,3:401-416.

[3] Schmidt J, Rattner DW, Lewandrowski K,et al. A better model of acute pancreatitis for evaluating therapy. Ann Surg,1992,215:44-56.

[4] Mota R,Sánchez-Bueno F,Berenguer-Pina JJ,et al.Therapeutic treatment with poly(ADP-ribose) polymerase inhibitors attenuates the severity of acute pancreatitis and associated liver and lung injury. Br J Pharmacol,2007,151,998-1005.

[5] Chiang N, Arita M, Serhan CN. Anti-inflammatory circuitry: lipoxin, aspirin-triggered lipoxins and their receptor ALX.Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids,2005,73:163-177.

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[8] Jin SW, Zhang L, Lian QQ, et al. Posttreatment with aspirin triggered lipoxin A(4) analog attenuates lipopolysaccharide induced acute lung injury in mice: the role of heme oxygenase-1. Anesth Analg,2007,104:369-377.

[9] 孫洪偉，周蒙濤.脂氧素抑制SIRS的新契機(jī).中華胰腺病雜志，2008，8：275-276.

2011-02-29)

(本文編輯：呂芳萍)

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2011.06.020

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