HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地麻黃中麻黃堿的含量*

高 慧

(天津市第五中心醫(yī)院，天津 300450)

麻黃為麻黃科植物草麻黃(Ephedra sinica Stapf)、中麻黃(Ephedra intermedia Schrenk et C.A.Mey)和木賊麻黃(Epherdra equisetina Bge)的干燥草質(zhì)莖［1］，其性溫、味辛、微苦，具發(fā)汗解表、宣肺平喘、利水消腫之功效，常用于風(fēng)寒感冒，胸悶喘咳，風(fēng)水浮腫，支氣管哮喘［2］，麻疹初期透發(fā)不暢等病癥［3］。麻黃藥材產(chǎn)地廣泛，主產(chǎn)于山西、吉林、遼寧、內(nèi)蒙古、河北、陜西等地區(qū)。不同產(chǎn)地的麻黃在化學(xué)成分上存在不同質(zhì)量特征。目前已知麻黃中含有多種成分，如生物堿、黃酮、鞣質(zhì)、揮發(fā)油、多糖等，但對(duì)其藥理毒理作用研究較多的為麻黃特征化學(xué)成分生物堿類(lèi)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)不同溶劑提取麻黃的方法進(jìn)行比較，采用 HPLC［4，5］法測(cè)定不同產(chǎn)地麻黃中麻黃堿的含量，為制劑越婢加術(shù)顆粒的麻黃藥材來(lái)源提供可靠保障。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津(SHIMADZU)LC高效液相色譜儀，SHIMADZU LC－20AT多功能紫外檢測(cè)儀，SHIMADZU SPD－20A型泵，LC solution Lite色譜工作站，海爾冰箱，萬(wàn)用電爐(北京市永光明醫(yī)療儀器廠)，電熱恒溫水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司)，循環(huán)水式真空泵(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)，1/10萬(wàn)分析天平(上海精天電子儀器廠)，超聲波清洗器(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司，型號(hào)KQ－500E)，回流裝置。

1.2 試藥 甲醇(上海沃凱)色譜純，乙腈(上海沃凱)色譜純，甲醇，磷酸二氫鉀，三乙胺，磷酸，95%乙醇，鹽酸均為分析純，娃哈哈純凈水，氫氧化鈉，鹽酸麻黃堿對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品鑒定所，批號(hào)1241－200102，含量 ＞99.9%)，蒸餾水。

1.3 藥材 4種麻黃藥材來(lái)源于哈爾濱醫(yī)科大學(xué)大慶校區(qū)中藥標(biāo)本館，經(jīng)該校生藥研究室魏東華教授鑒定均為麻黃科植物草麻黃(Ephedrae sinica stapf)的干燥草質(zhì)莖。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為INERTSIL ODS－SP柱(4.6 mm × 150 mm，5 μm)，檢測(cè)波長(zhǎng):205 nm，流動(dòng)相:乙腈－(0.02 mol/L磷酸二氫鉀+0.02%三乙胺+0.2%磷酸水溶液)(10∶90)，流速:1 ml/min，進(jìn)樣量10 μl。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取鹽酸麻黃堿標(biāo)準(zhǔn)品4 mg，置50 ml量瓶中，甲醇溶液稀釋至刻度，得80 μg/ml對(duì)照品溶液。

2.2.2 樣品溶液的制備 分別精密稱取產(chǎn)地為山西、河北、陜西、內(nèi)蒙的麻黃粗粉各5 g，各置于250 ml圓底燒瓶中，加70%乙醇50 ml回流1 h，過(guò)濾，重復(fù)回流3次，合并濾液，最后制成每100 ml相當(dāng)麻黃生藥1 g的4份不同產(chǎn)地的麻黃樣品溶液。對(duì)照品和樣品色譜圖如圖1。

圖1 對(duì)照品(A)樣品(B)HPLC色譜圖

2.3 線性關(guān)系考察 精密吸取80 μg/ml對(duì)照品溶液10、8、6、5 和 2.5 ml分別置 10 ml量瓶中，甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，得濃度分別為 80、64、48、40和 20 μg/ml的對(duì)照品溶液，在上述色譜條件下，分別精密吸取對(duì)照品溶液各10 μl進(jìn)樣，記錄色譜峰峰面積，以鹽酸麻黃堿對(duì)照品的含量(μg)為橫坐標(biāo)X，峰面積積分值Y為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸，得回歸方程為Y=5 E+0.6 X+119 445(r=0.999 7)，線性范圍為 0.2 ～0.8 μg。

2.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10 μl，分別自上述色譜條件下，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄色譜峰面積，計(jì)算麻黃堿峰面積積分值，RSD值為0.71%。理論塔板數(shù)為2354，表明儀器的精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取山西樣品溶液，于配制后0、2.5、5.0、7.5、10.0 和 12.5 h 自上述色譜條件下分別進(jìn)樣測(cè)定，共測(cè)定5次，記錄色譜峰面積，計(jì)算麻黃堿峰面積積分值，RSD值為1.53%。表明山西樣品溶液在12.5 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知麻黃堿含量的山西麻黃5份，每份2.5 g，分別準(zhǔn)確加入鹽酸麻黃堿標(biāo)準(zhǔn)品適量，依照樣品溶液的制備方法制備成5份樣品，按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄麻黃堿峰面積，計(jì)算麻黃堿平均回收率(n=5)為98.21%，RSD值為0.79%。

2.7 提取方法的確定 本實(shí)驗(yàn)在考察含量測(cè)定的同時(shí)，注重提取方法的研究。本實(shí)驗(yàn)對(duì)水蒸氣蒸餾法，酸水回流法，乙醇回流法，鹽酸乙醇回流法，半仿生法進(jìn)行了對(duì)比［6］。

2.7.1 水蒸氣蒸餾法 取麻黃粗粉10 g，置圓底燒瓶中，加 100 ml水，冷浸10 min，回流 3 次，分別為 1、0.5和0.5 h，每次過(guò)濾，合并濾液，濃縮，于60℃干燥，稱重。

2.7.2 酸水回流法 取麻黃粗粉10 g，置圓底燒瓶中，加100 ml水，0.75 ml鹽酸，冷浸10 min，回流3 次，分別為1、0.5 和 0.5 h，每次過(guò)濾，合并濾液，濃縮，于60℃干燥，稱重。

2.7.3 乙醇回流法 取麻黃粗粉10 g，置圓底燒瓶中，加60%乙醇100 ml，回流3次，每次1 h，每次過(guò)濾，合并濾液，濃縮，于60℃干燥，稱重。

2.7.4 酸水乙醇回流法 取麻黃粗粉10 g，置圓底燒瓶中，加60%乙醇100 ml，0.75 ml鹽酸，回流 3 次，分別為1、0.5 和 0.5 h，每次過(guò)濾，合并濾液，濃縮，于 60℃干燥，稱重［7］。

2.7.5 半仿生法 取麻黃粗粉10 g，置錐形瓶中，加100 ml水，加鹽酸調(diào)至 pH=1，煎煮 0.5 h，過(guò)濾，濾渣加80 ml水，加氫氧化鈉調(diào)至pH=10，煎煮2次，每次0.5 h，每次過(guò)濾，合并濾液，濃縮，于60℃干燥，稱重。

精密吸取按上述5種方法提取的麻黃浸膏適量，分別加入甲醇適量制成每100 ml相當(dāng)麻黃生藥1 g的樣品溶液。精密吸取對(duì)照品溶液和上述5種樣品溶液各10 μl，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣，記錄色譜峰面積，計(jì)算麻黃堿含量，結(jié)果半仿生法從麻黃中提取的鹽酸麻黃堿含量最高，乙醇回流法次之，其次為鹽酸乙醇回流法，酸水回流法，水蒸氣蒸餾法。考慮到乙醇回流法較半仿生法差距不甚顯著，且半仿生法對(duì)實(shí)驗(yàn)器材要求較高，由此確定了乙醇回流法為提取麻黃較好的方法，其原因在于游離的麻黃堿在提取和干燥的過(guò)程中易蒸發(fā)損失，水的沸點(diǎn)比乙醇高，因而損失較多，乙醇可減少蒸發(fā)損失，提取量也較高［8］。見(jiàn)表1。

表1 提取方法結(jié)果比較

2.8 樣品含量測(cè)定結(jié)果 精密吸取“2.2.2”項(xiàng)下方法制備的四種不同產(chǎn)地麻黃樣品溶液10 μl，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別注入液相色譜儀，每份測(cè)定3次，記錄峰面積，計(jì)算樣品溶液中麻黃堿含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 不同產(chǎn)地麻黃中麻黃堿含量

3 討論

HPLC法測(cè)定麻黃堿含量的報(bào)道較多，色譜條件多樣，本實(shí)驗(yàn)分別考察了5種流動(dòng)相:甲醇－水、乙腈－水、乙腈－0.1%磷酸水溶液、乙腈－0.2%磷酸水溶液、乙腈－(0.02 mol/L磷酸二氫鉀+0.02%三乙胺+0.2%磷酸水溶液)，前4種流動(dòng)相均有不同情況的拖尾或基線漂移現(xiàn)象。結(jié)果流動(dòng)相為乙腈 －(0.02 mol/L磷酸二氫鉀 +0.02%三乙胺+0.2%磷酸水溶液)(10∶90)基線平穩(wěn)，可使色譜峰較好分離，加入三乙胺試劑可防止拖尾現(xiàn)象發(fā)生［9，10］。

在麻黃提取工藝中，乙醇回流法為較好的提取方法。不同產(chǎn)地麻黃中麻黃堿含量差異較大，以山西的最高，其次為河北，再次為內(nèi)蒙，陜西麻黃最低。說(shuō)明產(chǎn)地因素對(duì)麻黃中麻黃堿的含量有重要影響。

1 中國(guó)藥典.一部.2005:223

2 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所.中藥志.第4冊(cè).北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:621

3 戰(zhàn)旗，張兆旺，孫秀梅.麻黃兩種方法提取液的成分含量比較.山東中醫(yī)雜志，1999，18(7):322

4 Mo S H，Chen X J，Deng X D，et al.Determination of ephedrine hydrochloride in Juyuanzhike tablets by HPLC.ChinTraditPatMed，2004，26(3):201

5 Wang L，Zhang T H，Jiang R，et al.Simultaneousdetermination of fexofenadine hyd－rochloride and pseudoephedrine hydrochloride in their sustainedrelease twolayer tablets by HPLC.JShenyangPharm Univ，2003，20(4):266

6 沈紅，狄留慶，黃耀洲.不同提取方法對(duì)麻黃中麻黃堿提取得率的比較研究.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，20(3):170

7 張紹軒，李勇，黃青，等.用正交試驗(yàn)優(yōu)選鹽酸乙醇回流法提取麻黃的工藝研究.吉林中醫(yī)藥，2008，28(4):291

8 趙東旭，李偉成，蘇志國(guó).草麻黃中麻黃堿提取的工藝學(xué)研究.天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2001，13(2):167

9 張巍，楊繼榮，徐春梅.建立麻黃提取物含量測(cè)定高效液相色譜法.黑龍江醫(yī)藥，2010，23(2):155

10 符繼紅，張麗靜.麻黃藥材HPLC指紋圖譜的研究.中草藥，2008，30(2):163