• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    乳腺癌組織中PI3K/A KT信號通路相關(guān)蛋白表達

    2011-11-02 01:52:37龔曉萌王黎明
    關(guān)鍵詞:組織學(xué)激酶分級

    龔曉萌 王黎明

    (蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院病理科,蚌埠醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室安徽 2330301;蚌埠市第四人民醫(yī)院內(nèi)科安徽 233000)

    乳腺癌組織中PI3K/A KT信號通路相關(guān)蛋白表達

    龔曉萌 王黎明1*

    (蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院病理科,蚌埠醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室安徽 2330301;蚌埠市第四人民醫(yī)院內(nèi)科安徽 233000)

    目的 研究PI3K/AKT信號傳導(dǎo)通路中 Her-2、PI3K、AKT以及bcl-2在乳腺癌中的表達及其與臨床特征、預(yù)后的相關(guān)性。方法 用免疫組化SP法檢測31例乳腺癌和癌旁組織中 Her-2、PI3K、AKT以及bcl-2的表達。結(jié)果 Her-2、PI3K、AKT在乳腺癌中的表達率分別為45.2%、90.3%、67.7%,均明顯高于癌旁組織(P<0.05),而 bcl-2在乳腺癌中的表達率為58.1%,在癌旁組織中的表達率為83.9%,(P<0.05);乳腺癌組織中,Her-2、PI3K、AKT、bcl-2的表達均與年齡無相關(guān)性(P>0.05);Her-2、AKT在乳腺癌中的表達和組織學(xué)分級呈正相關(guān)(P<0.05),bcl-2的表達和組織學(xué)分級呈負相關(guān)(P<0.05),PI3K的表達與組織學(xué)分級無明顯相關(guān)性(P>0.05);AKT的表達在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時表達率較高,與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組相比差異有顯著性(P<0.05),bcl-2的表達在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時表達率較低,與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組相比差異有顯著性(P<0.05),Her-2、PI3K的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論 Her-2、AKT的過表達和bcl-2的低表達和乳腺癌的形成和進展有關(guān),檢測 Her-2、AKT以及bcl-2的表達可用于判定乳腺癌的惡性程度,并可作為判斷預(yù)后的指標。

    乳腺腫瘤; PI3K; AKT; 免疫組織化學(xué)

    乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)生發(fā)展與細胞增殖和細胞凋亡機制異常密切相關(guān)。PI3K(phosphatidylinosit ol 3 kinase,磷脂酰肌醇-3激酶)-A KT(v-A KT murine thymoma viral oncogene homo-log)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑是細胞內(nèi)重要的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,在廣泛的人類腫瘤譜中失調(diào),該通路某些成分的突變所導(dǎo)致的功能獲得或功能缺失能夠引起細胞轉(zhuǎn)化,這條通路調(diào)節(jié)腫瘤細胞的增殖和存活,與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移行為也密切相關(guān)。細胞培養(yǎng)實驗結(jié)果表明,在 neu、TGF和 heregulin/NDF(neu基因分化因子)啟動的乳腺癌細胞中PI3K被強烈活化,這個信號傳導(dǎo)途徑的活化可能是乳腺組織中癌基因發(fā)生激活,進而引起細胞惡性轉(zhuǎn)化的先決條件[1]。本試驗采用免疫組織化學(xué)的方法檢測 Her-2、PI3K、A KT、bcl-2在乳腺癌及癌旁組織中的表達及與臨床病理特征的關(guān)系,探討其在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用及與臨床預(yù)后的關(guān)系。

    材料和方法

    1 研究對象 選取2003-2004乳腺癌及其癌旁組織石蠟標本各31例,4μm厚度,經(jīng)兩名有經(jīng)驗的病理醫(yī)師重新閱片確診。所有病例均為女性,年齡30-76歲,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者11例,無轉(zhuǎn)移者20例,按乳腺組織學(xué)WHO分級標準分類,分為I,II,III級。其中I級12例,II級8例,III級11例。所有病例均經(jīng)過以手術(shù)為主的綜合治療。

    2 方法和試劑 所有標本以甲醛固定,石蠟包埋常規(guī)制片,嚴格按照免疫組化SP實驗步驟進行,一抗 Her-2、PI3K、A KT、bcl-2 、SP通用試劑盒以及DAB顯色試劑盒均購自北京中杉生物技術(shù)有限公司,以PBS代替一抗為陰性對照,已知陽性切片作為陽性對照。

    3 結(jié)果判定 采用雙盲法,由兩位有臨床經(jīng)驗的病理科醫(yī)生對免疫組化結(jié)果進行判讀。結(jié)果以陽性細胞比例和陽性強度綜合評分。PI3K、A KT、bcl-2三個指標的著色均在細胞質(zhì)。(1)按染色強度評分:無顯色為0分,淺黃色為1分,棕黃色為2分,棕褐色為3分,(2)按陽性細胞的百分比評分:陽性細胞<25%為0分;26%-50%為1分;51%-75%為2分;>75%為3分。最后以兩者乘積的得分值做為判定標準:<4分者為陰性表達,>4分者為陽性表達。Her-2的著色在細胞膜,Her-2/neu結(jié)果判定:0(無染色或少于10%的胞膜染色),+(>10%的細胞有不完整胞膜染色),++(>10%細胞有較弱但完整的胞膜染色),+++(>10%細胞有較強的完整胞膜染色)。0~+視為陰性,++~+++視為陽性。

    4.統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用 SPSS12.0統(tǒng)計軟件包,采用卡方檢驗和 Fisher檢驗,相關(guān)性檢驗用Spearman等級相關(guān)分析處理。

    結(jié) 果

    1 Her-2、PI3K、A KT、bcl-2 在乳腺癌和癌旁組織的表達

    Her-2在乳腺癌和癌旁組織的表達率分別為45.2%和 3.23%,兩者比較有顯著差異性 (P<0.001);PI3K乳腺癌和癌旁組織的表達率分別為90.3%和 64.5%,兩者比較有差異性 (P<0.05);A KT在乳腺癌和癌旁組織的表達率分別為67.7%,和 41.9%,兩者比較有差異性 (P<0.05);bcl-2在乳腺癌和癌旁組織的表達率分別為58.1%和 83.9%,兩者比較有差異性(P<0.05),(表 1)

    2 Her-2、PI3K、A KT、bcl-2 在乳腺癌中的表達與臨床病理指標的關(guān)系

    Her-2、PI3K、A KT、bcl-2的表達均與年齡無相關(guān)性(P>0.05)。Her-2、A KT在乳腺癌中的表達和組織學(xué)分級呈正相關(guān)(P<0.05),bcl-2的表達和組織學(xué)分級呈負相關(guān)(P<0.05),PI3K的表達與組織學(xué)分級無明顯相關(guān)性(P>0.05)。A KT在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時表達率較高,與對照組相比差異有顯著性(P<0.05),bcl-2在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時表達率較低(P<0.05),Her-2、PI3K與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性(P>0.05),(表 2).

    表1 Her-2、PI3K、A KT、bcl-2在乳腺癌和癌旁組織的表達Table 1 Expression of Her-2,PI3K,A KT and bcl-2 in breast cancer and tumor-adjacent tissue

    表2 乳腺癌 Her-2、PI3K、A KT、bcl-2的表達與臨床病理特征的關(guān)系Table 2 Relationship between Her-2,PI3K,A KT,and bcl-2 expressions and clinicoPathological factors

    討 論

    原癌基因 Her-2(C-erbB-2)屬于生長因子受體,主要在胚胎發(fā)育時期表達,它位于17號染色體長臂,編碼糖蛋白,分子量為185kD,成年后在正常組織中呈極少量表達,Her-2高表達時,表現(xiàn)為細胞增殖旺盛,侵襲力強,導(dǎo)致腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移[2]。臨床實踐中有20%~30%乳腺癌可檢測到 Her-2基因擴增,這些Her-2過表達的乳腺癌患者往往表現(xiàn)為生存率低、腫瘤惡性程度高、病情進展迅速、易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。乳腺癌中,高表達的 Her-2通過 PI3/A KT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激活NF-tcB信號通路,可促進腫瘤細胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化[3,4]。對于 Her-2的表達與乳腺癌預(yù)后相關(guān)因素的關(guān)系,報道不一致。Hiroko[5]等對506例乳腺癌組織檢測了 Her-2,并做COX比例風(fēng)險模型單因素和多因素生存分析,結(jié)果顯示 Her-2陽性過表達與乳腺腫瘤大小、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目、預(yù)后不良相關(guān)。胡江輝等[6]在研究乳腺癌激素受體、CerbB-2、P53、nm23基因的表達及與臨床病理特征的關(guān)系中,研究結(jié)果顯示C-erbB-2與臨床分期、腫瘤大小、病理類型、年齡無明顯相關(guān)性,與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤復(fù)發(fā)呈正相關(guān)性。我們的研究結(jié)果顯示Her-2在乳腺癌中的表達顯著高于癌旁組織,Her-2的表達與組織學(xué)分級呈顯著正相關(guān),即惡性程度愈高,其 Her-2的表達愈高,Her-2的表達和患者年齡及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性。

    PI3K家族,是一類特異性地催化磷酯酰肌(phosphatidylinositol,PI)3位羥基磷酸化,產(chǎn)生具有第二信使作用的肌醇脂物質(zhì)的激酶。上游因子多種刺激均可導(dǎo)致PI3K的活化,PI3K進而激活3-磷酸肌醇依賴性蛋白激酶-1(PDK1)和3-磷酸肌醇依賴性蛋白激酶-2(PDK2),引起下游靶基因的變化。Her-2的激活可以活化三磷酸肌醇激酶(PI3K),進而激活A(yù) KT,A KT激活后很快從質(zhì)膜內(nèi)側(cè)解離并重新迅速進入核內(nèi)[7,8],參與了惡性腫瘤的形成,例如細胞轉(zhuǎn)化和腫瘤的浸潤。近來有研究表明,PI3K在許多腫瘤細胞株中和細胞的轉(zhuǎn)化和增殖有關(guān),包括乳腺癌、髓細胞性白血病,AIDS相關(guān)的kapposi肉瘤、肝細胞癌以及前列腺癌。在結(jié)腸癌中也檢測出PI3K蛋白的表達水平增高。高建軍等[9]的研究表明,PI3K在乳腺癌組織中陽性表達率與正常乳腺組織及良性乳腺瘤相比較有明顯差異,在乳腺良性腫瘤與正常乳腺組織中陽性表達率無明顯差異,PI3K蛋白的陽性表達率與乳腺癌大小及組織學(xué)分級不相關(guān),但與臨床 TNM分期、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。我們通過對乳腺癌中PI3K的檢測發(fā)現(xiàn),PI3K在乳腺癌中的表達高于癌旁組織,與張英等[10]研究結(jié)果一致,說明PI3K在乳腺癌中被活化,為乳腺癌信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的重要元件。PI3K的表達與患者年齡,組織學(xué)分級以及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性。以上結(jié)果提示我們PI3K與乳腺癌的發(fā)生有關(guān),與乳腺癌的預(yù)后并無明顯相關(guān)性。

    A KT,又稱蛋白激酶B(PKB),通過血小板白細胞C激酶同源區(qū)和PIP3結(jié)合,并通過磷脂酰肌醇依賴性激酶1,2(PDK1、PDK2)使第308位上的蘇氨酸位點(Thr308)和第473位上的絲氨酸位點(Ser473)磷酸化而被激活。A KT通過磷酸化mTOR,P21Cip1/WAF1,GSK3,TSC2,Foxo家族等多種作用底物,促進腫瘤細胞的生長、增殖,抑制細胞凋亡,促進細胞侵襲和轉(zhuǎn)移。A KT參與了多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展,在乳腺癌,膽囊導(dǎo)管腺癌,結(jié)腸癌,卵巢癌,胰腺癌,前列腺癌中都檢測出了A KT的過表達。孫麗梅等[11]檢測260例乳腺癌患者中A KT的表達情況,研究顯示A KT表達和腫瘤大小相關(guān),腫瘤體積越大A KT陽性表達率越高,A KT在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中高表達,且隨著淋巴結(jié)的數(shù)目增多A KT表達越來越高,說明A KT的表達和腫瘤細胞增殖能力有一定的關(guān)系,激活的A KT會失去對腫瘤細胞增殖、分化的正常調(diào)控[12],說明激活的A KT在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及浸潤和轉(zhuǎn)移中具有重要的角色。我們的結(jié)果亦顯示出A KT的表達在乳腺癌組織中的表達明顯高于癌旁組織,A KT的表達和年齡無明顯相關(guān)性,與組織學(xué)分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有明顯相關(guān)性,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性的A KT的表達遠遠高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性的患者。提示我們A KT的高表達在乳腺癌的惡性轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移方面可能起到了重要的作用。

    bcl-2是目前公認的抗凋亡因子,有關(guān)bcl-2基因與乳腺癌的關(guān)系目前結(jié)論仍然不一致。Leek等[13]報道,bcl-2基因表達與乳腺癌腫瘤大小,臨床病理學(xué)分期及預(yù)后無關(guān)。Bhargava等[14]研究表明,bcl-2基因表達與乳腺癌細胞分化程度呈正相關(guān)。吳炅[15]發(fā)現(xiàn)bcl-2蛋白表達與腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、組織學(xué)分級、術(shù)后局部復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移均呈正相關(guān)。本研究結(jié)果表明,bcl-2在乳腺癌旁組織的表達高于在乳腺癌中的表達,與Nadler等[16]的結(jié)果基本一致,Nadler等認為,bcl-2不僅抑制細胞凋亡,而且還延長細胞周期由此延緩腫瘤細胞增殖,因此bcl-2基因高表達時,其總的結(jié)果與較好的病理生物學(xué)行為有關(guān)。我們的結(jié)果顯示bcl-2的表達與年齡無明顯相關(guān)性,其表達隨著腫瘤細胞分化程度增高而增高,無轉(zhuǎn)移組和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組相比表達高。

    近年來,對于對PI3K/A KT通路的研究還有很多問題,尤其在PI3K/A KT和其他信號通路間的相互作用與乳腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系上。探討乳腺癌中PI3K/A KT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中各蛋白的變化規(guī)律以及和臨床相關(guān)指標的關(guān)系,提示我們檢測上述四種蛋白對判定乳腺癌生物學(xué)行為、預(yù)后和指導(dǎo)治療具有重要意義。

    [1]Amundadottrirl L,Leder P.Signal transduction pathways activated and required for mammary carcinogenesis in re and required for mammary carcinogenesis in response to specific oncogenes,Oncogene,1998,16(6):737-746

    [2]Lian J,Li Li,Sun R.Correlation of Ki67、C-erbB-2 and VEGF expression in breast cancer and their clinical significanc.Shanxi Med Univ,2009,40(2):125-127

    [3]Rohan TE,Li SQ,Hartwick R,et a1.p53 alterations and protein accmulation in benign breast tissue and breast cancer risk:acohort study.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,2006,15(7):1316-1323

    [4]Li-Ning-T E,Ronchetti R,To rres-Cabala C,et a1.Role of chromo.genic in situ hybridization(CISH)in the evaluation of HER2 status in breast carcinoma:comparison with immunohistochemistry and FISH.Int J Surg Pathol,2005,13(4):343-351

    [5]Hiroko Yamashita,Marika Nishio,Tatsuya Toyama,et al.coexistance of HER-2 expression and p53 protein accumulation is a strong progonostic molecular marker in breast cancer.Breast Cancer Res,2004,6(1)24-30

    [6]胡江輝,趙文健,謝開紅,等.乳腺癌激素受體、C-erbB-2、P53、nm23基因的表達及與臨床病理特征的關(guān)系.實用醫(yī)技雜志,2007,14(19):2532-2533

    [7]Datta SR,Brunet A,Greenberg ME.Cellular suvival:A play in three AKTs. Genes Dev,1999 ,13(22):2905-2927

    [8]Downward J.Mechanisms and consequences of activation of proteinkinaseB P-AKT.Curr Opin Cell Biol,1998,10(2):262-267

    [9]高建軍,徐守森,劉 杰等.磷酯酰肌醇3激酶在乳腺癌中的表達及意義.醫(yī)學(xué)綜述,2010,16(5):773-775

    [10]張英,宋敏,米小軼,等.磷酯酰肌醇32激酶在人乳腺癌中的活化.癌癥,2002,21(5):489-492

    [11]孫麗梅,王魯建,宋敏,等.乳腺癌信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中Akt的激活及意義.中華腫瘤防治雜志,2006,13(16)1232-1234

    [12]Kim H J,Cu iX,Hilsenbeck S G,et al.Progesterone ReceptorLoss Correlates with Human Epidermal Growth Factor Receptor Overexpress ion in Estrogen Receptor Positive Breast Cancer.ClinCancer Res,2006,12(3):1013-1018

    [13]Leek RD,Kaklamanis L ,Pezzella FC,et al.bcl-2 in normal human breast and carcinoma,association with oestrogen receptor-positive,epidermal growth factor receptor-negative tumors and in situ cancer.Br J Cancer,1994,69(1):135

    [14]Bhargava V,Kell DL,Van-de-Rijn M,et al.bcl-2 immunoreactivity in breast carcinomacorrelates with hormone receptor positivity.Am J Pathol,1994,145:535

    [15]吳炅,陸勁松,邵志敏,等.凋亡相關(guān)基因 bcl-2基因族在乳腺癌中的預(yù)后作用.上海醫(yī)科大學(xué)學(xué)報.1999,26(3)165-168

    [16]Nadler Y,Camp RL,Giltnane JM,et al.Expression patterns andprognostic value of Bag-1 and Bcl-2 in breast cancer.Breast Cancer Res,2008,10(2):35

    圖 版 說 明

    圖A Her-2在乳腺癌中的強陽性表達(SP×200)

    圖B PI3K在乳腺癌中的強陽性表達(SP×200)

    圖C AKT在乳腺癌中的強陽性表達(SP×200)

    圖D bcl-2在癌旁組織中的強陽性表達(SP×200)

    EXPLANATION OF FIGURES

    Fig.A Intense positive expression ofHer-2 in the breast cancer(SP×200)

    Fig.B Intense positive expression of PI3K in the breast cancer(SP×200)

    Fig.C Intense positive expression of AKT in the breast cancer(SP×200)

    Fig.D Intense positive expression of bcl-2 in the tumor-adjacent tissue(SP×200)

    Exepression of PI3K/AKT signaling transduction associated proteins in breast cancer

    Gong Xiaomeng,Wang Liming1*

    (Department ofPathology,Bengbu Medical College,The f irst A f f iliated Hospital of Bengbu Medical Collge,Bengbu233030;1The f ourth people’shospital of Bengbu,A nhui233000,China)

    Objective To investigate the expressions of Her-2,PI3K,A KT,bcl-2 in breast cancer and their relevance with the clinical characteristics and prognosis o f breast cancer.Methods The expression of Her-2,PI3K,A KT and bcl-2 in 31 cases of breast cancers and non-neoplastic breast tissue was determined using SP method of immunohistochemistry.Results The expression of Her-2,PI3K,A KT protein in breast cancer were 45.2%,90.3%,67.7%respectively,as compared with that in noneplastic breast tissue(P<0.05),while the expressions of bcl-2 protein were 58.1%in breast cancer and 83.9%in noneplastic breast tissue,(P<0.05). The expression of Her-2,PI3K,A KT and bcl-2 protein did not correlate with age(P>0.05). positive correlation was found between the expression of Her-2,A KT and histological grade(P<0.05),while negative correlation was found between the expression of bcl-2 and histological grade(P<0.05). No correlation was found between the expression of PI3K and histological grade(P>0.05). The expression of A KT was higher in lymphnode metastasis than that in non lymphnode metastasis,and the difference was siganificant(P<0.05).while the expression of bcl-2 in lymphnode metastasis was lower than that in non lymphnode metastasis.No correlation was found between expression of expression of Her-2,PI3K and lymphnode metastasis(P>0.05).Conclusion overexpression of Her-2 and A KT and low expression of bcl-2 may contribute to genesis and progression of breast cancer,detection of Her-2,A KT and bcl-2 may be useful in evaluation of the aggressiveness of breast cancer,and helpful to judge the prognosis of breast cancer.

    Breast neoplasm; PI3K; A KT; Immunohistochemistry

    R329

    A

    10.3870/zgzzhx.2011.02.017

    2010-10-10

    2010-11-01

    安徽省高校青年基金(2007jq1133)

    龔曉萌,女(1975年),漢族,講師。

    *通訊作者(To whom correspondence should be addressed)

    猜你喜歡
    組織學(xué)激酶分級
    蚓激酶對UUO大鼠腎組織NOX4、FAK、Src的影響
    蚓激酶的藥理作用研究進展
    張帆:肝穿刺活體組織學(xué)檢查
    肝博士(2021年1期)2021-03-29 02:32:08
    分級診療路難行?
    分級診療的“分”與“整”
    泌尿系統(tǒng)組織學(xué)PBL教學(xué)模式淺析
    黏著斑激酶和踝蛋白在黏著斑合成代謝中的作用
    HBV相關(guān)肝癌組織HBsAg和HNF4α表達及其與組織學(xué)分化的關(guān)系
    分級診療的強、引、合
    “水到渠成”的分級診療
    制服诱惑二区| 国产精品二区激情视频| 999精品在线视频| 亚洲综合色网址| 女性生殖器流出的白浆| 亚洲成人一二三区av| 国产成人免费无遮挡视频| 色婷婷av一区二区三区视频| 欧美人与善性xxx| 性色av一级| 欧美国产精品一级二级三级| 婷婷色麻豆天堂久久| 国产一区二区激情短视频 | 欧美日韩亚洲高清精品| 美国免费a级毛片| 免费在线观看黄色视频的| 久久久国产精品麻豆| 99久久人妻综合| 精品国产国语对白av| 一级毛片 在线播放| 国产男女超爽视频在线观看| 午夜精品国产一区二区电影| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| av又黄又爽大尺度在线免费看| 满18在线观看网站| 两个人免费观看高清视频| 亚洲三区欧美一区| 亚洲色图综合在线观看| 操出白浆在线播放| 黄色视频不卡| 另类亚洲欧美激情| 亚洲欧美一区二区三区国产| 777米奇影视久久| 极品人妻少妇av视频| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 亚洲,欧美,日韩| 久久亚洲国产成人精品v| 国产日韩欧美在线精品| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲色图综合在线观看| 久久精品亚洲av国产电影网| 下体分泌物呈黄色| 老鸭窝网址在线观看| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 99re6热这里在线精品视频| av国产久精品久网站免费入址| 精品国产乱码久久久久久男人| 在线 av 中文字幕| 这个男人来自地球电影免费观看 | 热99久久久久精品小说推荐| 亚洲 欧美一区二区三区| 久久99一区二区三区| 国产成人一区二区在线| tube8黄色片| 丝袜在线中文字幕| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 91精品伊人久久大香线蕉| 中文字幕色久视频| 欧美精品一区二区免费开放| 最近中文字幕2019免费版| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 九九爱精品视频在线观看| 久久久久精品性色| av国产久精品久网站免费入址| 国产高清国产精品国产三级| 最新在线观看一区二区三区 | 精品亚洲乱码少妇综合久久| 下体分泌物呈黄色| 卡戴珊不雅视频在线播放| 最近最新中文字幕免费大全7| 亚洲天堂av无毛| 亚洲成国产人片在线观看| 性少妇av在线| 亚洲成人国产一区在线观看 | 亚洲美女搞黄在线观看| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 赤兔流量卡办理| 熟妇人妻不卡中文字幕| 久久久久精品性色| 美女福利国产在线| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 国产成人欧美在线观看 | 成人毛片60女人毛片免费| 免费黄网站久久成人精品| www.精华液| 香蕉丝袜av| 欧美日韩亚洲高清精品| 激情五月婷婷亚洲| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 久热爱精品视频在线9| 日韩精品有码人妻一区| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 一二三四中文在线观看免费高清| 男的添女的下面高潮视频| 精品亚洲成a人片在线观看| 天美传媒精品一区二区| 色精品久久人妻99蜜桃| av在线app专区| 国产精品女同一区二区软件| 夫妻午夜视频| 国产成人欧美在线观看 | 国产片特级美女逼逼视频| 精品少妇久久久久久888优播| 国产激情久久老熟女| www.熟女人妻精品国产| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 色吧在线观看| 女人精品久久久久毛片| 色婷婷av一区二区三区视频| 极品人妻少妇av视频| 日本wwww免费看| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 国产精品人妻久久久影院| 视频区图区小说| 最近最新中文字幕免费大全7| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 纯流量卡能插随身wifi吗| 人妻人人澡人人爽人人| 午夜福利视频精品| 日日爽夜夜爽网站| 嫩草影院入口| 精品国产国语对白av| 一级毛片我不卡| av电影中文网址| 99久久99久久久精品蜜桃| 午夜福利视频精品| a 毛片基地| 在线观看www视频免费| 久久久久久人妻| 午夜精品国产一区二区电影| 婷婷色av中文字幕| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 一区二区三区激情视频| 国产乱来视频区| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲成人一二三区av| 久久久精品区二区三区| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 97人妻天天添夜夜摸| 黄色视频在线播放观看不卡| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲熟女毛片儿| 亚洲精品在线美女| 悠悠久久av| 亚洲精品国产av蜜桃| 18禁观看日本| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 欧美 日韩 精品 国产| 极品少妇高潮喷水抽搐| 美女中出高潮动态图| 午夜免费男女啪啪视频观看| 国产精品二区激情视频| 国产成人精品福利久久| 女人久久www免费人成看片| 波野结衣二区三区在线| 久久99一区二区三区| 制服诱惑二区| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 精品国产一区二区久久| 亚洲av福利一区| av一本久久久久| 精品一区二区三区av网在线观看 | av网站免费在线观看视频| 久久99一区二区三区| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 午夜福利网站1000一区二区三区| 51午夜福利影视在线观看| 精品免费久久久久久久清纯 | 久久青草综合色| 久久 成人 亚洲| 中文字幕高清在线视频| 9191精品国产免费久久| 热re99久久国产66热| 丝袜美足系列| 国产免费一区二区三区四区乱码| 高清不卡的av网站| 国精品久久久久久国模美| 亚洲色图综合在线观看| 中文字幕av电影在线播放| 久久韩国三级中文字幕| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 亚洲,一卡二卡三卡| 看免费av毛片| 中文字幕av电影在线播放| 久久国产亚洲av麻豆专区| 综合色丁香网| 天堂8中文在线网| 久久久久久久久免费视频了| 国产成人av激情在线播放| 在线观看国产h片| 黄片播放在线免费| 国产精品女同一区二区软件| 看免费av毛片| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲,一卡二卡三卡| 午夜日韩欧美国产| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 人妻人人澡人人爽人人| 亚洲自偷自拍图片 自拍| av女优亚洲男人天堂| 国产精品99久久99久久久不卡 | 性高湖久久久久久久久免费观看| 成人免费观看视频高清| 天天添夜夜摸| 国产av精品麻豆| 日韩av不卡免费在线播放| 99精品久久久久人妻精品| 亚洲欧洲国产日韩| 国产精品 国内视频| 在线精品无人区一区二区三| 无遮挡黄片免费观看| 国产又色又爽无遮挡免| 婷婷色av中文字幕| 热99国产精品久久久久久7| 久久热在线av| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 最黄视频免费看| 国产成人精品无人区| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 天天添夜夜摸| 五月开心婷婷网| 大陆偷拍与自拍| 国产精品 国内视频| 视频区图区小说| 爱豆传媒免费全集在线观看| 在线观看国产h片| netflix在线观看网站| 亚洲精品第二区| 国产亚洲一区二区精品| 新久久久久国产一级毛片| 午夜免费男女啪啪视频观看| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 美女高潮到喷水免费观看| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 69精品国产乱码久久久| 少妇的丰满在线观看| 日本av手机在线免费观看| 一级毛片我不卡| 国产精品一二三区在线看| 国产亚洲一区二区精品| 日韩视频在线欧美| 亚洲精品美女久久av网站| 波多野结衣一区麻豆| 久久久久人妻精品一区果冻| 亚洲精品成人av观看孕妇| 久热这里只有精品99| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 美女扒开内裤让男人捅视频| 免费日韩欧美在线观看| 亚洲熟女毛片儿| 丝袜喷水一区| 久久鲁丝午夜福利片| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产精品国产三级专区第一集| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| √禁漫天堂资源中文www| 啦啦啦在线免费观看视频4| www日本在线高清视频| 久久久国产欧美日韩av| 天天添夜夜摸| 成人国产av品久久久| 国产精品欧美亚洲77777| 中文字幕最新亚洲高清| 国产成人免费观看mmmm| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 日本黄色日本黄色录像| 日韩电影二区| 亚洲欧美激情在线| 一级毛片我不卡| 亚洲一区中文字幕在线| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲免费av在线视频| 街头女战士在线观看网站| 国产精品偷伦视频观看了| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产精品二区激情视频| 日本欧美视频一区| 国产深夜福利视频在线观看| 狂野欧美激情性bbbbbb| 嫩草影院入口| 看免费av毛片| 久久久久精品国产欧美久久久 | 亚洲国产看品久久| 在线观看免费视频网站a站| 精品酒店卫生间| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| bbb黄色大片| 午夜激情久久久久久久| 日本爱情动作片www.在线观看| 99久国产av精品国产电影| 一边摸一边做爽爽视频免费| 亚洲少妇的诱惑av| 国产精品国产av在线观看| 国产精品av久久久久免费| 国产黄频视频在线观看| 狂野欧美激情性xxxx| 人人澡人人妻人| 久久久久网色| 老熟女久久久| 午夜福利,免费看| 在线看a的网站| 午夜老司机福利片| 欧美精品av麻豆av| 亚洲国产最新在线播放| 天堂俺去俺来也www色官网| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 黄色一级大片看看| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 少妇人妻久久综合中文| 国产片特级美女逼逼视频| 亚洲精品一区蜜桃| 最近中文字幕2019免费版| 波多野结衣一区麻豆| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 性少妇av在线| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产 精品1| 伊人久久国产一区二区| kizo精华| 亚洲一码二码三码区别大吗| 精品一区二区免费观看| xxxhd国产人妻xxx| 韩国av在线不卡| 国产一卡二卡三卡精品 | 亚洲熟女精品中文字幕| 久久久久久久久免费视频了| 亚洲精品国产区一区二| 99re6热这里在线精品视频| 久久精品亚洲av国产电影网| 国产亚洲最大av| 九色亚洲精品在线播放| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | videosex国产| 中文字幕人妻熟女乱码| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产黄色视频一区二区在线观看| 午夜影院在线不卡| 丝袜美腿诱惑在线| 国产精品秋霞免费鲁丝片| av在线播放精品| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产av一区二区精品久久| 大话2 男鬼变身卡| 亚洲美女黄色视频免费看| 欧美日韩福利视频一区二区| 少妇人妻 视频| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 街头女战士在线观看网站| 波多野结衣一区麻豆| 日本一区二区免费在线视频| av片东京热男人的天堂| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 成人手机av| 国产成人免费观看mmmm| 国产激情久久老熟女| 天堂8中文在线网| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 丝袜脚勾引网站| 午夜精品国产一区二区电影| 一级爰片在线观看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 日韩制服骚丝袜av| 高清欧美精品videossex| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 久久精品国产亚洲av高清一级| 成年女人毛片免费观看观看9 | 国产精品久久久人人做人人爽| 十八禁人妻一区二区| 丰满迷人的少妇在线观看| 飞空精品影院首页| 亚洲欧美成人精品一区二区| 成人手机av| 看免费av毛片| 久久精品国产a三级三级三级| 90打野战视频偷拍视频| 一本色道久久久久久精品综合| 久久久久网色| 国产午夜精品一二区理论片| 成人手机av| 欧美国产精品va在线观看不卡| 黄片小视频在线播放| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 老司机深夜福利视频在线观看 | av网站在线播放免费| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 1024香蕉在线观看| 超色免费av| av在线播放精品| 久久人人97超碰香蕉20202| 老汉色av国产亚洲站长工具| 精品国产乱码久久久久久小说| 午夜福利视频精品| 新久久久久国产一级毛片| 制服丝袜香蕉在线| 一级片'在线观看视频| 黄色视频在线播放观看不卡| 成年动漫av网址| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 国产精品亚洲av一区麻豆 | av有码第一页| 精品一区二区免费观看| 亚洲综合精品二区| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 男女下面插进去视频免费观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 少妇人妻精品综合一区二区| 黄片小视频在线播放| 免费在线观看黄色视频的| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 在线观看人妻少妇| 成人毛片60女人毛片免费| 伦理电影免费视频| 免费黄色在线免费观看| 在线精品无人区一区二区三| 日本wwww免费看| av不卡在线播放| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲人成电影观看| 91老司机精品| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 午夜福利免费观看在线| 久久久久网色| 日韩精品免费视频一区二区三区| 一区二区av电影网| 我要看黄色一级片免费的| 国产免费又黄又爽又色| 电影成人av| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 97在线人人人人妻| 亚洲av欧美aⅴ国产| 国产精品女同一区二区软件| 久久久久久人人人人人| 亚洲人成77777在线视频| 日韩中文字幕视频在线看片| 9热在线视频观看99| 男女床上黄色一级片免费看| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 高清欧美精品videossex| 一区二区日韩欧美中文字幕| 街头女战士在线观看网站| netflix在线观看网站| 精品一区二区三卡| 亚洲精品,欧美精品| 国产成人a∨麻豆精品| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 亚洲国产欧美一区二区综合| 色视频在线一区二区三区| www.自偷自拍.com| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国产精品一区二区精品视频观看| 国产xxxxx性猛交| 国产黄色免费在线视频| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲欧美色中文字幕在线| 亚洲av中文av极速乱| 丁香六月欧美| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲精品,欧美精品| 亚洲欧美一区二区三区久久| 欧美变态另类bdsm刘玥| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 1024香蕉在线观看| 视频区图区小说| 国产精品久久久久久精品电影小说| 男女床上黄色一级片免费看| 少妇的丰满在线观看| 国产日韩欧美视频二区| 99国产综合亚洲精品| 国产成人啪精品午夜网站| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 免费av中文字幕在线| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 亚洲第一区二区三区不卡| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 高清欧美精品videossex| 亚洲国产看品久久| 看非洲黑人一级黄片| 国产片特级美女逼逼视频| 男女床上黄色一级片免费看| 中国三级夫妇交换| 国产成人欧美| 国产成人精品久久久久久| 天美传媒精品一区二区| 一级爰片在线观看| 婷婷色综合大香蕉| 男人爽女人下面视频在线观看| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 国产亚洲欧美精品永久| 婷婷色av中文字幕| 国产成人精品无人区| 国精品久久久久久国模美| 久久狼人影院| 视频区图区小说| 在线免费观看不下载黄p国产| 免费高清在线观看日韩| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 精品视频人人做人人爽| 亚洲国产av影院在线观看| 久久久久久免费高清国产稀缺| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产精品久久久av美女十八| 精品久久久久久电影网| 久久久久久人妻| av免费观看日本| 韩国av在线不卡| 纵有疾风起免费观看全集完整版| netflix在线观看网站| 欧美黄色片欧美黄色片| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 97在线人人人人妻| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 欧美黑人精品巨大| 精品国产乱码久久久久久小说| 久久久久精品性色| 女性生殖器流出的白浆| 久久影院123| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 日韩精品有码人妻一区| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 免费高清在线观看日韩| 校园人妻丝袜中文字幕| 午夜福利一区二区在线看| 久久久久视频综合| av线在线观看网站| 免费观看a级毛片全部| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 亚洲国产欧美一区二区综合| av国产久精品久网站免费入址| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 操美女的视频在线观看| 日韩一区二区三区影片| 母亲3免费完整高清在线观看| 老司机深夜福利视频在线观看 | 精品一区二区三区av网在线观看 | 欧美日韩av久久| 天堂中文最新版在线下载| 日韩免费高清中文字幕av| 啦啦啦 在线观看视频| 丰满迷人的少妇在线观看| 欧美黑人精品巨大| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 搡老岳熟女国产| 国产男人的电影天堂91| 嫩草影视91久久| 日本一区二区免费在线视频| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 丝袜脚勾引网站| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 久久久久视频综合| 久久精品国产a三级三级三级| 久久这里只有精品19| 国产爽快片一区二区三区| 国产精品一国产av| 青春草国产在线视频| 日本av免费视频播放| 激情视频va一区二区三区| 日韩av在线免费看完整版不卡| 老司机在亚洲福利影院| 欧美在线一区亚洲| 老司机亚洲免费影院| 亚洲av电影在线进入| 国产免费视频播放在线视频| 成年人免费黄色播放视频| 久久久久人妻精品一区果冻| 1024香蕉在线观看| 中国国产av一级| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产视频首页在线观看| 亚洲第一av免费看| 中文字幕色久视频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产男人的电影天堂91| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 各种免费的搞黄视频| 一个人免费看片子| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 亚洲精品第二区| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 夜夜骑夜夜射夜夜干| 国产熟女欧美一区二区| 最近手机中文字幕大全| 叶爱在线成人免费视频播放| 日韩欧美精品免费久久| 99精国产麻豆久久婷婷| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 国产有黄有色有爽视频| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 欧美人与性动交α欧美软件| 亚洲一码二码三码区别大吗| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 伊人亚洲综合成人网| 久久人人爽人人片av| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 欧美 日韩 精品 国产| 视频区图区小说| 男女午夜视频在线观看| 中文字幕色久视频| 欧美变态另类bdsm刘玥| av一本久久久久| 国产成人午夜福利电影在线观看| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 日本欧美视频一区| 一区二区av电影网| 国产日韩欧美亚洲二区|