反相高效液相色譜法測(cè)定鹽酸洛美沙星氯化鈉注射液中洛美沙星的含量*

李倚云，王 威，聞琍毓

(江蘇省揚(yáng)州藥品檢驗(yàn)所，揚(yáng)州 225009)

洛美沙星屬中長(zhǎng)效第三代喹諾酮類合成抗菌藥，臨床用于治療敏感細(xì)菌引起的呼吸道、泌尿生殖系統(tǒng)、胃腸道、皮膚軟組織等感染，其半衰期長(zhǎng)，療效確切，得到廣泛應(yīng)用。國(guó)內(nèi)現(xiàn)行鹽酸洛美沙星氯化鈉注射液標(biāo)準(zhǔn)為國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局單頁(yè)標(biāo)準(zhǔn)，且不同企業(yè)、不同規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)不同。用高效液相色譜法測(cè)定含量的標(biāo)準(zhǔn)中存在流動(dòng)相組成各不相同、比例各有不同且流動(dòng)相含鹽量較高等問題，部分單頁(yè)標(biāo)準(zhǔn)在含量測(cè)定中仍采用專屬性不強(qiáng)的紫外分光光度法［1－4］。為完善和統(tǒng)一質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，筆者參照《中國(guó)藥典》2010年版鹽酸洛美沙星含量測(cè)定方法［5］，建立一種專屬性強(qiáng)且統(tǒng)一的HPLC含量測(cè)定方法，并用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)12批樣品進(jìn)行了現(xiàn)方法和原標(biāo)準(zhǔn)方法含量測(cè)定結(jié)果的比較。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 SHIMADZU LC－20AB HPLC色譜儀，SHIMADZU SPD－20A紫外檢測(cè)器，SHIMADZU LC solution色譜工作站。色譜柱:菲羅門Gemini－C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm)、Inertsil－ C18(150 mm × 4.6 mm，5 μm)、Waters Symmetry－ C18(150 mm ×4.6 mm，5 μm)。

1.2 試藥 洛美沙星對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)130452－200902，含量90.3%)，戊烷磺酸鈉(日本進(jìn)口);磷酸二氫銨、磷酸、一水合檸檬酸(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)為分析純;甲醇、乙腈(Dikma公司)為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液 取洛美沙星對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1 ml中約含洛美沙星0.1 mg的溶液。

2.1.2 供試品溶液 精密量取本品適量，加流動(dòng)相定量稀釋制成每1 ml中約含洛美沙星0.1 mg的溶液。

2.1.3 陰性樣品溶液 按處方配比，取除洛美沙星外的其他組分，按“2.1.2”項(xiàng)下供試品溶液中的組分濃度制得陰性樣品溶液。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以戊烷磺酸鈉溶液(取戊烷磺酸鈉1.5 g，磷酸二氫銨 3.5 g，加水 950 ml使溶解，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0，用水稀釋至1 000 ml)－甲醇(65∶35)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為287 nm。取洛美沙星對(duì)照品適量，加水溶解并稀釋制成每1 ml中約含1.0 mg的溶液，水浴加熱60 min，冷卻，取此液20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，與主成分峰相對(duì)保留時(shí)間分別約0.8和1.1處應(yīng)能檢測(cè)到雜質(zhì)峰，且洛美沙星峰與兩雜質(zhì)峰的分離度均應(yīng)符合要求。

取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)行分析，結(jié)果表明樣品中其他成分對(duì)洛美沙星的測(cè)定無干擾，見圖1。

圖1 對(duì)照品(A)供試品(B)及陰性樣品(C)HPLC色譜圖

2.3 線性范圍 取洛美沙星對(duì)照品適量，精密稱定55.23 mg置100 ml量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，分別精密量取0.5、1、3、5、7、9 和10 ml置 25 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度。分別精密量取20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以洛美沙星的峰面積A(×106)對(duì)其濃度C(μg/ml)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為 A=0.132 6 C+0.036 5(R2=1.000 0)，結(jié)果表明在10.0 ～199.5 μg/ml范圍內(nèi)，洛美沙星色譜峰峰面積與其濃度成良好線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備溶液1份，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣5次，洛美沙星色譜峰峰面積的RSD為0.28%(n=5)。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備溶液6份，在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果洛美沙星平均含量為98.23%，RSD為1.0%(n=6)。結(jié)果表明方法的重復(fù)性較好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備溶液1 份，室溫放置，分別于0、1、2、3、5、6、7、8、10和11 h，按上述色譜條件分析，洛美沙星峰面積的RSD為0.1%(n=10)。結(jié)果表明，供試品溶液室溫放置11 h內(nèi)測(cè)定穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗(yàn) 取洛美沙星對(duì)照品適量，精密稱定，按處方配比加流動(dòng)相稀釋制成含洛美沙星約為0.08、0.10 和 0.12 mg/ml的溶液各 3 份，按上述色譜條件分析，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為100.11%，RSD 為0.51%，見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品測(cè)定

2.8.1 不同企業(yè)不同規(guī)格樣品含量測(cè)定 取12批鹽酸洛美沙星氯化鈉注射液，分別按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，精密量取20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖;另取洛美沙星對(duì)照品，同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算出供試品中洛美沙星的含量，結(jié)果見表2。

2.8.2 新方法和原標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定結(jié)果比較 分別采用新方法和原標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行含量測(cè)定，測(cè)定結(jié)果用方差分析方法進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，F(xiàn)值為0.036 9，P值為0.849 5(自由度為23)，結(jié)果表明，兩種方法統(tǒng)計(jì)結(jié)果差異無顯著性意義，說明兩種含量測(cè)定方法無差異。結(jié)果見表2和表3。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

表2 新建立方法和原標(biāo)準(zhǔn)對(duì)含量測(cè)定結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析

表3 方差分析

3 討論

3.1 流動(dòng)相的選擇 《中國(guó)藥典》2010年版二部收載了鹽酸洛美沙星原料和鹽酸洛美沙星片、鹽酸洛美沙星膠囊兩種劑型，其中含量測(cè)定采用高效液相色譜法，以戊烷磺酸鈉溶液(取戊烷磺酸鈉1.5 g，磷酸二氫銨3.5 g，加水 950 ml使溶解，用磷酸調(diào)節(jié) pH 值至 3.0，用水稀釋至1 000 ml)－甲醇(65∶35)為流動(dòng)相，洛美沙星色譜峰柱效高、峰型好。而原標(biāo)準(zhǔn)中A企業(yè)采用高效液相色譜法測(cè)定含量方法為0.05 mol/L枸櫞酸溶液(用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至4.0)－乙腈(87∶13)為流動(dòng)相，其中枸櫞酸比例高，易造成色譜柱堵塞并影響儀器壽命。B企業(yè)采用紫外分光光度法測(cè)定含量，專屬性差。本試驗(yàn)參照《中國(guó)藥典》2010年版二部，選用了此流動(dòng)相，以利于統(tǒng)一含量測(cè)定方法。同時(shí)還做了系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)研究，保證洛美沙星峰與兩主要雜質(zhì)峰的分離度符合要求，使得含量測(cè)定方法更加科學(xué)和完善。

3.2 方法耐用性 試驗(yàn)中參照《中國(guó)藥典》2010年版二部，選取不同的色譜柱菲羅門 Gemini－C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm)、Inertsil－ C18(150 mm ×4.6 mm，5 μm)和 Waters Symmetry － C18(150 mm × 4.6 mm，5 μm)，取洛美沙星系統(tǒng)適用性條件測(cè)試溶液。結(jié)果表明:與洛美沙星峰相對(duì)保留時(shí)間分別約0.8和1.1處能檢測(cè)到雜質(zhì)峰，且洛美沙星峰與兩雜質(zhì)峰的分離度均符合要求。用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)12批樣品進(jìn)行了兩種含量測(cè)定方法結(jié)果的比較，證明兩種方法統(tǒng)計(jì)結(jié)果差異無顯著性意義，說明兩種含量測(cè)定方法無差異。

1 中國(guó)藥典.二部.2010:758

2 谷杰，初文英，李鐵軍，等.高效液相色譜法測(cè)定鹽酸洛美沙星葡萄糖注射液的含量.中國(guó)藥學(xué)雜志，1997，32(4):234

3 王銀蘭，李曉玲，楊潔，等.反相高效液相色譜法分析注射用鹽酸洛美沙星.寧夏醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，30(2):251

4 黃衛(wèi)平.RP－HPLC法測(cè)定鹽酸洛美沙星及其雜質(zhì)的含量.西北藥學(xué)雜志，1998，13(2):51

5 楊青，郭炎榮.RP－HPLC法測(cè)定鹽酸洛美沙星滴眼液的含量.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2009，15(4):24