阿德呋啉對人工感染雞球蟲病的療效試驗

吳麗君，曾明華，江善祥，阮祥春，萬榮峰

(1.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，合肥 230036;2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，南京 210095)

雞球蟲病(Coccidiosis)是由艾美耳屬(Eimeria)的多種球蟲引起的嚴(yán)重危害家禽生長發(fā)育和造成嚴(yán)重環(huán)境污染的疾?。?］。其發(fā)病率為50% ～70%，死亡率20% ～80%［2］。據(jù)報道，全世界每年因球蟲病造成的經(jīng)濟損失多達(dá)20億美元，抗球蟲藥的年消費為3億多美元［3-4］。目前，防治雞球蟲病的主要手段仍是用藥［5］，自從 Levine［6］發(fā)現(xiàn)磺胺類藥物具有抗球蟲作用以來，至今用于防治球蟲病的藥物有50余種。但前人的研究證明，球蟲幾乎對所有使用過的抗球蟲藥都有耐藥蟲株的出現(xiàn)，只是產(chǎn)生耐藥性所需的時間和耐藥性強弱不同而已［7-8］。球蟲耐藥性的產(chǎn)生導(dǎo)致抗球蟲藥物使用年限縮短，防治效果不佳，甚至失敗，引起臨床或亞臨床雞球蟲病，造成經(jīng)濟損失。為解決耐藥性問題，常采用綜合防治措施，而開發(fā)新藥則是根本解決辦法。

本試驗在長期篩選的基礎(chǔ)上，研制出核苷類化合物阿德呋啉。該藥通過干擾球蟲的嘌呤代謝而發(fā)揮抗球蟲作用。抗球蟲活性主要集中在球蟲的無性生殖期，對卵囊的孢子化也有一定的抑制作用。它是一種新型廣譜抗球蟲藥物，與其他抗球蟲藥無交叉耐藥性，從而有效治療耐藥蟲株的感染。本試驗?zāi)康氖窃u價這種新型抗球蟲藥對人工感染雞球蟲病的治療效果，探索其使用濃度，為臨床合理用藥提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 1日齡羅曼雄性雛雞購于合肥長豐雞場，出殼后即運至實驗室，飼喂不含任何藥物的飼料，自由飲水，無球蟲飼養(yǎng)至20日齡，經(jīng)糞檢確認(rèn)無球蟲卵囊后供試驗用。

1.2 試驗藥物 阿德呋啉，批號200909025，粉劑，含量75%，安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)藥理室與南京農(nóng)業(yè)大學(xué)共同研制;磺胺喹噁啉，批號20100226，粉劑，含量≥95%，安徽華澳動物藥業(yè)有限公司提供。

1.3 方法

1.3.1 試驗分組 將19日齡健康雞稱重，剔除精神狀態(tài)不佳、生長發(fā)育不良、體重過大或過小的雞只，共120只，隨機分為6組，每組20只，各感染及給藥分組情況如表1所示。

表1 試驗分組及藥物添加情況

1.3.2 人工感染 供試卵囊:從肥西某雞場按常規(guī)方法采集混合卵囊，其中主要為柔嫩艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲和布氏艾美耳球蟲，經(jīng)孢子化后保存在本實驗室備用。給藥24 h后，除不感染不給藥組外，各組每只雞經(jīng)口接種5萬個孢子化卵囊。

1.3.3 給藥方法 除陽性對照組和陰性對照組外，在接種卵囊前24 h，給各試驗組拌料混飼給藥，連續(xù)用藥7 d。

1.3.4 試驗期限及臨床觀察 試驗期為7 d，每日觀察雞的發(fā)病情況，記錄血便和死亡數(shù)等。人工感染后第7天，收集每組雞的糞便進(jìn)行糞便卵囊計數(shù);至第8天，將各組雞分別稱重并全部撲殺，觀察并記錄試驗雞的增重及盲腸和小腸病變情況。

1.3.5 藥效判定標(biāo)準(zhǔn)

1.3.5.1 相對增重率 試驗開始及結(jié)束時分別稱雞只體重，計算平均增重和相對增重率。以不感染不給藥組在試驗期間相對增重率為100%，計算其他各組的相對增重率，相對增重率×100即為相對增重率得分。

1.3.5.2 存活率 記錄各組死亡雞數(shù)，算出死亡率及存活率。

1.3.5.3 病變值 感染后第8天宰殺各組全部雞只，參照J(rèn)ohnson和Reid［4］設(shè)計的病變記分法，記錄每只雞的病變記分，將每組各雞的病變記分相加得病變值總分。腸道正常、無肉眼可見病變記0分，有少量散在病變記1分，較多稀疏病變記2分，有融合性大面積病變記3分，病變廣泛融合、腸壁增厚記4分。

1.3.5.4 卵囊值 根據(jù)卵囊比數(shù)計算卵囊值(表2)。卵囊比數(shù)(%)=(各試驗組卵囊數(shù)/感染不給藥組卵囊數(shù))×100。

表2 卵囊值計算方法

1.3.5.5 抗球蟲指數(shù)(ACI)ACI=(存活率 +相對增重率)-(病變值+卵囊值)。ACI＜120，為無效;ACI在120～160范圍內(nèi)，為低效;ACI在160～180之間，為中效;ACI＞180，為高效。

2 結(jié)果

2.1 臨床觀察 感染不給藥組雞感染卵囊后，逐漸出現(xiàn)采食減少、羽毛蓬亂、精神差、昏睡等反應(yīng)，第5天起，有血便出現(xiàn)，第6～7天開始死亡。死亡雞經(jīng)剖檢發(fā)現(xiàn)，盲腸腫大，有血水郁積，盲腸和小腸上有出血點;磺胺喹噁啉組及30 mg/kg阿德呋啉組的雞精神稍差，第5、6天出現(xiàn)少量血便，有少量雞只死亡;60 mg/kg阿德呋啉組、90 mg/kg阿德呋啉組、陰性對照組無臨床癥狀和死亡。

2.2 抗球蟲療效 試驗結(jié)果如表3所示。

表3 阿德呋啉對人工感染雞球蟲病的防治效果

從表3可以看出，各給藥組雞增重差異顯著較大。阿德呋啉90 mg/kg組相對增重率為83.2%，其結(jié)果經(jīng)F檢驗，與不感染不給藥組差異不顯著(P＞0.05);阿德呋啉60 mg/kg組相對增重率與不感染不給藥組相比，差異顯著(P＜0.05);而其他各給藥組及陽性對照組的相對增重率與不感染不給藥組比較，均差異極顯著(P＜0.01)。從 ACI來看，阿德呋啉 90 mg/kg組為183.2，為高效抗球蟲藥。其余各給藥組ACI均小于120，無抗球蟲效果。

3 討論

本試驗采用雞球蟲野外分離株混合人工感染發(fā)病。其感染不給藥組，血便嚴(yán)重，卵囊值、病變值和死亡率較高，其他各給藥組均有不同程度的病理變化，但90 mg/kg阿德呋啉組除外，其中30 mg/kg阿德呋啉組有死亡。阿德呋啉是目前核苷類化合物中作為抗球蟲藥物的唯一品種［9］。它通過干擾球蟲的嘌呤代謝而發(fā)揮抗球蟲作用。其抗球蟲作用峰期為球蟲的無性生殖期，即在球蟲感染后1～3 d作用最強。同時它對球蟲卵囊形成階段也有效，可使卵囊的毒力降低，減少感染力。因此，適用于治療及預(yù)防各種雞球蟲病，阿德呋啉屬廣譜抗球蟲藥，對柔嫩艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲和毒害艾美耳球蟲都有效。本試驗采用混合蟲種感染，阿德呋啉90 mg/kg組獲得良好的治療效果，其抗球蟲指數(shù)ACI為183.2，屬高效抗球蟲藥;30、60 mg/kg組則效果不好，說明該藥在發(fā)揮治療作用時應(yīng)使用較高濃度。從表3可見，阿德呋啉90 mg/kg組具有較好的平均增重率，其卵囊值和病變值為零，存活率為100%。而該藥的低濃度(30 mg/kg)組的存活率較低，與感染不給藥對照組差異不顯著(P＞0.05)?；前粪瓏f啉藥物對照組ACI僅為71.9，說明感染蟲株對該藥已產(chǎn)生耐藥性［10］。

綜合本次試驗結(jié)果，阿德呋啉可完全控制球蟲混合感染，有效對抗盲腸和小腸球蟲。該藥廣譜高效，抗球蟲機制獨特，與其他抗球蟲藥不產(chǎn)生交叉耐藥性，可用于耐藥蟲株的感染，是一種新型的抗球蟲劑。該藥首次進(jìn)入臨床，在我國尚無生產(chǎn)，開發(fā)該藥有助于雞球蟲病的臨床治療，特別適用于換藥方案給藥。

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