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    缺氧誘導(dǎo)上皮性卵巢癌細(xì)胞分化逆轉(zhuǎn)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究*

    2011-11-20 03:39:34殷嘯俊堯良清竺鵬飛徐叢劍
    中國(guó)病理生理雜志 2011年5期
    關(guān)鍵詞:端粒酶卵巢癌上皮

    陳 默, 殷嘯俊, 堯良清△, 李 娜, 竺鵬飛, 徐叢劍

    (1復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院婦科,上海 200001;2昆山市第二人民醫(yī)院婦科,江蘇 昆山 215300)

    缺氧誘導(dǎo)上皮性卵巢癌細(xì)胞分化逆轉(zhuǎn)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究*

    陳 默1, 殷嘯俊2, 堯良清1△, 李 娜1, 竺鵬飛1, 徐叢劍1

    (1復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院婦科,上海 200001;2昆山市第二人民醫(yī)院婦科,江蘇 昆山 215300)

    目的: 在三維培養(yǎng)系統(tǒng)中進(jìn)行缺氧刺激,可誘導(dǎo)卵巢惡性上皮性腫瘤細(xì)胞SKOV-3和ES-2向血管內(nèi)皮樣細(xì)胞分化逆轉(zhuǎn),本文擬探討其相關(guān)的分子機(jī)制。方法建立Matrigel三維培養(yǎng)系統(tǒng),在1%O2缺氧條件下,誘導(dǎo)卵巢上皮性癌細(xì)胞SKOV-3和ES-2向血管內(nèi)皮樣細(xì)胞分化逆轉(zhuǎn)后,應(yīng)用端粒重復(fù)序列擴(kuò)增法(TRAP)和實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)原始腫瘤細(xì)胞、腫瘤內(nèi)皮樣細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)端粒酶活性以及周期蛋白cyclinD1、抑癌基因p53、原癌基因v-src轉(zhuǎn)錄水平的差異。結(jié)果常氧時(shí),SKOV-3和ES-2細(xì)胞端粒酶活性表達(dá)為陽(yáng)性,缺氧誘導(dǎo)后SKOV-3內(nèi)皮樣細(xì)胞端粒酶活性為陽(yáng)性,而ES-2內(nèi)皮樣細(xì)胞端粒酶活性轉(zhuǎn)為陰性。缺氧誘導(dǎo)后的SKOV-3和ES-2內(nèi)皮樣細(xì)胞cyclinD1 mRNA的表達(dá)顯著低于常氧時(shí)SKOV-3和ES-2的表達(dá)(Plt;0.05或Plt;0.01);和HUVECs的表達(dá)無(wú)顯著差異。SKOV-3和ES-2內(nèi)皮樣細(xì)胞p53 mRNA的表達(dá)顯著高于常氧時(shí)SKOV-3、ES-2和HUVECs的表達(dá)(Plt;0.05或Plt;0.01)。缺氧和常氧狀態(tài)下各種細(xì)胞均不表達(dá)v-src mRNA。結(jié)論缺氧可以誘導(dǎo)少量卵巢上皮性癌細(xì)胞SKOV-3和ES-2向血管內(nèi)皮樣細(xì)胞分化逆轉(zhuǎn),主要是通過(guò)改變端粒酶的活性,調(diào)節(jié)cyclinD1和p53的轉(zhuǎn)錄水平發(fā)揮調(diào)控作用。

    卵巢腫瘤; 缺氧; 血管內(nèi)皮樣細(xì)胞; 細(xì)胞分化; 端粒酶; 細(xì)胞周期蛋白D1; 基因,p53; 基因,v-src

    卵巢癌(ovarian carcinoma)在女性生殖道癌腫中死亡率居首位,本課題組在前期研究中發(fā)現(xiàn),缺氧刺激能夠誘導(dǎo)少量上皮性卵巢癌細(xì)胞逆轉(zhuǎn)分化為血管內(nèi)皮樣細(xì)胞,同時(shí)增加其增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移特性,在卵巢癌的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用[1,2]。由于血管內(nèi)皮細(xì)胞為非惡性腫瘤細(xì)胞,因此本文擬研究缺氧誘導(dǎo)部分卵巢癌細(xì)胞逆轉(zhuǎn)分化前后細(xì)胞與正常內(nèi)皮細(xì)胞在癌基因、原癌基因、周期蛋白及端粒酶的表達(dá)差異,以期探討缺氧刺激上皮性卵巢惡性腫瘤細(xì)胞分化逆轉(zhuǎn)的實(shí)質(zhì)及其分子機(jī)制。

    材 料 和 方 法

    1材料

    1.1細(xì)胞來(lái)源及培養(yǎng) 卵巢上皮性癌細(xì)胞系SKOV-3(No.HTB-77,腺癌來(lái)源)和ES-2(No.CRL-1978,透明細(xì)胞癌來(lái)源)均購(gòu)自美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)菌庫(kù)(American Type Culture Collection,ATCC)。根據(jù)ATCC指引,用Mccoy’s 5A培養(yǎng)、傳代。人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVECs)經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)同意,來(lái)自本院產(chǎn)科健康產(chǎn)婦足月剖宮產(chǎn)或順產(chǎn)的新生兒臍帶,長(zhǎng)度gt;30 cm,無(wú)菌條件下沖洗血跡,臍靜脈管腔內(nèi)注入0.25%胰酶+EDTA消化細(xì)胞,1 000 r/min離心10 min分離獲得消化液轉(zhuǎn)移至無(wú)菌培養(yǎng)皿中送細(xì)胞培養(yǎng)室,完全培養(yǎng)基(M199+10%胎牛血清)37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。24 h后換液,以后每2-3 d半量換液1次,觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,可見(jiàn)鋪路石樣細(xì)胞。傳代至第3代時(shí)進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。

    1.2主要試劑及儀器設(shè)備 胎牛血清購(gòu)自Hyclone,Mccoy’s 5A購(gòu)自Gibco,Matrigel膠購(gòu)自Bamp;D;TRAP-Hyb kit端粒酶活性檢測(cè)試劑盒購(gòu)自華美生物工程公司;2.5 L缺氧盒購(gòu)自Mitsubishi;細(xì)胞周期分析軟件Mob Forltnacv 1.01(Bamp;D);Rotor-Gene3000 實(shí)時(shí)PCR儀(Corbett Research);Primer Premier 5.0軟件(Premier Biosoft)。

    2方法

    2.1Matrigel三維培養(yǎng)及缺氧誘導(dǎo) Matrigel三維培養(yǎng)將Matrigel與含15%FBS 的Mccoy’s 5A 培養(yǎng)基按1∶1(V/V)混合,滴入培養(yǎng)板中,37 ℃孵育凝膠;分別將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期SKOV-3和ES-2消化成單細(xì)胞懸液,接種在Matrigel培養(yǎng)系統(tǒng);分別在常氧(O2濃度為21%)、缺氧(O2濃度為1%)等條件下每隔48 h更換上述培養(yǎng)液1次,培養(yǎng)7 d。將細(xì)胞培養(yǎng)板置于缺氧盒中,1%O2模擬缺氧環(huán)境。

    2.2體外誘導(dǎo)形成腫瘤內(nèi)皮樣細(xì)胞的鑒定 采用免疫組織化學(xué)熒光雙重標(biāo)記腫瘤內(nèi)皮樣細(xì)胞特異性抗原,透射電鏡下觀察腫瘤內(nèi)皮樣細(xì)胞超微結(jié)構(gòu),檢測(cè)相關(guān)細(xì)胞acLDL吞噬功能等方法對(duì)SKOV-3細(xì)胞及ES-2細(xì)胞在缺氧誘導(dǎo)條件下轉(zhuǎn)化為內(nèi)皮樣細(xì)胞及原代培養(yǎng)獲得的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行鑒定。具體方法見(jiàn)本課題組前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果[1]。

    2.3卵巢癌內(nèi)皮樣細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞端粒酶活性的檢測(cè) 收集實(shí)驗(yàn)2.1各組細(xì)胞及常氧下原代培養(yǎng)獲得的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,按端粒酶活性試劑盒說(shuō)明書(shū)逐步操作。結(jié)果判斷:酶標(biāo)儀上讀取450 nm的吸光度值(A值)。其中陽(yáng)性對(duì)照為人胚腎轉(zhuǎn)化細(xì)胞系293細(xì)胞,陰性對(duì)照為65 ℃處理30 min的293細(xì)胞獲得。陰性對(duì)照A值低于0.05按0.05計(jì)算,高于0.05按實(shí)際A值計(jì)算。若A值大于0.3,則判斷為無(wú)效,需重做實(shí)驗(yàn)。樣本A值大于陰性對(duì)照A值的2.1倍時(shí),判為端粒酶活性陽(yáng)性。

    2.4實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)抑癌基因p53、原癌基因v-src和周期蛋白cyclin D1的表達(dá) (1)引物的設(shè)計(jì):應(yīng)用Primer Premier 5.10軟件設(shè)計(jì),掃描人類(lèi)基因庫(kù)中未發(fā)現(xiàn)的其它同源序列。Cyclin D1:上游引物5’-GATGCCAACCTCCTCAACGAC-3’,下游引物5’- CTCCTCGCACTTCTGTTCCTC-3’,產(chǎn)物片段為171 bp;p53:上游引物5’-GCTGCTCAGATAGCGATGGTC-3’,下游引物5’-CTCCCAGGACAGGCACAAACA-3’,產(chǎn)物片段為298 bp;v-src:上游引物5’-CACTCGCTCAGCACAGGACAG-3’,下游引物5’-AGAGGCAGTAGGCACCTTTCG-3’,產(chǎn)物片段為196 bp;β肌動(dòng)蛋白(β-actin):上游引物5’-GTGGTGGTGAAGCTGTAGCC-3’,下游引物5’-GAGACCTTCAACACCCC-3’,產(chǎn)物片段為230 bp。(2)RNA含量及純度測(cè)定:收集實(shí)驗(yàn)2.1各組細(xì)胞及常氧下原代培養(yǎng)獲得的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,分別提取總RNA,測(cè)定RNA含量及純度。(3)RT反應(yīng):20 μL反應(yīng)體系,按照RT試劑盒操作步驟進(jìn)行,合成cDNA。(4)PCR反應(yīng):20 μL反應(yīng)體系,95 ℃預(yù)變性3 min;94 ℃ 45 s,55 ℃ 30 s,72 ℃ 45 s,共30個(gè)循環(huán);72 ℃充分延伸7 min,結(jié)束溫度為4 ℃。(5)結(jié)果與計(jì)算:各樣品的目的基因和管家基因分別進(jìn)行real-time PCR反應(yīng)。根據(jù)繪制的梯度稀釋DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線,各樣品目的基因和管家基因的濃度結(jié)果直接由機(jī)器生成。每個(gè)樣品的目的基因濃度除以其管家基因的濃度,即為此樣品此基因的校正后的相對(duì)含量。

    3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    結(jié) 果

    1卵巢癌內(nèi)皮樣細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞端粒酶活性的表達(dá)

    常氧時(shí)SKOV-3和ES-2細(xì)胞端粒酶活性表達(dá)為陽(yáng)性,缺氧誘導(dǎo)后SKOV-3內(nèi)皮樣細(xì)胞端粒酶活性為陽(yáng)性,而ES-2內(nèi)皮樣細(xì)胞轉(zhuǎn)為與人臍靜脈細(xì)胞相似,端粒酶活性為陰性,見(jiàn)表1、2。

    表1 SKOV-3及其內(nèi)皮樣細(xì)胞端粒酶活性的檢測(cè)

    表2 ES-2及其內(nèi)皮樣細(xì)胞端粒酶活性的檢測(cè)

    2體外誘導(dǎo)形成腫瘤內(nèi)皮樣細(xì)胞的鑒定

    本課題組前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果已表明[1]:缺氧可以誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞SKOV-3和ES-2轉(zhuǎn)化為內(nèi)皮樣細(xì)胞,并形成腔樣、管狀、分支和網(wǎng)絡(luò)狀等擬態(tài)血管。SKOV-3內(nèi)皮樣細(xì)胞可表達(dá)Flk-1、AC133和vWF;細(xì)胞出現(xiàn)空泡樣變,表面出現(xiàn)微絨毛樣突起,極少數(shù)細(xì)胞出現(xiàn)質(zhì)膜包裹的顆粒。ES-2內(nèi)皮樣細(xì)胞可以表達(dá)Flk-1和CD34;細(xì)胞出現(xiàn)空泡樣變,表面出現(xiàn)微絨毛樣突起,極少數(shù)細(xì)胞出現(xiàn)質(zhì)膜包裹的顆粒;部分細(xì)胞局部胞漿出現(xiàn)Dil陽(yáng)性細(xì)胞,具有吞噬acLDL功能。HUVECs的鑒定:vWF表達(dá)陽(yáng)性,具有acLDL吞噬功能,胞內(nèi)含Weibel-Palade小體。

    3卵巢癌內(nèi)皮樣細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞cyclinD1、p53和v-srcmRNA的表達(dá)

    缺氧誘導(dǎo)后SKOV-3內(nèi)皮樣細(xì)胞cyclin D1 mRNA的表達(dá)顯著低于常氧時(shí)的表達(dá)(Plt;0.01);與HUVECs表達(dá)比較無(wú)顯著差異(Pgt;0.05);p53 mRNA表達(dá)顯著高于常氧時(shí)的表達(dá)(Plt;0.01),也顯著高于HUVECs的表達(dá)(Plt;0.01);v-src mRNA的表達(dá)與常氧和HUVECs比較均無(wú)顯著差別(Pgt;0.05),見(jiàn)圖1。

    Figure 1.The expression of cyclin D1,p53 and v-src mRNA in SKOV-3 and SKOV-3 endothelial -like cells.Analysis of real-time RT-PCR at the 7th day revealed that hypoxia decreased the mRNA expression of cyclin D1 and increased the expression of p53 in SKOV-3 cells.No significant difference of v-src mRNA expression was observed under all conditions.±s.n=3.**Plt;0.01 vs SKOV-3 in normoxia.

    缺氧誘導(dǎo)后ES-2內(nèi)皮樣細(xì)胞cyclin D1 mRNA的表達(dá)顯著低于常氧時(shí)的表達(dá)(Plt;0.05);與HUVECs表達(dá)比較無(wú)顯著差異(Pgt;0.05);p53 mRNA表達(dá)顯著高于常氧時(shí)的表達(dá)(Plt;0.01),并顯著高于HUVECs表達(dá)(Plt;0.01);v-src mRNA的表達(dá)與常氧和HUVECs比較均無(wú)顯著差別(Pgt;0.05),見(jiàn)圖2。

    Figure 2.The expression of cyclin D1,p53 and v-src mRNA in ES-2 and ES-2 endothelials-like cells.Analysis of real-time RT-PCR at the 7th day revealed that hypoxia significantly decreased the mRNA expression of cyclin D1 and increased the expression of p53 in ES-2 cells.No significant difference of v-src mRNA expression was observed under all conditions±s.n=3.**Plt;0.01 vs ES-2 in normoxia.

    討 論

    局部氧分壓降低是幾乎所有實(shí)體腫瘤的特征,腫瘤細(xì)胞團(tuán)增至1 mm×1 mm×1 mm或更大時(shí),中央缺氧,此時(shí)腫瘤對(duì)微環(huán)境缺氧存在自身調(diào)節(jié)和適應(yīng)[3]。本課題組前期實(shí)驗(yàn)中,證實(shí)缺氧可影響SKOV-3和ES-2細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期分布、凋亡及侵襲等生物學(xué)行為[2]。同時(shí)證明,缺氧可以將卵巢上皮性癌細(xì)胞SKOV-3和ES-2誘導(dǎo)分化為血管內(nèi)皮樣細(xì)胞,形成擬態(tài)血管,為腫瘤提供血供;惡性程度越高的腫瘤,形成擬態(tài)血管能力越強(qiáng)[1-3]。由于血管內(nèi)皮細(xì)胞為非惡性腫瘤細(xì)胞,本文研究缺氧誘導(dǎo)部分卵巢癌細(xì)胞逆轉(zhuǎn)分化前后細(xì)胞與正常血管內(nèi)皮細(xì)胞在端粒酶、周期蛋白、癌基因及原癌基因的表達(dá)差異。

    端粒酶的表達(dá)對(duì)于維持干細(xì)胞自我更新能力和復(fù)制潛能有重要意義;端粒的長(zhǎng)度,使得腫瘤細(xì)胞不斷增殖,以致永生化[4-7]。本文結(jié)果表明,SKOV-3在缺氧前后端粒酶活性表達(dá)均為陽(yáng)性,端粒酶活性沒(méi)有發(fā)生改變,此時(shí)SKOV-3內(nèi)皮樣細(xì)胞仍未完全分化為終末細(xì)胞,我們推測(cè)其可能還具有腫瘤干細(xì)胞(tumor stem cell,TSC)屬性,有可能被進(jìn)一步誘導(dǎo)[8]。ES-2在缺氧前端粒酶活性陽(yáng)性,缺氧后ES-2內(nèi)皮樣細(xì)胞的端粒酶活性轉(zhuǎn)為陰性,表明 ES-2內(nèi)皮樣細(xì)胞已喪失腫瘤細(xì)胞的增殖特性,同時(shí)也喪失了TSC的復(fù)制潛能,ES-2內(nèi)皮樣細(xì)胞已轉(zhuǎn)化為具有特定功能與標(biāo)記的終末細(xì)胞。

    干細(xì)胞的特性是不斷地增殖與分化,而其進(jìn)行增殖分化的前提是進(jìn)入細(xì)胞周期。干細(xì)胞周期調(diào)控與其它哺乳動(dòng)物細(xì)胞一樣,也是通過(guò)各種細(xì)胞周期蛋白和細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)性激酶等相互作用來(lái)完成的。Cyclin D1合成是細(xì)胞接受外界信號(hào)刺激而進(jìn)入細(xì)胞周期的最早期事件,它推動(dòng)細(xì)胞進(jìn)入S期,使細(xì)胞周期進(jìn)入不依賴(lài)細(xì)胞外信號(hào)刺激的不可逆階段[9-12]。本研究結(jié)果表明,缺氧后SKOV-3內(nèi)皮樣細(xì)胞和ES-2內(nèi)皮樣細(xì)胞cyclin D1表達(dá)顯著下降,和HUVECs無(wú)顯著差異。由此我們可以推論:缺氧誘導(dǎo)后的腫瘤細(xì)胞SKOV-3和ES-2受cyclin D1的調(diào)控減少,從而停滯在G期而增殖分化受阻,使其惡性程度降低。表明cyclin D1在調(diào)控卵巢癌細(xì)胞向內(nèi)皮樣細(xì)胞分化中具有重要的作用。

    在腫瘤發(fā)生過(guò)程中,抑癌基因p53功能喪失是目前最常檢測(cè)到的變化之一,其中卵巢癌中的突變率高達(dá)30%-79%。缺氧誘導(dǎo)因子-1能對(duì)野生型P53蛋白的降解起抑制作用,穩(wěn)定P53使之水平升高,而對(duì)突變型P53無(wú)作用[13-16]。本研究結(jié)果表明,野生型p53在SKOV-3和ES-2細(xì)胞中表達(dá)極弱或喪失;經(jīng)缺氧誘導(dǎo)后,在SKOV-3和ES-2內(nèi)皮樣細(xì)胞表達(dá)水平顯著升高,也顯著高于HUVECs表達(dá)。本結(jié)果提示,從抑癌基因p53表達(dá)的角度來(lái)看,缺氧通過(guò)上調(diào)抑癌基因p53的表達(dá)來(lái)使SKOV-3和ES-2原有的惡性腫瘤細(xì)胞屬性降低或喪失。

    v-src基因是一個(gè)促進(jìn)細(xì)胞分化并參與其調(diào)節(jié)的癌基因[17],本研究結(jié)果顯示,無(wú)論是缺氧前或后,SKOV-3和ES-2,或者它們的內(nèi)皮樣細(xì)胞均不能檢測(cè)到v-src mRNA表達(dá),提示v-src癌基因沒(méi)有參與卵巢癌細(xì)胞SKOV-3或ES-2的發(fā)生與發(fā)展,沒(méi)有參與缺氧誘導(dǎo)出現(xiàn)SKOV-3和ES-2內(nèi)皮樣細(xì)胞形成的過(guò)程。

    缺氧是卵巢上皮性癌血管生成擬態(tài)的主要誘導(dǎo)因素之一。在缺氧狀態(tài)下,正常內(nèi)皮細(xì)胞增殖抑制,無(wú)法為腫瘤生長(zhǎng)提供足夠血供。而此時(shí)卵巢癌細(xì)胞干細(xì)胞潛能優(yōu)先向血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)展,以滿(mǎn)足其惡性發(fā)展的需要。根據(jù)本研究,我們推測(cè):卵巢癌細(xì)胞向血管內(nèi)皮樣細(xì)胞分化表面上看其發(fā)生逆分化,惡性程度降低;但是從長(zhǎng)遠(yuǎn)的發(fā)展,腫瘤血管的生成為腫瘤的生長(zhǎng)提供了養(yǎng)分和轉(zhuǎn)移的途徑,增加了其危害性,因此,缺氧對(duì)上皮性卵巢癌生長(zhǎng)發(fā)展具有雙刃劍的作用。如何阻斷其逆分化,針對(duì)逆分化后腫瘤內(nèi)皮樣細(xì)胞進(jìn)行靶向治療,有望為卵巢癌提供潛在的治療靶點(diǎn)。

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    Molecularmechanismofretrodifferentiationfromepithelialovariancancercellsinducedbyhypoxia

    CHEN Mo1,YIN Xiao-jun2,YAO Liang-qing1,LI Na1,ZHU Peng-fei1,XU Cong-jian1

    (1DepartmentofGynecology,ObstetricsandGynecologyHospital,FudanUniversity,Shanghai200001,China;2DepartmentofGynecology,TheSecondPeople’sHospitalofKunshanCity,Kunshan215300,China.E-mail:yaoliangqingcn@126.com)

    AIM: To investigate the molecular mechanism of retrodifferentiation from epithelial ovarian cancer into vascular endothelial-like cells induced by hypoxia.METHODSThe three-dimensional culture system with Matrigel was established to culture SKOV-3 and ES-2 ovarian cancer cell lines under hypoxic condition (1% O2).Telomeric repeat amplification protocol (TRAP) and real-time RT-PCR were used to analyze the activity of telomerase and the mRNA expression of cyclin D1,p53 and v-src in endothelial-like cells differentiated from the microdissected tumors.The data were compared with those in original cancer cells and human umbilical vein endothelial cells (HUVECs).RESULTSThe activity of telomerase was positive in SKOV-3 and ES-2 cells under normoxic condition,and was positive in SKOV-3 endothelial-like cells but negative in ES-2 endothelial-like cells under hypoxic condition.The mRNA expression of cyclin D1 in SKOV-3 and ES-2 endothelial-like cells with hypoxia was significantly lower than that in the same cells with normoxia (Plt;0.01),but was not significantly different from that in HUVECs (Pgt;0.05).In SKOV-3 and ES-2 endothelial-like cells,the mRNA expression of p53 was higher with hypoxia than that with normoxia.No expression of v-src mRNA in all kinds of the cells under either hypoxic or normoxic condition was detected.CONCLUSIONHypoxia induces the differentiation of SKOV-3 and ES-2 cells into vascular endothelial-like cells by decreasing telomerase activity and cyclin D1 expression,and the increasing the mRNA expression of p53.

    Ovarian neoplasms; Hypoxia; Vascular endothelial-like cells; Cell differentiation; Telomerase; Cyclin D1; Genes,p53; Genes,v-src

    1000-4718(2011)05-0848-05

    R737.31

    A

    10.3969/j.issn.1000-4718.2011.05.004

    2011-01-31

    2011-04-15

    上海市科委自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.08ZR1401900);高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專(zhuān)項(xiàng)科研基金資助項(xiàng)目(No.20070246020)

    △通訊作者 Tel:021-63450944;E-mail:yaoliangqingcn@126.com

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