• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定水產(chǎn)品中6種獸藥殘留

    2011-10-28 07:32:00李曉玉郭海霞婁喜山
    食品科學(xué) 2011年10期
    關(guān)鍵詞:甲氧吡喹沙星

    隋 濤,付 建,李曉玉,郭海霞,婁喜山

    (1.煙臺出入境檢驗檢疫局,山東 煙臺 264000;2.煙臺杰科檢測服務(wù)有限公司,山東 煙臺 265231)

    超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定水產(chǎn)品中6種獸藥殘留

    隋 濤1,付 建2,李曉玉1,郭海霞2,婁喜山2

    (1.煙臺出入境檢驗檢疫局,山東 煙臺 264000;2.煙臺杰科檢測服務(wù)有限公司,山東 煙臺 265231)

    采用液液萃取的前處理方式,以超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)檢測水產(chǎn)品中萘啶酸、泰妙菌素、甲氧芐胺嘧啶、二氟沙星、氟甲砜霉素和吡喹酮的殘留量。水產(chǎn)品經(jīng)過勻質(zhì),乙腈提取并沉淀蛋白,正己烷去除脂肪,UPLC-MS/MS進行檢測,在6min內(nèi)完成分離。在5~200μg/L范圍內(nèi),相關(guān)系數(shù)R2在0.9977~0.9999之間,具有良好的線性關(guān)系。6種物質(zhì)的檢測限度均為1.0μg/kg,回收率范圍在61.2%~90.5%之間。本方法操作簡單、靈敏度高,可以滿足水產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的的定性定量檢測。

    萘啶酸;泰妙菌素;甲氧芐胺嘧啶;二氟沙星;氟甲砜霉素;吡喹酮;超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜;多反應(yīng)監(jiān)測

    萘啶酸為第一代喹諾酮類抗菌藥物,對大腸埃希菌、克雷伯菌屬、變形桿菌屬、志賀菌屬、沙門菌屬、腸桿菌屬及流感嗜血桿菌的部分菌株具抗菌活性。泰妙菌素是一種雙萜類動物專用抗生素,主要用于防治家畜家禽呼吸系統(tǒng)疾病和動物促生長,是世界十大獸用抗生素之一。甲氧芐胺嘧啶是一種抗菌藥物,抗菌譜與磺胺藥相近,具有抑制二氫葉酸還原酶的作用。二氟沙星是動物用抗菌藥,屬于氟喹諾酮類。氟甲砜霉素是獸用抗菌藥,用于敏感細(xì)菌所致的豬、雞及魚的細(xì)菌性疾病。吡喹酮為一新型廣譜抗寄生蟲藥。結(jié)構(gòu)式見圖1。

    韓國國立水產(chǎn)物品質(zhì)檢查院計劃2010年增加針對水產(chǎn)品的檢測項目,新增抗生素類項目12項,其中包括萘啶酸(nalidixic acid)、吡喹酮(praziquantel)、泰妙菌素(tiamulin)、二氟沙星(difloxacin)、甲氧芐胺嘧啶(trimethoprim)、氟甲砜霉素(florfenicol),在魚類或甲殼類中的限量分別為0.03、0.02、0.1、0.3、0.05、0.1mg/kg。

    從目前文獻(xiàn)和資料方法來看,抗生素類檢測方法的對象局限于單類抗生素在一種或多種基質(zhì)中的殘留[1-5]。本實驗研究的6種獸藥檢測方法也多為單一檢測[6-14],且所用儀器多為液相色譜,定量不夠準(zhǔn)確,靈敏度也不夠高。萘啶酸的檢測尚無相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn),泰妙菌素、甲氧芐胺嘧啶、二氟沙星、氟甲砜霉素、吡喹酮5種藥物雖然分別有相關(guān)的國家標(biāo)準(zhǔn)或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn),但每個項目均為獨立的前處理方法和儀器檢測方法,不能同時、快速分析檢測。分析時間長,成本高,效率非常低,難以有效地對其出口安全性進行監(jiān)控。因此,建立一種可以同時、快速檢測上述藥物的標(biāo)準(zhǔn)方法對人們的身體健康和出口貿(mào)易都有十分重要的意義。

    圖1 6種獸藥的結(jié)構(gòu)式Fig.1 Structures of six veterinary drugs

    本實驗旨在建立快速萃取后進樣同時測定水產(chǎn)品中萘啶酸、泰妙菌素、甲氧芐胺嘧啶、二氟沙星、氟甲砜霉素、吡喹酮的超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法。該法具有可多種獸藥同時分析、操作簡便、測定速度快等優(yōu)點,適應(yīng)目前出口食品的快速通關(guān)檢測工作的需要,也可作為企業(yè)內(nèi)控檢測的標(biāo)準(zhǔn)方法,從而提高企業(yè)出口產(chǎn)品安全性,降低企業(yè)檢測成本。

    1 材料與方法

    1.1 試劑

    乙腈、甲醇(均為色譜純) 德國默克公司;正己烷、甲酸(均為色譜純) 天津科密歐化學(xué)試劑有限公司;水為超純水,乙酸銨為優(yōu)級純。

    6種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(純度):萘啶酸(99.5%)、泰妙菌素(98.5%)、甲氧芐胺嘧啶(99.5%)、二氟沙星(98.4%)、氟甲砜霉素(99.0%)、吡喹酮(99.0%) 德國Dr.Ehrenstorfer公司。

    單標(biāo)儲備液制備:用天平準(zhǔn)確稱取0.0100g標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),用乙腈配制成100mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液,4℃避光保存。

    混合標(biāo)準(zhǔn)工作液的制備:準(zhǔn)確移取一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液置于容量瓶中,用乙腈與水混合溶液(4:6,V/V)定容至刻度線,逐級稀釋成2、5、10、25、50、100 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作混合液,于4℃條件下保存。

    1.2 儀器與設(shè)備

    超高效液相色譜儀UPLC、Premier四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀 美國Waters公司;Rios 8超純水儀 美國Millipore公司;T18均質(zhì)器 德國IKA公司;N-1100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 日本東京理化器械株式會社;DL-5C離心機 上海安亭科學(xué)儀器廠;孔徑0.22μm 的濾膜。

    1.3 樣品處理

    稱取5.00g勻質(zhì)后的樣品、5g無水硫酸鈉,置于50mL離心管中,加入20mL乙腈,振蕩提取10min,4000r/min離心5min,上清液轉(zhuǎn)移至125mL分液漏斗中,殘渣中加入20mL乙腈,再次提取1次,合并上清液至分液漏斗中。向分液漏斗中20mL乙腈飽和的正己烷溶液,混合均勻,靜置分層,分取乙腈層至茄形瓶中。40℃水浴條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干,準(zhǔn)確加入1mL乙腈-水(4:6,V/V)混合溶液和1mL乙腈飽和正己烷,超聲使其完全溶解,將溶液轉(zhuǎn)移至2.0mL小離心管中,12000r/min高速離心10min。吸取下層過0.22μm的濾膜。待檢測。

    1.4 超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析

    1.4.1 色譜條件

    表1 流動相梯度洗脫程序Table 1 Gradient elution program

    色譜柱:Waters ACQUITY UPLC HSS T3(2.1mm×100mm,1.8μm);流動相:甲醇-5mmol/L 乙酸銨溶液(0.1%甲酸),梯度洗脫程序見表1; 流速:0.25mL/min;柱溫35℃;進樣量:3μL。首先用一個等梯度洗脫程序,觀察每一種化合物出峰的出峰順序,后確定一個較為粗略的梯度洗脫程序,通過不斷優(yōu)化和實驗最終確定一個最佳的梯度洗脫程序。

    1.4.2 質(zhì)譜條件

    采用ESI離子源;掃描方式:由于氟甲砜霉素含有電負(fù)性較強的氯基團,因此確定為負(fù)離子掃描,萘啶酸、泰妙菌素、甲氧芐胺嘧啶、二氟沙星、吡喹酮為正離子掃描;正離子模式下毛細(xì)管電壓:3.0kV,負(fù)離子模式下毛細(xì)管電壓為2.6kV;離子源溫度:110℃;脫溶劑溫度:350℃。首先對每一種標(biāo)準(zhǔn)品的單標(biāo)進行蠕動進樣,通過分別界定母離子和子離子的掃描范圍進行全掃描以確定母離子和子離子對的準(zhǔn)確值,然后分別通過改變不同的錐孔電壓和碰撞能值使化合物的出峰靈敏度達(dá)到最高以使錐孔電壓和碰撞能值達(dá)到最優(yōu)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 質(zhì)譜分析與方法定性

    分別將6種5mg/L的單獨標(biāo)準(zhǔn)溶液以蠕動泵進樣的方式注入到質(zhì)譜中,萘啶酸、泰妙菌素、甲氧芐胺嘧啶、二氟沙星、吡喹酮在ESI+方式下進行一級質(zhì)譜全掃描分析,可以找到準(zhǔn)確的[M+H]+分子離子峰。氟甲砜霉素在ESI+方式下離子化強度遠(yuǎn)弱于ESI-,因此氟甲砜霉素選擇在ESI-方式下進行MRM分析。用daughterscan 方式對子離子及碰撞能量進行優(yōu)化。

    2.2 色譜條件的選擇

    2.2.1 色譜柱的選擇

    本研究選用適用于Acquity UPLC的3種專用反相色譜柱,在其他質(zhì)譜與液相條件相同的情況下,比較各色譜柱對6種物質(zhì)的保留情況、靈敏度、峰形等。3種色譜柱規(guī)格為:Waters ACQUITY UPLC HSS T3 Column(2.1mm×100mm,1.8μm) (簡寫:T3);Waters ACQUITY SHIELD RP18 Column(2.1mm×100mm,1.7μm)(簡寫:RP);Waters ACQUITY UPLC BEH C18Column (2.1mm×100mm,1.7μm) (簡寫:C18) 。

    表2 6種獸藥的UPLC-MS/MS儀器參數(shù)Table 2 LC-ESIMS/MS parameters for 6 veterinary drugs

    圖2 6種獸藥不同色譜柱下的色譜圖Fig.2 Chromatographic plots of six veterinary drugs separated by column

    從圖2可以看出,RP柱與C18柱的分離度相似,T3柱對甲氧芐胺嘧啶、吡喹酮的保留性要明顯優(yōu)于RP柱和C18柱。靈敏度由大到小排序為:T3>RP>C18。所以最終選擇Waters ACQUITY UPLC HSS T3 Column為樣品分析柱。

    2.2.2 流動相的選擇

    流動相中使用緩沖鹽(乙酸銨)可以增加6種物質(zhì)的保留性;加入適當(dāng)?shù)募姿峥梢源偈够衔镫婋x,提高靈敏度。甲醇與乙腈相比,極性較弱,同樣流動相梯度條件下,使用甲醇時,目標(biāo)物的保留時間靠后;同時甲醇為質(zhì)子化試劑,用甲醇做流動相,目標(biāo)物的離子化程度高,靈敏度相對也高,記過顯示:用甲醇做流動相目標(biāo)物的峰面積是乙腈做流動相時的2倍。因此選擇甲醇-5mmol/L乙酸銨溶液(含體積分?jǐn)?shù)0.1%甲酸)作為流動相。

    2.2.3 前處理條件的選擇

    本研究旨在快速同時分析這6種物質(zhì),因此前處理時間也是一個重要的控制點。本研究舍棄了SPE凈化手段,選擇了耗時少、分析成分低的液液萃取凈化方式。用乙腈提取樣本中的目標(biāo)物,同時達(dá)到沉淀蛋白的目的;采用正己烷與乙腈液液分配去除脂肪和脂溶性雜質(zhì);定容后再用乙腈飽和正己烷去一次油脂,同時12000r/min以上高速離心,去除大分子雜質(zhì)。

    實驗結(jié)果表明,定溶液中加入甲酸會影響氟甲砜霉素的靈敏度,響應(yīng)面積約降低1倍,最終定容液未加酸。

    2.3 方法性考察

    表3 6種獸藥的線性范圍、線性方程及相關(guān)系數(shù)Table 3 Linear ranges, regression equations and related coefficients for 6 veterinary drugs

    6種獸藥線性考察見表3。在6min內(nèi)完成分離。在5~200μg/L的質(zhì)量濃度范圍內(nèi),相關(guān)系數(shù)R2在0.9977~0.9999之間,具有良好的線性關(guān)系。

    向馬哈魚、鲅魚、海鋪蝦空白樣品中添加3個水平的6種混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,按1.3節(jié)方法做回收率實驗。每個添加水平重復(fù)6次,計算添加回收率和結(jié)果相對標(biāo)準(zhǔn)偏差,結(jié)果見表4。根據(jù)RSN≥10作為檢出限,6種物質(zhì)的檢測限度均為1.0μg/kg,回收率范圍在61.2%~90.5%之間。

    表4 方法的加標(biāo)回收率Table 4 Recovery rates of spiked samples

    3 結(jié) 論

    本研究采用乙腈提取目標(biāo)物并沉淀蛋白、正己烷去除脂溶性雜質(zhì),可基本排除水產(chǎn)品基質(zhì)對離子化的影響;采用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀進行檢測,靈敏度高、定性定量準(zhǔn)確。與普通液相色譜相比,定性和定量更加準(zhǔn)確,通過不同檢測人員對陽性結(jié)果進行復(fù)檢基本可以排除假陽性的錯誤結(jié)果。而且大大提高了檢測靈敏度,使得檢測結(jié)果由幾十、幾百ng/g甚至μg/g級提高到1.0ng/g,可以更好的應(yīng)對國外的技術(shù)壁壘。另外,超高效液相色譜(UPLC)與高效液相色譜(HPLC)相比由于具有小顆粒填料、非常低系統(tǒng)體積及快速檢測手段等技術(shù),增加了分析的通量及色譜峰容量,與傳統(tǒng)的HPLC相比,UPLC的速度、靈敏度及分離度分別是HPLC的9倍、3倍及1.7倍。本實驗在5~200 μg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系,6種分析物質(zhì)的檢測限度均為1.0μg/kg,回收率范圍在61.2%~90.5%之間,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均不大于12.5%。本研究能夠滿足快速同時分析水產(chǎn)品中萘啶酸、泰妙菌素、甲氧芐胺嘧啶、二氟沙星、氟甲砜霉素、吡喹酮檢測的需求。

    [1] 中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會. GB/T 20751—2006 鰻魚及制品中十五種喹酮類物殘留量的測定: 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[S]. 2006.

    [2] 劉玉春, 徐維海, 余莉莉, 等. 固相萃取液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用測定河水中大環(huán)內(nèi)酯類抗生素[J]. 分析測試學(xué)報, 2006, 25(2): 1-5.

    [3] 楊成對, 宋莉暉. 家禽肌肉組織中硝基咪唑類藥物殘留的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定[J]. 分析測試學(xué)報, 2006, 25(4): 101-103.

    [4] 劉正才, 楊方, 余孔捷, 等. 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速檢測鰻魚中磺胺類、喹諾酮類、四環(huán)素族抗生素藥物殘留[J]. 食品科學(xué), 2009, 30(4): 167-170

    [5] YE Zhengqi, WEINBERG H S. Trace analysis of trimethop rim and sulfonamide, macrolide, quinolone, and tetracycline antibiotics in chlorinated drinking water using liquid chromatography electrosp ray tandem mass spectrometry[J]. Anal Chem, 2007, 79(3): 135-1144.

    [6] 鄧華, 張海霞, 張勁松, 等. 反相高效液相色譜法同時測定人血漿中的西諾沙星和萘啶酸[J]. 分析化學(xué)研究簡報, 2001, 29(3): 306-308.

    [7] 程林麗, 張素霞, 沈建忠, 等. 高效液相色譜法快速檢測豬組織中泰妙菌素殘留[J]. 分析化學(xué), 2009, 37(5): 718-720.

    [8] 黃雅麗. 固相萃取-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定禽畜和水產(chǎn)品中沃尼妙林和泰妙菌素[J]. 分析實驗室, 2010, 29(1): 103-106.

    [9] 林海丹, 林峰, 吳映璇. 高效液相色譜法測定動物源性食品中甲氧芐氨嘧啶藥物殘留[J]. 檢驗檢疫科學(xué), 2003, 13(5): 5-6.

    [10] 唐才明, 黃秋鑫, 余以義, 等. 污泥和沉積物中微量大環(huán)內(nèi)酯類、磺胺類抗生素、甲氧芐胺嘧啶和氯霉素的測定[J]. 分析化學(xué), 2009,9(8): 1119-1124.

    [11] 李彬彬, 鄧瑞廣, 侯玉澤, 等. 二氟沙星殘留量檢測直接競爭ELISA方法的建立[J]. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報, 2009,17(3): 403-408.

    [12] 李鵬, 邱月明, 蔡慧霞, 等. 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定動物組織中氯霉素、氟甲砜霉素和甲砜霉素的殘留量[J]. 色譜, 2006, 24(1):14-18.

    [13] 吳曉蘋, 王玲, 施點望, 等. 固相萃取-高效液相色譜法測定魚組織中的吡喹酮和克螨特殘留[J]. 色譜, 2005, 22(4): 153-154.

    [14] BISWAS A K, RAO G S, KONDAIAH N, et al. Simple multiresidue method for monitoring of trimethoprim and sulfonamide residues in buffalo meat by high-performance liquid chromatography[J]. J Agric Food Chem, 2007, 55(22): 8845-8850.

    Simultaneous Determination of Veterinary Drug Residues in Aquatic Products by UPLC-MS/MS

    SUI Tao1,F(xiàn)U Jian2,LI Xiao-yu1,GUO Hai-xia2,LOU Xi-shan2
    (1. Yantai Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau, Yantai 264000, China;
    2. Yantai Jieke Inspection Service Co. Ltd., Yantai 265231, China)

    A method for detecting residues of nalidixic acid, tiamulin, trimethoprim, difloxacin, florfenicol and praziquantel in aquatic products by ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS)after liquidliquid extraction approach was established. The samples were extracted using acetonitrile as the solvent, purified by hexane and detected by UPLC-MS/MS within 6 minutes. The linear regression coefficients corresponding to 6 spiked levels in the range of 5 to 200 μg/L were between 0.9977 and 0.9999. The detection limit for each of the six substances was 1.0 μg/kg, and their recoveries were in the range of 61.2% to 90.5%. The developed method is simple and sensitive and can meet the requirements for qualitative and quantitative analysis of aquatic products.

    nalidixic acid;tiamulin;trimethoprim;difloxacin;florfenicol;praziquantel;ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS);multiple-reaction monitoring (MRM)

    O657.63;S859.84

    A

    1002-6630(2011)10-0203-05

    2010-07-15

    2010年度山東檢驗檢疫局科研項目(SK201030)

    隋濤(1966—),男,工程師,本科,研究方向為食品中的藥物殘留檢測。E-mail:ytst2009@163.com

    猜你喜歡
    甲氧吡喹沙星
    單一和聯(lián)合狂犬疫弱毒苗制劑給藥后家兔血漿中吡喹酮的含量及血藥濃度研究
    伊維菌素吡喹酮咀嚼片含量測定方法的建立
    微生物來源的甲氧丙烯酸酯類化合物研究進展
    阿苯達(dá)唑聯(lián)合吡喹酮治療肝吸蟲病出現(xiàn)黃疸的相關(guān)病因分析
    恩諾沙星的特性及其在豬病防治上的應(yīng)用
    大東方(2017年10期)2017-05-30 18:29:24
    40%甲氧·茚蟲威SC等藥劑防治稻縱卷葉螟試驗簡報
    分子印跡TiO2的制備及其對抗生素磺胺甲氧嘧啶的光催化降解
    非那沙星混懸滴耳液
    無氟喹諾酮:奈諾沙星
    恩諾沙星注射液刺激性試驗
    99re6热这里在线精品视频| 黄色片一级片一级黄色片| 成年女人毛片免费观看观看9 | 激情视频va一区二区三区| 欧美av亚洲av综合av国产av| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 亚洲国产av新网站| 久久午夜综合久久蜜桃| 黄色视频在线播放观看不卡| 日韩电影二区| 伊人亚洲综合成人网| 首页视频小说图片口味搜索 | 精品国产乱码久久久久久男人| 后天国语完整版免费观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 色婷婷久久久亚洲欧美| 丝袜喷水一区| 色网站视频免费| 日韩伦理黄色片| 国产成人av激情在线播放| 又紧又爽又黄一区二区| 在线观看免费视频网站a站| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲免费av在线视频| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 黄色 视频免费看| 国产91精品成人一区二区三区 | 久久中文字幕一级| 国产麻豆69| 国产免费视频播放在线视频| 十八禁高潮呻吟视频| 99国产精品免费福利视频| 日韩大码丰满熟妇| 黄色a级毛片大全视频| 久久人人爽人人片av| 欧美黑人精品巨大| 男女免费视频国产| 各种免费的搞黄视频| 国产免费一区二区三区四区乱码| 一个人免费看片子| 男女下面插进去视频免费观看| 中文字幕色久视频| 国产精品99久久99久久久不卡| 国产日韩欧美在线精品| 叶爱在线成人免费视频播放| 色综合欧美亚洲国产小说| 免费日韩欧美在线观看| 国产又爽黄色视频| 免费观看av网站的网址| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 在线 av 中文字幕| 另类亚洲欧美激情| 国产精品久久久久成人av| 新久久久久国产一级毛片| 国产免费现黄频在线看| bbb黄色大片| 亚洲精品av麻豆狂野| 免费在线观看影片大全网站 | 免费av中文字幕在线| 女性被躁到高潮视频| 亚洲欧美色中文字幕在线| 中文字幕人妻丝袜制服| 91麻豆av在线| 欧美性长视频在线观看| 亚洲第一av免费看| 国产成人精品久久二区二区91| 国产男人的电影天堂91| 在现免费观看毛片| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产免费福利视频在线观看| 国产视频首页在线观看| 黄色 视频免费看| 黄色视频不卡| 一级毛片 在线播放| 一本大道久久a久久精品| videos熟女内射| 丝袜美腿诱惑在线| 夫妻午夜视频| 欧美日韩黄片免| 在线精品无人区一区二区三| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 91精品伊人久久大香线蕉| 99久久人妻综合| 久久精品人人爽人人爽视色| 久久久久国产一级毛片高清牌| 老司机深夜福利视频在线观看 | 欧美在线一区亚洲| 国产视频首页在线观看| 999久久久国产精品视频| 久久久国产精品麻豆| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲精品日本国产第一区| 在线观看一区二区三区激情| 免费看十八禁软件| 制服人妻中文乱码| 欧美日韩黄片免| 国产在线免费精品| 精品久久蜜臀av无| 手机成人av网站| 久久亚洲精品不卡| 久久精品成人免费网站| 黄色毛片三级朝国网站| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 久久精品国产亚洲av高清一级| 成人三级做爰电影| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国产成人精品久久久久久| 国产激情久久老熟女| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲第一青青草原| 精品国产一区二区久久| 下体分泌物呈黄色| 国产一区二区三区综合在线观看| 一级毛片 在线播放| 国产老妇伦熟女老妇高清| 成年动漫av网址| 亚洲国产欧美一区二区综合| 我的亚洲天堂| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 免费高清在线观看日韩| 亚洲欧洲日产国产| 另类精品久久| 精品国产乱码久久久久久男人| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 国产亚洲一区二区精品| 性高湖久久久久久久久免费观看| 国产精品免费大片| 超碰97精品在线观看| 岛国毛片在线播放| 一级毛片 在线播放| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲精品一二三| 男人操女人黄网站| 女人久久www免费人成看片| 18禁国产床啪视频网站| 麻豆av在线久日| 亚洲国产精品一区三区| 精品人妻1区二区| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 一边亲一边摸免费视频| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 黄色视频不卡| 午夜久久久在线观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 成人亚洲欧美一区二区av| 91麻豆av在线| 亚洲精品在线美女| 午夜福利免费观看在线| av网站在线播放免费| 一级黄色大片毛片| 成在线人永久免费视频| 午夜久久久在线观看| 另类精品久久| 久久99一区二区三区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 满18在线观看网站| 国产成人av激情在线播放| 乱人伦中国视频| 久久精品国产亚洲av高清一级| 国产人伦9x9x在线观看| 极品少妇高潮喷水抽搐| 久久久久久久久久久久大奶| 久久99热这里只频精品6学生| 老熟女久久久| 又大又爽又粗| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 日韩精品免费视频一区二区三区| 69精品国产乱码久久久| 亚洲国产精品成人久久小说| 90打野战视频偷拍视频| 精品一区在线观看国产| 少妇粗大呻吟视频| 性色av乱码一区二区三区2| 一级毛片电影观看| 麻豆乱淫一区二区| 久久久久久久久免费视频了| 国产99久久九九免费精品| 成年人午夜在线观看视频| 久久久久国产一级毛片高清牌| 成人影院久久| 一级毛片我不卡| 晚上一个人看的免费电影| 午夜福利,免费看| 久久久久久久久久久久大奶| 大型av网站在线播放| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 国产精品 国内视频| 七月丁香在线播放| 9色porny在线观看| 丰满少妇做爰视频| 国产深夜福利视频在线观看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 老鸭窝网址在线观看| 国产一区二区三区av在线| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产免费一区二区三区四区乱码| 日韩一区二区三区影片| 一二三四在线观看免费中文在| 免费少妇av软件| 黄频高清免费视频| 日韩制服骚丝袜av| 中文字幕av电影在线播放| 少妇粗大呻吟视频| 成人免费观看视频高清| 亚洲欧洲国产日韩| 男男h啪啪无遮挡| 一区福利在线观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 波多野结衣av一区二区av| 亚洲av国产av综合av卡| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 国产三级黄色录像| 制服人妻中文乱码| 亚洲成人免费av在线播放| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 色播在线永久视频| 国产又色又爽无遮挡免| 在线观看免费午夜福利视频| 一边摸一边做爽爽视频免费| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产一区二区 视频在线| 丝袜喷水一区| 国产成人一区二区三区免费视频网站 | av国产久精品久网站免费入址| 亚洲国产精品国产精品| 女性生殖器流出的白浆| 在线看a的网站| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 午夜激情av网站| 国产日韩欧美亚洲二区| 久久精品国产亚洲av高清一级| 久久久久精品国产欧美久久久 | 亚洲精品久久午夜乱码| 亚洲精品中文字幕在线视频| 美女高潮到喷水免费观看| 69精品国产乱码久久久| 久久久久久久精品精品| 少妇粗大呻吟视频| 久久女婷五月综合色啪小说| 日本一区二区免费在线视频| 午夜福利影视在线免费观看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 99久久综合免费| 国产精品久久久av美女十八| 婷婷色麻豆天堂久久| 美女福利国产在线| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 丝袜美腿诱惑在线| 欧美少妇被猛烈插入视频| 999久久久国产精品视频| 色网站视频免费| 国产精品欧美亚洲77777| 麻豆乱淫一区二区| 在线天堂中文资源库| 在线观看免费日韩欧美大片| 久久 成人 亚洲| 国产深夜福利视频在线观看| 视频区欧美日本亚洲| 波多野结衣一区麻豆| 国产亚洲欧美精品永久| netflix在线观看网站| 婷婷色av中文字幕| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 99国产精品99久久久久| 一个人免费看片子| 最近中文字幕2019免费版| 欧美少妇被猛烈插入视频| av线在线观看网站| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 国产成人精品久久二区二区免费| 成年动漫av网址| av福利片在线| 美女国产高潮福利片在线看| 成年人免费黄色播放视频| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲国产成人一精品久久久| 亚洲一码二码三码区别大吗| 日日夜夜操网爽| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 丝袜脚勾引网站| 久久精品人人爽人人爽视色| www.熟女人妻精品国产| 亚洲少妇的诱惑av| 最新的欧美精品一区二区| 99九九在线精品视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 成年女人毛片免费观看观看9 | 久久亚洲国产成人精品v| 美女主播在线视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产在视频线精品| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 看十八女毛片水多多多| 极品人妻少妇av视频| 亚洲欧美清纯卡通| 日本91视频免费播放| 永久免费av网站大全| 高清av免费在线| 一级a爱视频在线免费观看| 另类亚洲欧美激情| 嫁个100分男人电影在线观看 | 久久这里只有精品19| 亚洲精品国产av成人精品| 97在线人人人人妻| 国产成人精品无人区| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产一区二区三区综合在线观看| 精品少妇久久久久久888优播| 国产主播在线观看一区二区 | 久久av网站| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 美女中出高潮动态图| 国产成人欧美在线观看 | 日韩av免费高清视频| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲国产av新网站| 亚洲国产成人一精品久久久| 欧美日韩福利视频一区二区| 少妇粗大呻吟视频| 国产色视频综合| 国产视频一区二区在线看| 国产成人精品久久二区二区91| av电影中文网址| 午夜福利免费观看在线| 在线观看免费高清a一片| 亚洲久久久国产精品| 精品一区在线观看国产| 一区福利在线观看| 免费av中文字幕在线| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 成年女人毛片免费观看观看9 | 中文字幕人妻熟女乱码| 亚洲欧美激情在线| 亚洲国产欧美一区二区综合| 少妇 在线观看| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 成年人午夜在线观看视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 日本av手机在线免费观看| 国产一区有黄有色的免费视频| 一级黄片播放器| 极品少妇高潮喷水抽搐| 99国产综合亚洲精品| 一级毛片 在线播放| 在现免费观看毛片| 搡老岳熟女国产| 一级片免费观看大全| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲欧美激情在线| 成人亚洲精品一区在线观看| 一级片'在线观看视频| 亚洲av综合色区一区| 亚洲精品中文字幕在线视频| 丝袜在线中文字幕| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 女人精品久久久久毛片| 成年人午夜在线观看视频| 午夜免费男女啪啪视频观看| 只有这里有精品99| 精品少妇久久久久久888优播| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 人成视频在线观看免费观看| 看免费av毛片| 亚洲国产成人一精品久久久| 精品福利观看| 在线观看免费视频网站a站| 视频在线观看一区二区三区| 日日爽夜夜爽网站| 极品少妇高潮喷水抽搐| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| www.精华液| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 国产不卡av网站在线观看| 精品熟女少妇八av免费久了| 精品少妇内射三级| 亚洲视频免费观看视频| 欧美成狂野欧美在线观看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 日韩电影二区| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产成人精品久久二区二区免费| 日本欧美视频一区| 亚洲精品自拍成人| 美女福利国产在线| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲熟女精品中文字幕| 久久久久网色| 午夜福利免费观看在线| 欧美大码av| 午夜影院在线不卡| 在线观看免费午夜福利视频| 五月天丁香电影| 午夜福利,免费看| 亚洲伊人久久精品综合| 精品福利观看| 免费在线观看完整版高清| 99热网站在线观看| 国产视频一区二区在线看| 欧美激情极品国产一区二区三区| 91麻豆av在线| 蜜桃国产av成人99| 国产av精品麻豆| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 国产精品一区二区精品视频观看| 18禁国产床啪视频网站| 国产精品偷伦视频观看了| 超碰成人久久| 性高湖久久久久久久久免费观看| 中文字幕最新亚洲高清| 丝袜喷水一区| 黄色片一级片一级黄色片| 国产精品一二三区在线看| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 男男h啪啪无遮挡| 国产精品二区激情视频| 多毛熟女@视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 日韩中文字幕视频在线看片| 午夜免费观看性视频| av一本久久久久| 亚洲成人国产一区在线观看 | 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 熟女av电影| 国产成人av激情在线播放| 国产在线免费精品| 日韩免费高清中文字幕av| 亚洲欧美精品自产自拍| 日韩 亚洲 欧美在线| 又大又爽又粗| 飞空精品影院首页| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 91成人精品电影| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 午夜福利,免费看| 久久 成人 亚洲| 久久人妻福利社区极品人妻图片 | 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲精品国产av蜜桃| 桃花免费在线播放| 两个人免费观看高清视频| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 看十八女毛片水多多多| 亚洲精品在线美女| 国产黄色免费在线视频| 纯流量卡能插随身wifi吗| 操美女的视频在线观看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 午夜免费成人在线视频| 欧美中文综合在线视频| 深夜精品福利| 咕卡用的链子| 亚洲av欧美aⅴ国产| 国产精品一二三区在线看| 最黄视频免费看| 亚洲成人免费av在线播放| www.精华液| 欧美人与善性xxx| 久久国产亚洲av麻豆专区| 丝袜美腿诱惑在线| 少妇 在线观看| 日本午夜av视频| 国产日韩欧美亚洲二区| 欧美少妇被猛烈插入视频| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 一级片免费观看大全| 啦啦啦啦在线视频资源| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲国产看品久久| 午夜免费鲁丝| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 国产精品久久久久久精品电影小说| 大香蕉久久成人网| 嫩草影视91久久| 啦啦啦在线观看免费高清www| 免费看不卡的av| 中文字幕av电影在线播放| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 国产视频一区二区在线看| 操出白浆在线播放| 国产精品久久久av美女十八| 亚洲国产精品一区三区| 夫妻性生交免费视频一级片| 美女国产高潮福利片在线看| 波多野结衣一区麻豆| 91成人精品电影| 激情五月婷婷亚洲| 久久精品人人爽人人爽视色| 丝袜脚勾引网站| 免费观看a级毛片全部| 日本91视频免费播放| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲中文av在线| 在线 av 中文字幕| 一区在线观看完整版| 无遮挡黄片免费观看| www.熟女人妻精品国产| 看十八女毛片水多多多| 午夜激情av网站| 最黄视频免费看| 免费少妇av软件| 91老司机精品| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 交换朋友夫妻互换小说| 欧美日韩精品网址| 国产伦人伦偷精品视频| 国产免费一区二区三区四区乱码| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产男女内射视频| 美女午夜性视频免费| 一级毛片 在线播放| 男人舔女人的私密视频| 制服诱惑二区| 妹子高潮喷水视频| 国产黄频视频在线观看| 韩国高清视频一区二区三区| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 啦啦啦啦在线视频资源| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 热re99久久精品国产66热6| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国产精品久久久久久精品古装| 欧美精品一区二区免费开放| 亚洲精品国产区一区二| 麻豆国产av国片精品| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 又大又黄又爽视频免费| 久久人人97超碰香蕉20202| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 午夜视频精品福利| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 18禁观看日本| 色婷婷av一区二区三区视频| 精品人妻一区二区三区麻豆| 中文字幕色久视频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 一边亲一边摸免费视频| 一区福利在线观看| 一边亲一边摸免费视频| 欧美97在线视频| 国产精品免费大片| 国产真人三级小视频在线观看| 免费在线观看黄色视频的| 成年av动漫网址| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 岛国毛片在线播放| 国精品久久久久久国模美| 女人久久www免费人成看片| 美女高潮到喷水免费观看| 国产精品免费大片| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 欧美国产精品一级二级三级| avwww免费| av又黄又爽大尺度在线免费看| 一个人免费看片子| 2018国产大陆天天弄谢| 一区二区日韩欧美中文字幕| 国产精品一区二区在线不卡| 午夜福利,免费看| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 色网站视频免费| 老司机亚洲免费影院| 国产黄色免费在线视频| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 精品亚洲成国产av| 国产激情久久老熟女| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 亚洲色图综合在线观看| 国产男女超爽视频在线观看| 老司机亚洲免费影院| 免费看十八禁软件| 黄色 视频免费看| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产xxxxx性猛交| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产欧美日韩精品亚洲av| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 亚洲成色77777| 色婷婷久久久亚洲欧美| 视频区图区小说| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 午夜免费男女啪啪视频观看| 无限看片的www在线观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 亚洲成色77777| 韩国高清视频一区二区三区| 成人三级做爰电影| 国产免费现黄频在线看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产一区亚洲一区在线观看| 美女高潮到喷水免费观看| 麻豆乱淫一区二区| 91麻豆av在线| 国产在线视频一区二区| 一本大道久久a久久精品| 久久精品成人免费网站| 老熟女久久久| 色视频在线一区二区三区| 国产成人精品久久二区二区91| 久久久精品区二区三区| 日本av免费视频播放| 成人国产一区最新在线观看 | 久久综合国产亚洲精品| 丝袜喷水一区| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲国产精品999| 男男h啪啪无遮挡|