• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    中國金頂側(cè)耳菌株遺傳多態(tài)性的ISSR分析

    2011-10-18 04:16:54張秋勝徐丙蓮劉林德程顯好高興喜史亞麗
    食品科學(xué) 2011年5期
    關(guān)鍵詞:側(cè)耳金頂條帶

    張秋勝,徐丙蓮,劉林德,程顯好,高興喜,史亞麗

    (1.魯東大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,山東 煙臺 264025; 2.魯東大學(xué)數(shù)學(xué)與信息學(xué)院,山東 煙臺 264025;3.魯東大學(xué)體育學(xué)院,山東 煙臺 264025)

    中國金頂側(cè)耳菌株遺傳多態(tài)性的ISSR分析

    張秋勝1,徐丙蓮2,劉林德1,程顯好1,高興喜1,史亞麗3

    (1.魯東大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,山東 煙臺 264025; 2.魯東大學(xué)數(shù)學(xué)與信息學(xué)院,山東 煙臺 264025;3.魯東大學(xué)體育學(xué)院,山東 煙臺 264025)

    金頂側(cè)耳是重要的食藥用真菌。本實驗收集全國各地18種金頂側(cè)耳菌株,通過ISSR分子標(biāo)記技術(shù)分析金頂側(cè)耳菌株種內(nèi)遺傳多態(tài)性,11種引物擴增出102個條帶,其中78個條帶具有多態(tài)性,多態(tài)率為76.4%。結(jié)果表明,金頂側(cè)耳菌株內(nèi)具有豐富的遺傳多樣性,遺傳相似系數(shù)在0.50~0.96。采用平均分類法UPGMA分析表明,在遺傳相似系數(shù)為0.62時,18種菌株分為兩大類。當(dāng)遺傳相似系數(shù)增大到0.75時,它們分為7類。16號菌株具有獨立的遺傳體系。

    金頂側(cè)耳;簡短重復(fù)序列;多態(tài)性;親緣關(guān)系

    金頂側(cè)耳(Pleurotus cituinopileatus)子實體顏色淺黃或金黃,所以也叫榆黃菇,是著名的食藥用真菌[1-2]。近年來,中國金頂側(cè)耳的遺傳規(guī)律、栽培技術(shù)等已取得了一定進展,但其種質(zhì)資源概況和遺傳基礎(chǔ)仍缺乏系統(tǒng)的研究,以致中國金頂側(cè)耳育種對種質(zhì)資源的利用存在較大的盲目性、重復(fù)性,影響了育種效率的提高[3-5]。ISSR(inter-simple sequence repeats)分子標(biāo)記是基于真核生物基因組中廣泛分布的微衛(wèi)星重復(fù)序列具有較高的重復(fù)性和穩(wěn)定性的特點,目前已廣泛用于遺傳多樣性、品種鑒定、系統(tǒng)進化等研究中[6-9]。

    本實驗從國內(nèi)多家菌種單位收集不同品種的金頂側(cè)耳種質(zhì)材料,應(yīng)用ISSR分子標(biāo)記對中國有代表性的18種金頂側(cè)耳種質(zhì)材料進行遺傳多態(tài)性分析,旨在為金頂側(cè)耳的菌株鑒定、育種的親本選擇提供科學(xué)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 菌株材料

    收集全國各地的金頂側(cè)耳菌株,接種到PDA固體培養(yǎng)基中,25℃培養(yǎng)5~7d直到菌絲體生長良好,用作本實驗菌種。18種菌株分別編號為1~18。各實驗菌株來源如表1。

    表1 金頂側(cè)耳供試菌株Table 1 Pleurotus cituinopileatus strains tested in this study

    1.2 試劑與培養(yǎng)基

    葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、MgSO4、VB1、瓊脂粉均為國產(chǎn)分析純 上海國藥集團;Premix Taq version 2.0大連寶生物工程有限公司。

    PDA平板培養(yǎng)基:馬鈴薯(去皮)200g、葡萄糖20g、蛋白胨2g、KH2PO43g、MgSO41.5g、VB120mg、瓊脂17g、水1000mL,pH值自然。

    1.3 儀器與設(shè)備

    GIS-2020D 全自動數(shù)碼凝膠成像分析系統(tǒng) 寧波新芝生物科技股份有限公司;LRH-250型生化培養(yǎng)箱、YXQLS-60SⅡ型全自動數(shù)顯高壓蒸汽滅菌器 上海精密儀器儀表有限公司;PT-200型PCR擴增儀 美國PE公司。

    1.4 菌株基因組總DNA抽提

    經(jīng)活化的菌株在PDA液體培養(yǎng)基中25℃培養(yǎng)7d,從培養(yǎng)基中收集菌絲球。采用CTAB法提取基因組DNA[10]。

    1.5 引物

    表2 實驗引物及其序列Table 2 Primers used in this study and their sequences

    隨機引物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成,從30條隨機引物中剔除無擴增引物和帶紋模糊難于分辨的引物,利用擴增條帶清晰、穩(wěn)定、特異性強的11條引物擴增不同株系的DNA樣本,以檢測引物在群體中的多態(tài)性。

    1.6 ISSR分析的PCR反應(yīng)體系和程序

    PCR反應(yīng)體系:Taq酶0.5U,Mg2+2.5mmo1/L,dNTP 0.2mmo1/L,Primer 0.75μmo1/L,模板DNA 50ng。

    PCR擴增程序為:94℃變性4min;94℃變性45s,50~52℃退火45s,72℃延伸90s,循環(huán)35次;72℃延伸10min,4℃保存。PCR產(chǎn)物用1.6%瓊脂糖凝膠,在不超過5V/cm的電壓下電泳,電極緩沖液為1×Tris-乙酸(TAE),用0.5g/mL嗅化乙錠(EB)染色30min,凝膠成像系統(tǒng)拍照記錄。

    1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

    從初選后的各組中,隨機抽取1份材料作為代表,參加不同基因型間多態(tài)性分析。統(tǒng)計各基因型間表現(xiàn)多態(tài)性好的引物的擴增位點。在條帶圖上,以“0”和“1”的方式記錄電泳結(jié)果圖版中條帶位置,有條帶賦值“l(fā)”,無條帶賦值“0”,作0/1矩陣輸入計算機,采用生物學(xué)統(tǒng)計軟件NTSYSPc2.10e進行分析。運用指數(shù)法,計算菌株間遺傳相似系數(shù)(GS)。依據(jù)遺傳距離,采用UPGMA聚類分析構(gòu)建分子系統(tǒng)進化樹。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 金頂側(cè)耳菌株ISSR結(jié)果分析

    從30條ISSR隨機引物中共篩選出擴增條帶清晰、穩(wěn)定的11條較為理想的隨機引物,分別為引物826、835、834、P3、P7、P8、P12、827、812、IS5、825。由擴增的DNA指紋圖譜(圖1、2)可以看出,每個引物對不同菌株擴增的DNA條帶數(shù)不等,一般在5~14個之間,絕大多數(shù)擴增片段大小在200~2200bp之間。同時,有的引物擴增出的幾個產(chǎn)物片段為所有菌株所共有,即說明這些引物與金頂側(cè)耳菌株DNA結(jié)合位點比較保守,該區(qū)域即為金頂側(cè)耳菌株物種特征遺傳信息。

    圖1 引物835對18種金頂側(cè)耳菌株基因組ISSR指紋圖譜Fig.1 PCR identification of Pleurotus cituinopileatus with primer 835

    圖2 引物P3對18種榆黃菇基因組ISSR指紋圖譜Fig.2 PCR identification of Pleurotus cituinopileatus with primer P3

    2.2 供試菌株的ISSR多態(tài)性位點統(tǒng)計

    表3 供試菌株的ISSR多態(tài)性位點統(tǒng)計結(jié)果Table 3 Polymorphic loci amplified by ISSR of tested strains

    由表3可見,不同引物的多態(tài)性位點頻率不同。引物P3的多態(tài)性位點頻率為55.6%,而引物812和826的多態(tài)性位點頻率則達87.5%,平均多態(tài)性為76.4%。另外,在11個隨機引物擴增得到的總共102個ISSR位點中,有78個位點具有多態(tài)性,其多態(tài)性位點頻率為76.4%,說明金頂側(cè)耳菌株種內(nèi)具有豐富的遺傳多樣性。2.3 金頂側(cè)耳菌株間親緣關(guān)系分析

    供試的18種金頂側(cè)耳菌株兩兩之間的遺傳相似系數(shù)為0.50~0.96。其中,菌株2與3號、菌株3與5號間相似系數(shù)最大(0.96),菌株8與17號間相似系數(shù)最小(0.50)。表4是利用NTSYC-pc 2.10e 軟件分析得出的菌株間相似系數(shù)。

    根據(jù)ISSR數(shù)據(jù)統(tǒng)計遺傳距離值,按UPGMA法進行聚類分析,建立系統(tǒng)親緣關(guān)系圖,結(jié)果見圖3。

    圖3 18種金頂側(cè)耳菌株的親緣關(guān)系聚類圖Fig.3 Genetic relationship dendrogram of 18 Pleurotus cituinopileatus strains

    從圖3可知,相似系數(shù)為0.62時,金頂側(cè)耳菌株主要分為兩大類。6、7號和16號菌株組成一類,其余的為一大類,在這一大類中,又可分成三類。當(dāng)相似系數(shù)增大到0.75時,它們又可分為七類。3、5號菌株之間親緣關(guān)系較近,相似系數(shù)為0.96,而1、6、8號菌株與16號菌株的親緣關(guān)系較遠,相似系數(shù)只有0.54,說明我國金頂側(cè)耳菌株資源遺傳多態(tài)性豐富。從菌株的來源看,來自盤錦新北方食用菌研究所菌種保藏中心的菌株16號和其他的各種金頂側(cè)耳親緣關(guān)系較遠,卻和來自江蘇省高郵市科學(xué)院的菌株9、10號親緣關(guān)系更近些,這可能與我國不同單位之間頻繁引種有關(guān)。相同或相近地區(qū)來源的菌株基本可以歸在一起,這可能與金頂側(cè)耳實際地理分布相關(guān),如菌株14和15號;菌株4和11號均歸為一類;同時,從菌株組成看,來自中國北方的占多數(shù)。來源相同的菌株,其遺傳結(jié)構(gòu)也不同,如菌株1和2號,這可能與其各自的繁育系統(tǒng)等因素有關(guān)。

    表4 18種金頂側(cè)耳菌株間相似系數(shù)Table 4 Similarity coefficients among 18 Pleurotus cituinopileatus strains

    3 討論與結(jié)論

    傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)分類是以子實體形態(tài)、菌蓋顏色、孢子的形狀及菌柄的有無等特征為分類依據(jù)。但其形態(tài)學(xué)特征易受到環(huán)境因子的影響變得不易區(qū)分[11]。分子標(biāo)記,尤其是遺傳物質(zhì)DNA具有較高的穩(wěn)定性[12]。簡單重復(fù)間序列(ISSR)標(biāo)記具有較強的專一性、重復(fù)性和可操作性。該標(biāo)記技術(shù)在靈芝、香菇等其他食用菌中已有應(yīng)用,但在金頂側(cè)耳中則未見報道[13-14]。

    利用ISSR技術(shù)在分子水平上對我國不同來源地的金頂側(cè)耳菌株遺傳多樣性進行了分析,結(jié)果表明,中國栽培金頂側(cè)耳菌株的多態(tài)性較為豐富,可以利用和開發(fā)的菌種資源較多。從收集菌株來源來看,北方地區(qū)總的菌株數(shù)量要大于南方地區(qū)的菌株數(shù)量,這可能與金頂側(cè)耳的主要栽培地區(qū)在中國北方相關(guān)。金頂側(cè)耳經(jīng)多年栽培,許多品種已發(fā)生了較大變異,這也可能與金頂側(cè)耳易發(fā)生變異相關(guān)[15]??偟膩碚f,金頂側(cè)耳菌株資源在我國是很豐富的,尤其是在中國北方地區(qū)。從聚類的結(jié)果看,地域性較強,大部分來自同一地區(qū)的栽培菌株往往能夠聚為一類,也有一些栽培菌株和其他地區(qū)栽培菌株聚為一類,可能與我國金頂側(cè)耳栽培菌株引種頻繁、穿插引種等現(xiàn)象密切相關(guān)。這種現(xiàn)象在別的食用菌中也存在[16-17]。由于本研究選用了生產(chǎn)中常用18個菌株,該結(jié)果對金頂側(cè)耳系統(tǒng)學(xué)研究可提供一些參考。

    親緣關(guān)系比較接近的種可能具有相同的遺傳背景,因此通過對這些菌株間親緣關(guān)系的了解,進而可利用系統(tǒng)進化理論做出更為合理的分類和命名,還有利于篩選出適合雜交的品種,可以更有效地對金頂側(cè)耳進行遺傳育種和菌株保藏。本實驗中菌株16號離遺傳中心較遠,其遠緣優(yōu)勢應(yīng)在育種選育中應(yīng)引起重視。

    [1] 黃年來. 我國食用菌產(chǎn)業(yè)的現(xiàn)狀與未來[J]. 中國食用菌, 2000, 19(4):3-5.

    [2] 辛?xí)粤? 張桂春, 黃清榮. 榆黃菇發(fā)酵全液多糖抗腫瘤活性研究[J].食品科學(xué), 2009, 30(17): 324-325.

    [3] 張影, 包海鷹, 李玉. 珍貴藥用菌金頂側(cè)耳研究現(xiàn)狀[J]. 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報, 2003, 2(1): 54-57.

    [4] 姚方杰, 李玉. 金頂側(cè)耳交配型系統(tǒng)特性的研究[J]. 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報, 2002, 24(2): 61-63.

    [5] 王香蘭, 劉淑芳, 姜德凱, 等. 榆黃菇的三種高產(chǎn)栽培模式比較研究[J]. 中國食用菌, 2009, 28(3): 67-68.

    [6] SONG Zhenqiao, LI Xingfeng, WANG Honggang, et al. Genetic diversity and population structure of Salvia miltiorrhiza Bge in China revealed by ISSR and SRAP[J]. Genetica, 2010, 138(2): 241-249.

    [7] 宋小亞, 肖揚, 邊銀丙. ISSR標(biāo)記在黑木耳單核體遺傳分析中的應(yīng)用[J]. 菌物學(xué)報, 2007, 26(4): 528-533.

    [8] NAGARAJU J, KATHIRVEL M, KUMAR RR, et al. Genetic analysis of traditional and evolved Basmati and non-Basmati rice varieties by using fluorescence-based ISSR-PCR and SSR markers[J]. Proceedinds of the National Academy of Sciences of the United States of America,2002, 99(9): 5836-5841.

    [9] MAHMUDUL I N, BIAN Yinbing. ISSR as new markers for identification of homokaryotic protoclones of Agaricus bisporus[J]. Curr Microbiol,2010, 60(2): 92-98.

    [10] van ELSAS J D, DUARTE G F, KEIJZER-WOLTERS A, et al. Analysis of the dynamics of fungal communities in soil via fungal-specific PCR of soil DNA followed by denaturing gradient gel electrophoresis[J].Journal of Microbiological Methods, 2000, 43(2): 133-151.

    [11] PILOTTI C A, SANDERSON F R, AITKEN E A B, et al. Morphological variation and host range of two Ganoderma species from Papua New Guinea[J]. Mycopathologia, 2004, 158(2): 251-265.

    [12] KOMON-ZELAZOWSKA M, BISSETT J, ZAFARI D, et al. Genetically closely related but phenotypically divergent Trichoderma species cause green mold disease in oyster mushroom farms worldwide[J]. Appl Environ Microbiol, 2007, 73(22): 7415-7426.

    [13] 許美燕, 唐傳紅, 張勁松, 等. 利用SRAP和ISSR建立快速鑒定靈芝屬菌株的SCAR標(biāo)記[J]. 菌物學(xué)報, 2008, 27(5): 707-717.

    [14] QIN Lianhua, TAN Qi, CHEN Mingjie, et al. Use of intersimple sequence repeatsmarkers to develop strain-specific SCARmarkers for Lentinula edodes[J]. FEMS Microbiol Lett, 2006, 257(1): 112-116.

    [15] 蔡德華, 張秋勝, 董洪新, 等. 榆黃菇優(yōu)良新菌株的選育[J]. 食品科學(xué), 2009, 31(21): 301-304.

    [16] 戴玉成, 周麗偉, 楊祝良, 等. 中國食用菌名錄[J]. 菌物學(xué)報, 2010,29(1): 1-21.

    [17] 王波, 彭衛(wèi)紅, 甘炳成. 金針菇33個菌株遺傳多樣性與組織分離菌株鑒定的醋酶同工酶分析[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報, 2008, 21(2): 448-450.

    Genetic Polymorphism Analysis of Pleurotus cituinopileatus by ISSR

    ZHANG Qiu-sheng1,XU Bing-lian2,LIU Lin-de1,CHENG Xian-hao1,GAO Xing-xi1,SHI Ya-li3
    (1. School of Life Science, Ludong University, Yantai 264025, China;2. School of Mathmatics and Information, Ludong University, Yantai 264025, China;3. Sports Institute, Ludong University, Yantai 264025, China)

    Pleurotus cituinopileatus is an important kind of edible medicinal fungi. Totally 18 kinds of Pleurotus cituinopileatus strains were collected from some markets in China. Inter-simple sequence repeat (ISSR) method was used to analyze genetic polymorphism of Pleurotus cituinopileatus strains. A total of 102 DNA fragments were amplified by using eleven ISSR primers,and 78 of these fragments were polymorphic with polymorphism rate of 76.4%. Meanwhile, high-level genetic polymorphism was observed in Pleurotus cituinopileatus and the genetic similarity coefficients (GSC) were between 0.50 and 0.96. These 18 strains were divided into 2 groups at GSC of 0.62 and 7 groups at GSC of 0.75 according to the cluster analysis of UPGMA method. Strain 16 had an independent genetic system. These results will provide a scientific fundament to accelerate genetic breeding and identification of cultivated strains of Pleurotus cituinopileatus.

    Pleurotus cituinopileatus;inter-simple sequence repeat (ISSR);polymorphism;intra-specific relationship

    S646

    A

    1002-6630(2011)05-0172-04

    2010-05-16

    “十一五”國家科技支撐計劃項目(2008BADA1B04);魯東大學(xué)人才基金項目(LY20063303);

    魯東大學(xué)創(chuàng)新團隊建設(shè)項目;魯東大學(xué)學(xué)科建設(shè)經(jīng)費項目

    張秋勝(1974—),男,講師,博士,研究方向為菌物遺傳學(xué)。E-mail:qiushengzhang@126.com

    猜你喜歡
    側(cè)耳金頂條帶
    “暖心島”職工健康系列心理團輔活動走進金頂街
    工會博覽(2022年34期)2023-01-23 05:38:29
    野生側(cè)耳分子鑒定及生物栽培轉(zhuǎn)化技術(shù)的研究
    金頂街街道總工會開展職工溝通會
    工會博覽(2022年14期)2022-07-16 05:48:52
    不同貯藏溫度對糙皮側(cè)耳冷藏后貨架期品質(zhì)和細胞壁變化的影響
    三種側(cè)耳提取物抗氧化活性及對小鼠免疫功能的影響
    食用菌(2019年4期)2019-08-27 06:35:00
    峨嵋金頂
    寶藏(2018年1期)2018-04-18 07:39:52
    兩株野生側(cè)耳屬菌株鑒定及生物學(xué)特性研究
    基于條帶模式GEOSAR-TOPS模式UAVSAR的雙基成像算法
    基于 Savitzky-Golay 加權(quán)擬合的紅外圖像非均勻性條帶校正方法
    一種基于MATLAB的聲吶條帶圖像自動拼接算法
    海岸工程(2014年4期)2014-02-27 12:51:28
    欧美一区二区亚洲| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 午夜免费激情av| 色综合欧美亚洲国产小说| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国语自产精品视频在线第100页| 国产三级中文精品| 97超视频在线观看视频| 美女cb高潮喷水在线观看| 精品日产1卡2卡| 在线观看舔阴道视频| 老汉色∧v一级毛片| 在线观看一区二区三区| 免费搜索国产男女视频| 国产成人啪精品午夜网站| 日韩欧美在线乱码| 欧美日韩黄片免| 国产欧美日韩一区二区三| 99国产精品一区二区蜜桃av| 亚洲av不卡在线观看| 久久久久免费精品人妻一区二区| 午夜影院日韩av| 久久久久久大精品| 女警被强在线播放| 亚洲成av人片在线播放无| 一区二区三区高清视频在线| 国产亚洲欧美在线一区二区| 一级黄片播放器| 成人欧美大片| 久久久久久人人人人人| 久久香蕉国产精品| 可以在线观看的亚洲视频| 亚洲在线观看片| 午夜两性在线视频| АⅤ资源中文在线天堂| 亚洲人与动物交配视频| 久久精品国产综合久久久| 悠悠久久av| 一二三四社区在线视频社区8| 午夜精品在线福利| 午夜精品一区二区三区免费看| 99视频精品全部免费 在线| 黄色女人牲交| 国产亚洲av嫩草精品影院| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 久久精品91蜜桃| 一进一出好大好爽视频| 亚洲av免费高清在线观看| 一本精品99久久精品77| 日本黄大片高清| 色吧在线观看| 午夜精品在线福利| 国产激情欧美一区二区| av天堂在线播放| 久久久国产精品麻豆| 国产精品乱码一区二三区的特点| 亚洲国产精品sss在线观看| 香蕉丝袜av| 国产视频内射| 欧美激情久久久久久爽电影| 免费av毛片视频| 久久亚洲真实| 真实男女啪啪啪动态图| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产精品,欧美在线| 在线观看午夜福利视频| 成人一区二区视频在线观看| 国产精品综合久久久久久久免费| 亚洲av美国av| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 欧美高清成人免费视频www| 日韩人妻高清精品专区| 叶爱在线成人免费视频播放| 成熟少妇高潮喷水视频| 在线观看66精品国产| 他把我摸到了高潮在线观看| 亚洲最大成人手机在线| 久久久国产成人精品二区| 国产高清有码在线观看视频| 亚洲18禁久久av| 中亚洲国语对白在线视频| 一级作爱视频免费观看| 日本三级黄在线观看| 麻豆一二三区av精品| 在线播放国产精品三级| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 欧美日本视频| 午夜视频国产福利| 亚洲美女黄片视频| 男女之事视频高清在线观看| www.熟女人妻精品国产| 悠悠久久av| 色综合站精品国产| 99久国产av精品| 国产毛片a区久久久久| 一级a爱片免费观看的视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国产av一区在线观看免费| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 亚洲18禁久久av| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲一区二区三区不卡视频| 久久这里只有精品中国| 日韩高清综合在线| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 久久人人精品亚洲av| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲国产高清在线一区二区三| 久久精品国产清高在天天线| 国产成人aa在线观看| 久久久久久久久中文| 日本与韩国留学比较| 一个人免费在线观看电影| 女人被狂操c到高潮| 亚洲最大成人中文| 精品国产美女av久久久久小说| www.www免费av| 在线播放国产精品三级| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 久久香蕉国产精品| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 在线免费观看的www视频| 禁无遮挡网站| 在线国产一区二区在线| 一区福利在线观看| 俺也久久电影网| 成人欧美大片| 精品久久久久久,| 嫩草影院入口| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 日本五十路高清| 精品免费久久久久久久清纯| 真实男女啪啪啪动态图| 老熟妇仑乱视频hdxx| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 欧美一级毛片孕妇| 午夜两性在线视频| 香蕉丝袜av| 国产成人啪精品午夜网站| 欧美三级亚洲精品| 亚洲av一区综合| 99热这里只有精品一区| 中文亚洲av片在线观看爽| 免费高清视频大片| 国产v大片淫在线免费观看| av福利片在线观看| 国产亚洲欧美在线一区二区| 精品午夜福利视频在线观看一区| 成年女人看的毛片在线观看| 一个人免费在线观看电影| 色尼玛亚洲综合影院| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 久久精品国产清高在天天线| 欧美成人性av电影在线观看| 最新在线观看一区二区三区| 最近最新中文字幕大全电影3| 在线播放无遮挡| 999久久久精品免费观看国产| 国产欧美日韩精品亚洲av| x7x7x7水蜜桃| 亚洲专区国产一区二区| 深夜精品福利| 亚洲一区高清亚洲精品| 中文亚洲av片在线观看爽| 久久精品综合一区二区三区| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 悠悠久久av| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 婷婷精品国产亚洲av在线| 岛国在线免费视频观看| 国产色爽女视频免费观看| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 听说在线观看完整版免费高清| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲专区中文字幕在线| 午夜老司机福利剧场| 天堂网av新在线| 日本与韩国留学比较| 国模一区二区三区四区视频| 色综合婷婷激情| 国产精品av视频在线免费观看| a在线观看视频网站| 看片在线看免费视频| 亚洲国产精品sss在线观看| 午夜免费激情av| 韩国av一区二区三区四区| 香蕉av资源在线| 99久久九九国产精品国产免费| 日本精品一区二区三区蜜桃| 色综合欧美亚洲国产小说| 999久久久精品免费观看国产| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 亚洲av成人精品一区久久| 神马国产精品三级电影在线观看| 免费看十八禁软件| a级一级毛片免费在线观看| 3wmmmm亚洲av在线观看| 女警被强在线播放| 久久精品91蜜桃| 成年女人永久免费观看视频| 国产av一区在线观看免费| 午夜福利高清视频| 99riav亚洲国产免费| 午夜视频国产福利| 88av欧美| 欧美黄色淫秽网站| 欧美三级亚洲精品| 最近最新中文字幕大全免费视频| 可以在线观看毛片的网站| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 成年人黄色毛片网站| 国产午夜精品论理片| 岛国视频午夜一区免费看| 国产中年淑女户外野战色| 国产精品1区2区在线观看.| 国产精品一区二区三区四区久久| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 欧美最新免费一区二区三区 | 久久午夜亚洲精品久久| 免费观看人在逋| 色av中文字幕| 黄色日韩在线| 热99在线观看视频| 午夜福利视频1000在线观看| 国产高清三级在线| 国产极品精品免费视频能看的| 亚洲av成人av| 美女 人体艺术 gogo| 国产毛片a区久久久久| 精品乱码久久久久久99久播| 男女视频在线观看网站免费| x7x7x7水蜜桃| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 国产不卡一卡二| 欧美成人性av电影在线观看| 婷婷丁香在线五月| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 国产高清激情床上av| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 欧美日韩精品网址| 免费观看人在逋| 啦啦啦韩国在线观看视频| avwww免费| x7x7x7水蜜桃| 国产一区二区三区视频了| 亚洲av一区综合| 免费在线观看日本一区| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 久久久久性生活片| 老汉色∧v一级毛片| 免费搜索国产男女视频| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产亚洲欧美在线一区二区| 观看免费一级毛片| 精品国产三级普通话版| 国产成人欧美在线观看| 国产乱人视频| tocl精华| 亚洲成人免费电影在线观看| av视频在线观看入口| 久久久久久久久中文| 欧美黄色片欧美黄色片| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美 | 操出白浆在线播放| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 99国产精品一区二区蜜桃av| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 哪里可以看免费的av片| 日本一本二区三区精品| 国产主播在线观看一区二区| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲中文字幕日韩| 老鸭窝网址在线观看| 搡老熟女国产l中国老女人| 老汉色av国产亚洲站长工具| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 亚洲国产精品成人综合色| 在线国产一区二区在线| 久久久久久久午夜电影| 怎么达到女性高潮| 午夜免费观看网址| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 精品久久久久久久久久免费视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| xxxwww97欧美| 91久久精品电影网| 桃红色精品国产亚洲av| 在线a可以看的网站| 亚洲av一区综合| 免费一级毛片在线播放高清视频| 亚洲熟妇熟女久久| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 男人舔女人下体高潮全视频| 成熟少妇高潮喷水视频| 欧美av亚洲av综合av国产av| 首页视频小说图片口味搜索| 婷婷精品国产亚洲av在线| 亚洲国产色片| 全区人妻精品视频| 老鸭窝网址在线观看| 99国产精品一区二区三区| 久久精品综合一区二区三区| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 久久中文看片网| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 51国产日韩欧美| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 国产精品av视频在线免费观看| 日韩中文字幕欧美一区二区| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 成人av在线播放网站| 亚洲色图av天堂| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 老司机福利观看| 九九在线视频观看精品| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 男女视频在线观看网站免费| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 97碰自拍视频| 国产美女午夜福利| 一进一出抽搐gif免费好疼| 99riav亚洲国产免费| 国产伦一二天堂av在线观看| 午夜免费观看网址| 最近在线观看免费完整版| 日韩欧美国产在线观看| 三级国产精品欧美在线观看| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 99久久精品国产亚洲精品| 国产亚洲精品av在线| 国产高清激情床上av| 欧美中文日本在线观看视频| 精品久久久久久,| 夜夜夜夜夜久久久久| 精品电影一区二区在线| 亚洲人与动物交配视频| 日韩人妻高清精品专区| 母亲3免费完整高清在线观看| 日韩欧美在线乱码| 99国产综合亚洲精品| 亚洲午夜理论影院| 天天添夜夜摸| 国产亚洲精品一区二区www| 久久久国产精品麻豆| 亚洲国产中文字幕在线视频| 成人特级黄色片久久久久久久| 高清日韩中文字幕在线| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 搞女人的毛片| 香蕉av资源在线| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 一级毛片高清免费大全| 一区福利在线观看| 99在线视频只有这里精品首页| 国产乱人伦免费视频| 精品久久久久久久毛片微露脸| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 午夜影院日韩av| 国产真实乱freesex| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 精品午夜福利视频在线观看一区| 我的老师免费观看完整版| 亚洲黑人精品在线| 成人欧美大片| 久久精品国产清高在天天线| 久久精品91无色码中文字幕| 国产欧美日韩精品一区二区| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 99国产综合亚洲精品| 高清在线国产一区| 午夜福利在线在线| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 女人被狂操c到高潮| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 成人亚洲精品av一区二区| 亚洲电影在线观看av| 最近视频中文字幕2019在线8| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 99精品久久久久人妻精品| av天堂中文字幕网| 国产成人影院久久av| 亚洲电影在线观看av| 亚洲成av人片免费观看| 12—13女人毛片做爰片一| 1024手机看黄色片| ponron亚洲| 1024手机看黄色片| 国产精品影院久久| 首页视频小说图片口味搜索| avwww免费| www.熟女人妻精品国产| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 午夜视频国产福利| 免费观看人在逋| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 国产精品 国内视频| 亚洲色图av天堂| 一区二区三区免费毛片| 国产精品久久久久久久电影 | 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| xxxwww97欧美| 一a级毛片在线观看| svipshipincom国产片| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 级片在线观看| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 午夜日韩欧美国产| 我要搜黄色片| 国产精品1区2区在线观看.| 日韩高清综合在线| 日韩欧美 国产精品| 少妇人妻精品综合一区二区 | 亚洲av美国av| 一区二区三区国产精品乱码| 欧美一区二区亚洲| 成年版毛片免费区| 给我免费播放毛片高清在线观看| 一区二区三区高清视频在线| 桃色一区二区三区在线观看| 最新中文字幕久久久久| 男女那种视频在线观看| 国产亚洲欧美在线一区二区| 香蕉久久夜色| 天天躁日日操中文字幕| 国产极品精品免费视频能看的| 欧美日韩一级在线毛片| 婷婷精品国产亚洲av在线| 久久草成人影院| 男人舔女人下体高潮全视频| 男女那种视频在线观看| 九九热线精品视视频播放| 国产成+人综合+亚洲专区| 狠狠狠狠99中文字幕| 手机成人av网站| 一本久久中文字幕| 成人国产一区最新在线观看| 99久久综合精品五月天人人| 国产精品久久久人人做人人爽| 免费一级毛片在线播放高清视频| 露出奶头的视频| 国产精品亚洲美女久久久| 欧美在线一区亚洲| 国产极品精品免费视频能看的| 国产成人aa在线观看| 村上凉子中文字幕在线| 亚洲avbb在线观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产亚洲精品av在线| 69av精品久久久久久| 全区人妻精品视频| 在线免费观看不下载黄p国产 | 嫩草影视91久久| 成年女人毛片免费观看观看9| av欧美777| 国产精品一区二区免费欧美| 露出奶头的视频| 国内精品一区二区在线观看| 午夜老司机福利剧场| 久久久久久人人人人人| 成年女人毛片免费观看观看9| 久久久成人免费电影| 怎么达到女性高潮| 欧美日韩乱码在线| 亚洲专区国产一区二区| 操出白浆在线播放| 久久精品国产自在天天线| 精品久久久久久久久久久久久| 亚洲熟妇熟女久久| 天天一区二区日本电影三级| 免费观看的影片在线观看| 91字幕亚洲| 国产精品亚洲av一区麻豆| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 最近最新中文字幕大全电影3| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 757午夜福利合集在线观看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 一进一出抽搐gif免费好疼| 国产精品亚洲av一区麻豆| 他把我摸到了高潮在线观看| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 91久久精品国产一区二区成人 | 18美女黄网站色大片免费观看| 精品福利观看| 久久久久久久精品吃奶| 免费av观看视频| 国产成年人精品一区二区| 国产精品久久电影中文字幕| 神马国产精品三级电影在线观看| 国产成人aa在线观看| 免费在线观看影片大全网站| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 一个人看的www免费观看视频| 欧美成人a在线观看| 精品福利观看| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 少妇高潮的动态图| а√天堂www在线а√下载| 亚洲中文日韩欧美视频| 极品教师在线免费播放| 九九在线视频观看精品| 亚洲欧美激情综合另类| 香蕉av资源在线| 中文字幕高清在线视频| 老鸭窝网址在线观看| 国产爱豆传媒在线观看| 亚洲人成网站在线播| 亚洲18禁久久av| 国产精品99久久久久久久久| 国产成人影院久久av| 精品人妻1区二区| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 久久久成人免费电影| 真实男女啪啪啪动态图| 亚洲熟妇熟女久久| 色综合婷婷激情| 国产精品精品国产色婷婷| 日韩欧美在线乱码| 美女 人体艺术 gogo| 一a级毛片在线观看| 99热精品在线国产| 18禁美女被吸乳视频| 国产一区二区三区视频了| 国产单亲对白刺激| 一二三四社区在线视频社区8| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 亚洲成av人片免费观看| 一级a爱片免费观看的视频| 淫妇啪啪啪对白视频| 男女之事视频高清在线观看| 三级国产精品欧美在线观看| 精品日产1卡2卡| 床上黄色一级片| 少妇高潮的动态图| 女警被强在线播放| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 精品一区二区三区av网在线观看| 叶爱在线成人免费视频播放| 亚洲电影在线观看av| 性欧美人与动物交配| 国产高清视频在线观看网站| 757午夜福利合集在线观看| 一级作爱视频免费观看| 精品国产三级普通话版| 少妇的逼水好多| 免费看十八禁软件| 欧美日本亚洲视频在线播放| 99热这里只有是精品50| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 动漫黄色视频在线观看| 首页视频小说图片口味搜索| 波多野结衣高清作品| 757午夜福利合集在线观看| 成人性生交大片免费视频hd| 一区福利在线观看| 日韩欧美在线乱码| 桃红色精品国产亚洲av| 91av网一区二区| 日日夜夜操网爽| 欧美在线一区亚洲| 国产精品影院久久| 国产精品一区二区免费欧美| 两个人视频免费观看高清| 午夜福利高清视频| 久久久久精品国产欧美久久久| 九色成人免费人妻av| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 日本一本二区三区精品| а√天堂www在线а√下载| 久久久久久九九精品二区国产| 色av中文字幕| 亚洲无线在线观看| 在线观看免费视频日本深夜| 桃色一区二区三区在线观看| 十八禁网站免费在线| 国产乱人伦免费视频| 欧美色欧美亚洲另类二区| 日本精品一区二区三区蜜桃| 婷婷亚洲欧美| 久久久久性生活片| 国产高清视频在线观看网站| 亚洲av五月六月丁香网| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲18禁久久av| 欧美不卡视频在线免费观看| 老司机午夜十八禁免费视频| 五月玫瑰六月丁香| 欧美激情久久久久久爽电影| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲精品色激情综合| 欧美不卡视频在线免费观看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 国语自产精品视频在线第100页| av片东京热男人的天堂| 久久精品影院6| 精品福利观看| 美女高潮的动态| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 亚洲av二区三区四区| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 国产精品亚洲一级av第二区| 91麻豆av在线| a级毛片a级免费在线| 亚洲国产高清在线一区二区三| 校园春色视频在线观看| 久久久精品欧美日韩精品|