荔枝核提取物抗氧化活性及紅外光譜特性

江 敏，胡小軍，陳曉林，李土珍

（湛江師范學(xué)院化學(xué)科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，廣東高校新材料工程技術(shù)開(kāi)發(fā)中心，廣東湛江524048）

荔枝核提取物抗氧化活性及紅外光譜特性

江 敏，胡小軍，陳曉林，李土珍

（湛江師范學(xué)院化學(xué)科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，廣東高校新材料工程技術(shù)開(kāi)發(fā)中心，廣東湛江524048）

以荔枝核為原料，以95%的乙醇為提取劑，在超聲波的作用下得到荔枝核乙醇提取物。利用提取物對(duì)DPPH自由基和羥自由基的清除能力評(píng)價(jià)其抗氧化活性；同時(shí)測(cè)定了提取物的總還原能力和總的抗氧化性。最后通過(guò)紅外光譜對(duì)提取物進(jìn)行了定性分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：荔枝核提取物具有很強(qiáng)的抗氧化活性，其抗氧化能力大于BHT，小于維生素C；荔枝核提取物清除DPPH·和·OH的IC50分別為0.032、0.160mg/mL。每克荔枝核提取物總抗氧化能力相當(dāng)于210mg Vc的總抗氧化能力；從紅外光譜的結(jié)果可知，荔枝核提取物主要為黃酮類物質(zhì)。

荔枝核，抗氧化，紅外光譜

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

荔枝核 2009年7月購(gòu)于湛江水果市場(chǎng)新鮮荔枝，品種為“雞嘴荔”，去除果肉，在45℃條件下干燥備用；DPPH 購(gòu)于Sigma公司；其他試劑 均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 荔枝核提取物的制備 將干燥好的荔枝核粉碎，取一定量荔枝核粉末，加入95%乙醇，置于超聲波儀器，在頻率為60kHz和超聲功率為300W的條件下作用一定時(shí)間，然后過(guò)濾，所得溶液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，最后將濃縮物進(jìn)行減壓干燥后即可得到荔枝核提取物。

1.2.2 荔枝核提取物清除DPPH自由基 參考Pornpun Siramon等人[12]的方法，略加修改。用50%的乙醇配制濃度為0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12、0.14mg/mL的荔枝核提取物五份備用。在裝有1mL的濃度為4×10-4mol/L DPPH無(wú)水乙醇溶液的比色管中，加入不同濃度的樣品溶液1mL，搖勻，室溫避光靜置30min，在517nm測(cè)量吸光度Ai。用50%乙醇代替樣品溶液，測(cè)得吸光度A0，無(wú)水乙醇代替DPPH，測(cè)得吸光度Aj。同時(shí)用BHT做對(duì)照。清除率按下公式計(jì)算：

1.2.3 荔枝核提取物清除羥自由基[13-14]采用鄰二氮菲-Fe2+氧化法測(cè)定H2O2/Fe2+產(chǎn)生的·OH，H2O2/Fe2+體系通過(guò)Fenton反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基，鄰二氮菲-Fe2+水溶液可被羥自由基氧化為鄰二氮菲-Fe3+，從而使鄰二氮菲-Fe2+呈現(xiàn)的紅色變淺，在536nm處的最大吸收峰消失，當(dāng)體系中存在·OH清除劑時(shí)，可以使A536降低，以A536變化反映抗氧化劑抗羥基自由基性能。并定義抗氧化劑對(duì)·OH清除率為：

式中：Ai-加入2.00mL 0.75mmoL/mL鄰二氮菲溶液、2.00mL磷酸鹽緩沖溶液（7.4）、不同濃度（0.05、0.10、0.15、0.20、0.25mg/mL）的荔枝核提取物溶液1mL、2.00mL 0.75mmoL/mL FeSO4溶液和最后加1.00mL 0.01%過(guò)氧化氫溶液，反應(yīng)液37℃水浴保溫1h后的吸光度；Aj-不加入荔枝核提取物溶液，用1mL的50%乙醇代替樣品只加入相應(yīng)的提取劑，反應(yīng)液37℃水浴保溫1h后的吸光度；Ac-未加入荔枝核提取物和過(guò)氧化氫，只加入2.00mL 0.75mmoL/mL鄰二氮菲溶液、2.00mL磷酸鹽緩沖溶液（7.4）、2.00mL 0.75mmoL/mL FeSO4溶液，用2mL的50%乙醇代替荔枝核提取物和過(guò)氧化氫，反應(yīng)液37℃水浴保溫1h后的吸光度。同時(shí)用Vc做對(duì)照。

1.2.4 還原能力的測(cè)定 參照Hong Ye等人[15]的方法并略加修改。于10mL離心試管中加入2.5mL 0.2mol/L pH6.6磷酸緩沖溶液，0.5mL提取物溶液，1mL 1%鐵氰化鉀，混勻，50℃恒溫條件下，保溫20min。急速冷卻，加2.5mL 10%三氯乙酸，3000r/min離心分離10min。取上層清液2.5mL，加2.5mL水再加0.5mL0.1%FeCl3，混合均勻，靜置10min后在波長(zhǎng)700nm下測(cè)吸光度。用溶劑代替樣液做空白實(shí)驗(yàn)。吸光度越大，表示樣品的還原力越大。按同樣方法用BHT、Vc做對(duì)照。

1.2.5 總抗氧化能力測(cè)定 參照Prieto P等方法[16]略加修改。在6支10mL具塞刻度比色管中，分別加入1.00mL濃度為0.025、0.05、0.075、0.1、0.125、0.15mg/mL的抗壞血酸溶液，然后依次加入1.0mL 3.00mol/L H2SO4溶液、1.0mL 0.14mol/L Na3PO4溶液和1.0mL 0.02mol/L（NH4）6Mo7O24溶液，用蒸餾水定容至5.0mL，搖勻，加塞于95℃水浴中加熱90min，取出流水冷卻后，以不加抗壞血酸的溶液為空白，在695nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，繪制抗壞血酸總抗氧化能力標(biāo)準(zhǔn)曲線。分別取1.00mL濃度為0.5mg/mL的荔枝核提取物溶液，同上法測(cè)定，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得每克提取物相當(dāng)于抗壞血酸的量（mg）。

1.2.6 荔枝核提取物紅外光譜分析 取微量提取物用無(wú)水乙醇溶解配制成適宜濃度，取3滴加到研細(xì)的KBr上，在紅外燈照射下，使酒精揮發(fā)，然后壓片，最后進(jìn)行紅外光譜掃描。同時(shí)用蘆丁做標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照。

2 結(jié)果與分析

2.1 荔枝核提取物對(duì)DPPH·的清除效果

DPPH·在有機(jī)溶劑中是一種穩(wěn)定的自由基，不同濃度的荔枝核提取物樣品液、BHT溶液對(duì)DPPH·的清除效果見(jiàn)圖1。

圖1 荔枝核提取物和BHT對(duì)DPPH·的清除效果

由圖1可知，荔枝核提取物對(duì)DPPH·有很強(qiáng)的清除能力，其清除效果隨著濃度的增大而提高。當(dāng)荔枝核提取物的濃度達(dá)到0.12mg/mL，對(duì)DPPH·的清除率達(dá)到92.56%。在相同濃度下，荔枝核提取物對(duì)DPPH·的清除能力高于BHT。

2.2 荔枝核提取物清除·OH的清除效果

荔枝核提取物清除·OH的結(jié)果見(jiàn)圖2。由圖2可知，荔枝核提取物對(duì)羥自由基的清除率隨濃度的增加而增大，但其清除能力低于Vc。

圖2 荔枝核提取物和Vc對(duì)·OH的清除效果

2.3 荔枝核提取物對(duì)DPPH·和·OH的IC50

由2.1和2.2的結(jié)果將提取物的曲線進(jìn)行擬合，可求得提取物對(duì)兩種自由基的IC50值，結(jié)果見(jiàn)表1，對(duì)兩種自由基的IC50值分別為0.032、0.160mg/mL。

表1 提取物清除DPPH·和·OH的IC50

2.4 荔枝核提取物的還原能力

荔枝核提取物、BHT和Vc的還原能力結(jié)果見(jiàn)圖3。

圖3 荔枝核提取物、BHT和Vc的還原能力

該實(shí)驗(yàn)是通過(guò)吸光度的大小來(lái)表示還原能力的，吸光度越大，還原能力越強(qiáng)。由圖3可知，荔枝核提取物具有一定的還原能力，其還原力隨著濃度的增大而提高，在相同濃度下其還原能力高于BHT，低于Vc。

2.5 荔枝核提取物總抗氧化能力

Vc抗氧化能力標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果見(jiàn)圖4，0.5mg/mL的荔枝核提取物溶液的吸光度為1.381±0.001，根據(jù)回歸方程可求得每克荔枝核提取物總抗氧化能力相當(dāng)于210mgVc的總抗氧化能力。

圖4 Vc抗氧化能力工作曲線

2.6 荔枝核提取物紅外光譜性質(zhì)

荔枝核提取物和蘆丁的紅外光譜圖見(jiàn)圖5和圖6。

圖5 荔枝核提取物紅外光譜掃描圖

圖6 蘆丁紅外光譜掃描圖

在3400cm-1左右都有羥基很強(qiáng)的伸縮振動(dòng)，峰形寬大，吸收極強(qiáng)，說(shuō)明有酚羥基存在；在2900cm-1處有碳?xì)涞纳炜s振動(dòng)，吸收峰的強(qiáng)度較小，說(shuō)明飽和碳上的氫較少；在1600cm-1附近有羰基的伸縮振動(dòng)，兩者的位置和峰形一樣，說(shuō)明提取物中含有黃酮類物質(zhì)；在1400cm-1左右有吸收峰，說(shuō)明有苯環(huán)存在；在1000cm-1左右吸收峰較強(qiáng)，是碳氧單鍵的伸縮振動(dòng)。通過(guò)對(duì)照提取物和蘆丁的紅外光譜圖，特征峰一致，同時(shí)結(jié)合解析所含有的基團(tuán)，可以判斷荔枝核提取物主要是黃酮類化合物。

3 結(jié)論

3.1 荔枝核提取物具有很強(qiáng)的抗氧化活性，其抗氧化能力大于BHT，小于維生素C；荔枝核提取物清除DPPH·和·OH的IC50分別為0.032、0.160mg/mL。每克荔枝核提取物總抗氧化能力相當(dāng)于210mgVc的總抗氧化能力。

3.2 從紅外光譜的結(jié)果可知，荔枝核提取物主要為黃酮類物質(zhì)。

[1]Chitra K,Pillai KS.Antioxidants in health[J].Indian J Physiol. Pharmacol，2002，46:1-5.

[2]KohenR,GatiI.Skin low molecular weight antioxidants and their roleinagingandinoxidativestress[J].Toxicol，2000，148:149-157.

[3]Farber JL.Mechanisms of cell injury by activated oxygen species[J].Env Health Persp，1994，102:17-24.

[4]GutteridgeJMC.Freeradicalsindiseaseprocesses:acomplication ofcauseandconsequence[J].FreeRadicResComm，1995，19:141-158.

[5]Pong K.Oxidative stress in neurodegenerative diseases：therapeutic implications for superoxide dismutase mime tics[J]. Expert Opin Biol Ther，2003（3）:127-139.

[6]Suja KP,Jayalekshmy A,Arumughan C.Antioxidant activity of sesame cake extract[J].J Food Chem，2005，91:213-219.

[7]陸志科，黎深.荔枝核活性成分分析及其提取物抗氧化性能研究[J].食品科學(xué)，2009，30（23）：110-113.

[8]丁麗，王敏，趙俊，等.荔枝核化學(xué)成分的研究[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2006，18（6）：45-47.

[9]王輝，陶小紅，王洋，等.荔枝核提取物體外抗病毒活性及其機(jī)制研究[J].中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，39（5）：437-441.

[10]呂俊華，沈文娟，韋笑梅，等.荔枝核提取物對(duì)荷瘤小鼠腫瘤細(xì)胞Bax和Bcl-2蛋白表達(dá)的影響[J].中成藥，2008，30（9）：1381-1383.

[11]郭潔文，潘競(jìng)鏘.荔枝核荔枝核的化學(xué)成分、生物活性及藥理作用研究[J].中國(guó)新藥雜志，2006，15（8）：585-588.

[12]PornpunSiramon，YoshitoOhtani.Antioxidative and antiradical activities of Eucalyptus camaldulensis leaf oils from Thailand[J].J Wood Sci,2007,53（6）：498-504.

[13]Amarowicz R，Pegg R B，Rahimi-Moghaddamc P，et al. Free-radical scavenging capacity and antioxidant activity of selected plant species from the Canadian prairies[J].Food Chem, 2003，84：551-562.

[14]金鳴，蔡亞欣，李金榮，等.鄰二氮菲-Fe2+氧化法檢測(cè)H2O2/Fe2+產(chǎn)生的羥自由基[J].生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展，1996，23（6）：553-555.

[15]Ye H，Zhou C H，Sun Y，et al.Antioxidant activities in vitro of ethanol extract from brown seaweed Sargassum pallidum[J].Eur Food Res Technol，2009，230：101-109.

[16]Prieto P，Pineda M，Aguilar M.Spectrophotometric quantitation of antioxidant capacity through the formation of a phosphomoly bolenum complex[J].Analytical Biochemistry，1999，269：337-341.

Antioxidant activities and infrared spectroscopic properties of extract from litchi seeds

JIANG Min,HU Xiao-jun,CHEN Xiao-lin,LI Tu-zhen
（Chemistry Science and Technology School,Zhanjiang Normal University,Development Center for New Materials Engineering&Technology in Universities of Guangdong,Zhanjiang 524048,China）

The dried samples of litchi seeds were cut into small pieces and soaked in 95% (v/v)ethanolic aqueous solution under the ultrasonic for some time.The extract was decanted，filtered under vacuum，concentrated in a rotary evaporator，and then lyophilized.The resulting extracts were employed for the current study.DPPH radical and hydroxyl radical scavenging assays were carried out to evaluate the antioxidant potential of the extract.Total reducing power and antioxidant capacity of the extract were determined at the same time.Qualitative analysis of the extract was studied by infrared spectroscopic.The experiment results showed that the extract could play an important role in the antioxidant activity.The order of antioxidant was Vc＞extract＞BHT.The IC50values of extract against DPPH radical and hydroxyl radical were 0.032mg/mL and 0.160mg/mL，respectively.Total antioxidant capacity of per gram extract was equal to 210mg Vc.Main component of the extract was flavonoid from infrared spectroscopic.

litchi seeds；antioxidant；infrared spectroscopic

TS255.1

A

1002-0306（2011）10-0170-03

人體攝入外源性的化學(xué)物質(zhì)，在酶參與的機(jī)體代謝過(guò)程，使氧氣不斷產(chǎn)生活性氧分子，如超氧陰離子、過(guò)氧化氫、羥自由基[1]。在正常情況下，機(jī)體內(nèi)的抗氧化物質(zhì)會(huì)清除這些物質(zhì)。但是活性氧分子產(chǎn)生過(guò)多，就會(huì)引發(fā)機(jī)體的氧化應(yīng)激[2]?；钚匝鹾苋菀坠魴C(jī)體內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)以及DNA等生物大分子使其氧化并引發(fā)一些疾病[3]。有關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，氧化損傷是糖尿病、癌癥、動(dòng)脈硬化以及衰老的重要原因[4-5]。BHA、BHT是非常重要的化學(xué)合成抗氧化劑，但是攝入過(guò)多會(huì)對(duì)人體造成一些毒害作用[6]。現(xiàn)在許多國(guó)家都限量使用化學(xué)合成的抗氧化劑，所以開(kāi)發(fā)天然抗氧化劑倍受國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。荔枝核是荔枝利用果肉后產(chǎn)生的物質(zhì)，其主要化學(xué)成分為荔枝核皂苷、黃酮類、酚酸類、蒽醌類、揮發(fā)油、甾醇、萜類內(nèi)酯、有機(jī)酸及酯、氨基酸肽類、糖類及礦物微量元素等[7-8]。荔枝核是中國(guó)傳統(tǒng)的中藥材，具有抗病毒[9]、抗腫瘤[10]、降血糖、調(diào)血脂等藥理作用[11]。本文以荔枝核為原料，系統(tǒng)研究其粗提物的抗氧化活性，同時(shí)對(duì)其粗提物進(jìn)行紅外光譜分析，以期為荔枝核的開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。

2010-11-26

江敏（1977-），女，碩士，實(shí)驗(yàn)師，研究方向：食品功能成分的制備與應(yīng)用及食品的加工與保鮮。

湛江市科技攻關(guān)項(xiàng)目（2010C3110018）。