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    響應(yīng)面法優(yōu)化海蓬子多糖提取工藝的研究

    2011-11-06 08:35:40陳偉洲宋彩霞陳美珍
    食品工業(yè)科技 2011年3期
    關(guān)鍵詞:水料響應(yīng)值回歸方程

    陳偉洲,宋彩霞,陳美珍,*

    (1.汕頭大學(xué)海洋生物研究所,廣東汕頭515063;2.汕頭大學(xué)理學(xué)院生物系,廣東汕頭515063)

    響應(yīng)面法優(yōu)化海蓬子多糖提取工藝的研究

    陳偉洲1,宋彩霞2,陳美珍2,*

    (1.汕頭大學(xué)海洋生物研究所,廣東汕頭515063;2.汕頭大學(xué)理學(xué)院生物系,廣東汕頭515063)

    為優(yōu)化海蓬子多糖的水法提取工藝,在單因素實驗的基礎(chǔ)上,運用響應(yīng)面分析法,研究水料比、提取時間、提取溫度對海蓬子多糖提取率的影響,建立多糖提取得率的二次回歸方程,并對其工藝參數(shù)進行優(yōu)化。研究結(jié)果表明:水提海蓬子多糖的最佳工藝參數(shù)為水料比48∶1,提取時間4.0h,提取溫度90℃。在該條件下提取一次,多糖得率為2.0%,而理論預(yù)測多糖得率是2.01%,實際得率達到理論預(yù)測值的99.5%。

    海蓬子,多糖,提取,響應(yīng)面設(shè)計

    1 材料與方法

    1.1 材料與儀器

    海蓬子干粉 新鮮海蓬子,由廣東省汕頭大學(xué)南澳海洋實驗站提供,采集時間為2009年4~5月,海蓬子采摘后取可食莖部,除雜去沙后,洗凈,晾干,于50~60℃下烘干,粉碎過20目篩后即為海蓬子干粉,低溫保存,備用;濃硫酸、苯酚、標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖、3,5-二硝基水楊酸(DNS)等 均為分析純。

    5417R臺式高速冷凍離心機 Eppendorf公司;日立CT5DL型離心機 Tokyo公司;DHG-9053A型電熱鼓風(fēng)干燥器、UNICO-UV2100型分光光度計尤尼柯儀器有限公司;DK-S22型電熱恒溫水浴鍋上海精宏實驗設(shè)備有限公司等。

    1.2 實驗方法

    1.2.1 海蓬子多糖提取 準(zhǔn)確稱取海蓬子粉末2.00g,按設(shè)定的水料比加入蒸餾水,在設(shè)定的溫度下恒溫攪拌提取3~5h后,于5000r/min離心20min,上清液為待測溶液。

    1.2.2 單因素實驗 以水為提取液,選取浸取溫度、時間和水料比三因素進行研究,按照1.2.1方法提取海蓬子多糖,并計算得率。

    1.2.3 響應(yīng)面法實驗設(shè)計 在單因素實驗基礎(chǔ)上,采用SAS9.0統(tǒng)計分析軟件中Box-Behnken設(shè)計三因素三水平的響應(yīng)分析實驗[9],各因素編碼值見表1。以多糖的提取得率為響應(yīng)值,通過響應(yīng)面分析及嶺脊分析對提取條件進行優(yōu)化。

    表1 Box-Behnken設(shè)計因素水平編碼表

    1.2.4 提取液多糖含量的測定[10-11]先采用苯酚-硫酸法測定總糖含量,以葡萄糖作標(biāo)準(zhǔn)品(用0.9的系數(shù)校正),再采用DNS法測定還原糖含量。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 單因素實驗結(jié)果

    2.1.1 時間對多糖提取得率的影響 保持80℃、水料比25∶1,提取一次,研究提取時間對多糖得率的影響,結(jié)果如圖1所示。

    圖1 提取時間對多糖提取得率的影響

    由圖1可知,多糖提取得率隨著提取時間的延長,呈現(xiàn)整體上升的趨勢。在本實驗所選提取時間范圍內(nèi),提取得率沒有極值點,且提取5h比4h得率有較大提高,但考慮到長時間加熱耗時耗能,還有可能導(dǎo)致多糖變性,因此,提取時間以5h左右為宜。

    2.1.2 水料比對多糖提取得率的影響 設(shè)定提取時間3h,提取溫度80℃,提取一次,研究水料比10∶1~70∶1對提取得率的影響,結(jié)果如圖2所示。

    從圖2可以看出,多糖得率隨水料比的增加而增加,但到水料比為40∶1后增加緩慢。考慮到溶劑用量過大,水浴加熱的負荷增大,并且會給后續(xù)工作增加負擔(dān),所以認為水料比以40∶1較為合適。

    2.1.3 溫度對多糖提取得率的影響 保持提取時間3h、水料比25∶1不變,提取一次,探討溫度對海蓬子多糖提取得率的影響,結(jié)果如圖3所示。

    圖2 水料比對多糖提取得率的影響

    圖3 溫度對多糖提取得率的影響

    由圖3可見,隨著溫度的升高,多糖的得率逐漸增加,到100℃達到最大值。這可能是伴隨溫度的升高,原料溶脹度增大,傳質(zhì)強化,從而使得多糖的溶出率增加。但從90℃到100℃多糖提取得率增加不多,從溫度對多糖穩(wěn)定性的影響和能耗等綜合考慮,多糖的提取以90℃為宜。

    2.2 響應(yīng)面分析法對海蓬子多糖提取工藝條件的優(yōu)化

    2.2.1 響應(yīng)面分析實驗方案及結(jié)果 對表1所列的水料比Z1,提取時間Z2和Z3作如下變換:X1=(Z1-50)/10,X2=(Z2-4)/1,X3=(Z3-80)/10,以Xl、X2、X3為自變量,以多糖得率(Y1)為響應(yīng)值,實驗方案及結(jié)果見表2,回歸模型方差分析結(jié)果見表3。

    表2 響應(yīng)面分析方案及實驗結(jié)果

    由表3分析結(jié)果可知,回歸模型(p=0.0028<0.01)和一次項(p=0.0012<0.01)均高度顯著,二次項(p=0.0118<0.05)和交互項(p=0.012<0.05)顯著,表明回歸模型可以很好地反映多糖提取得率與因素的關(guān)系。此外,回歸模型R2=96.94%,說明回歸模型和預(yù)測值之間有較好的擬合度。因此該模型可用于預(yù)測多糖提取得率的實際情況。

    表3 回歸模型方差分析

    2.2.2 擬合回歸方程的建立 對響應(yīng)值與各因素進行回歸擬合,回歸方程系數(shù)顯著性檢驗見表4,回歸擬合后得回歸方程:

    表4 回歸方程系數(shù)檢驗

    2.2.3 各因素的重要性分析 通過模型方程作響應(yīng)曲面圖,結(jié)果如圖4~圖6。比較三組圖可知,溫度(X3)對多糖提取得率的影響比較顯著,表現(xiàn)為曲線較陡;水料比(X1)和時間(X2)對多糖提取得率的影響比較小,表現(xiàn)為隨X1和X2的增加,其響應(yīng)值變化較小。

    圖4 Y=f(X2,X3)的響應(yīng)面圖

    圖5 Y=f(X1,X3)的響應(yīng)面圖

    由回歸方程中各變量對響應(yīng)值影響的顯著性分析結(jié)果見表5。從表5可以看出,三個因素的特征值有正有負,表明此二次響應(yīng)面是鞍面,無極值存在,因此不能直接從此二次響應(yīng)面上找出最佳工藝參數(shù),需要進一步作嶺脊分析。

    圖6 Y=f(X1,X2)的響應(yīng)面圖

    表5 典型值分析表

    2.2.4 嶺脊分析 嶺脊分析的原理是以原始設(shè)計中心點為球心,r為半徑的超球面與響應(yīng)面的交點形成的軌跡范圍內(nèi)找出最佳響應(yīng)值,即最佳條件。嶺脊分析結(jié)果見表6。

    從表6可以看出,隨著r值增大,預(yù)估響應(yīng)值隨之增大,最大響應(yīng)值時的編碼半徑為1.0,此時的水料比為48.4∶1,時間為4.00h,溫度為89.87℃。

    表6 嶺脊分析結(jié)果

    2.2.5 模型的驗證 對上述優(yōu)選的多糖提取條件進行驗證實驗,考慮實際操作的便利,將多糖提取的最優(yōu)條件修正為:水料比48∶1,時間4h,溫度90℃。在此條件下提取多糖,多糖的得率為2.00%,與理論預(yù)測值2.01%接近。說明采用響應(yīng)面法優(yōu)化得到的多糖提取參數(shù)準(zhǔn)確可靠,具有實際應(yīng)用價值。

    3 結(jié)論

    將響應(yīng)面分析法應(yīng)用于海蓬子多糖提取工藝條件的研究,確定海蓬子多糖的最佳提取工藝參數(shù)為:水料比48∶1,提取時間4.0h,提取溫度90℃,最大提取得率預(yù)測值為2.01%。實驗結(jié)果對海蓬子多糖的進一步開發(fā)利用有較好的參考價值。

    [1]呂忠進,Edward P Glenn,Roy M Hodges,et al.全海水灌溉的作物——北美海蓬子(上)[J].世界農(nóng)業(yè),2001(2):14-16.

    [2]呂忠進,Edward P Glenn,Roy M Hodges,et al.全海水灌溉的作物——北美海蓬子(下)[J].世界農(nóng)業(yè),2001(2):19-20.

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    Optimization of extraction technology of Salicornia bigelovii Torr.polysaccharides by response surface methodology

    CHEN Wei-zhou1,SONG Cai-xia2,CHEN Mei-zhen2,*
    (1.Marine Biology Institute,Shantou University,Shantou 515063,China; 2.Department of Biology,College of Science,Shantou University,Shantou 515063,China)

    The extraction of polysaccharides from Salicornia bigelovii Torr.was studied in this paper.According to the single-factor experiments,three levels of the factors(extraction temperature,time and the ratio of water to solid) were selected for the Box-Behnken factorial design to establish a quadric regression equation for describing the yield of polysaccharides.By response surface analysis,the optimum extraction conditions were obtained as follows:extraction temperature of 90℃,extraction time of 4.0h and water-pueraria residue ratio of 48∶1,under which the experimental yield(2.0%)of polysaccharides accounts for 99.5%of the theoretically predicted value of 2.01% with one-time extraction.

    Salicornia bigelovii Torr.;polysaccharides;extraction;response surface analysis

    TS201.2+3

    B

    1002-0306(2011)03-0318-04

    海蓬子 (SalicorniabigeloviiTorr.)為藜科(Chenopodiaceae)鹽角草屬(Salicornia)的無葉、莖肉質(zhì)化的真鹽生植物,俗稱海蘆筍、海蟲草等,原產(chǎn)美洲鹽沼地,是一種無公害的綠色新型海水蔬菜[1-2],在歐美一些國家已經(jīng)有產(chǎn)品面世,并得到人們的喜愛[3]。海蓬子富含多種營養(yǎng)成分和活性物質(zhì)[4],除作為蔬菜之外,還具有藥用和保健價值。海蓬子作為民間藥物可用于治療癌癥、糖尿病、肥胖癥和便秘等多種疾病[5-7]。國外研究發(fā)現(xiàn)海蓬子多糖具有免疫調(diào)節(jié)活性,并認為此活性可能是海蓬子抗癌機理之一[5-7]。作者對產(chǎn)于廣東南澳縣海蓬子的水提物、醇提物及水提多糖的研究表明海蓬子多糖具有體外抗氧化活性[8]。但目前國內(nèi)外對海蓬子多糖的研究仍然很少,有關(guān)海蓬子多糖的提取利用等報道幾乎是空白。本實驗在對海蓬子多糖的提取條件單因素研究的基礎(chǔ)上應(yīng)用響應(yīng)面法對提取工藝參數(shù)進行優(yōu)化選擇,以期能充分地提取海蓬子多糖。

    2010-01-27 *通訊聯(lián)系人

    陳偉洲(1971-),男,高級工程師,研究方向:水產(chǎn)養(yǎng)殖。

    廣東省科技計劃項目(2010B090400461)。

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