厚樸等藥材TLC條件的優(yōu)選試驗(yàn)

廣西桂林食品藥品檢驗(yàn)所（541002）趙純玉 饒偉文 覃曉

《中國藥典》2005版一部收載了厚樸、厚樸花、竹節(jié)參、蓽茇、豆蔻等5種藥材薄層色譜（TLC）鑒別[1][2]，其采用的展開系統(tǒng)均含有毒性很大的苯。本研究按2010版《中國藥典》修訂任務(wù)的要求對(duì)TLC展開系統(tǒng)苯替代品種進(jìn)行研究，建立了厚樸、厚樸花、竹節(jié)參、蓽茇、豆蔻等的TLC新方法，收效良好，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 儀器與試藥

TLC VISUALIZER薄層色譜照相儀；硅膠G預(yù)制板 100mm×100mm、100mm×200mm（青島海洋化工廠分廠生產(chǎn) 批號(hào)：20081211、20070607）；薄層色譜展開缸①100mm×100mm，雙槽，②200mm×100mm，雙槽；對(duì)照品：厚樸酚（批號(hào)：11029-200309）、和厚樸酚（批號(hào)：0730-200206）、桉油精（批號(hào)：110788-9202）、齊敦果酸（批號(hào)：110709-200304）、人參二醇（批號(hào)：110701-200412）、人參三醇（批號(hào)：110702-200210）、胡椒堿（批號(hào)：0775-9702）均由中國藥品生物制品檢定所提供；苯、環(huán)己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、冰乙酸、石油醚（60℃～90℃）、濃氨試液、甲醇、丙酮均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 TLC展開系統(tǒng)的優(yōu)選

2.1.1 厚樸 取本品粉末0.5g，加甲醇5ml，密塞，振搖30min，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取厚樸酚對(duì)照品與和厚樸酚對(duì)照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷－二氯甲烷－乙酸乙酯－濃氨試液（5∶2∶4∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，檢視。先后對(duì)36個(gè)展開系統(tǒng)進(jìn)行了比較，除本系統(tǒng)外還有2個(gè)系統(tǒng)，①甲苯－甲醇（25∶1），②環(huán)己烷－二氯甲烷－乙酸乙酯－濃氨試液（4∶1∶3∶0.5）也能有效地將主斑點(diǎn)與雜質(zhì)斑點(diǎn)分離，但本系統(tǒng)分離效果最佳，重現(xiàn)性好，明顯優(yōu)于原藥典含苯系統(tǒng)。見附圖1。

2.1.2 厚樸花 取本品粉末1g，加甲醇8ml，密塞，其余同 2.1.1厚樸項(xiàng)下。本系統(tǒng)能使主成分斑點(diǎn)與雜質(zhì)斑點(diǎn)明顯分離，避免了原藥典含苯系統(tǒng)由于斑點(diǎn)重疊給判定帶來的困難。如附圖2 所示，原藥典含苯系統(tǒng)中3個(gè)供試品在與對(duì)照品相應(yīng)的位置上有隱約可見的斑點(diǎn)（見A 4，5，6），但在新建的TLC鑒別系統(tǒng)中則未檢出厚樸酚與和厚樸酚（見C 3，4，5）。繼而用HPLC確認(rèn)，結(jié)果與新TLC鑒別一致。

附圖1 厚樸不同展開系統(tǒng)TLC對(duì)比

附圖2 厚樸花不同展開系統(tǒng)TLC對(duì)比

附圖3 竹節(jié)參不同展開系統(tǒng)TLC對(duì)比

2.1.3 竹節(jié)參 取本品粉末1g，加水5～10滴，攪勻，再加水飽和的正丁醇溶液10ml，密塞，振搖約10min，放置過夜，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)恿蛩崤c30%乙醇的混合溶液（1～20）10ml，加熱回流2小時(shí)，用三氯甲烷20ml振搖提取，分取三氯甲烷層，用水10ml洗滌，棄去洗液，三氯甲烷液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取齊敦果酸對(duì)照品、人參二醇對(duì)照品、人參三醇對(duì)照品，分別加甲醇制成每1ml含齊敦果酸2mg，人參二醇，人參三醇各0.5mg的三種溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液5μl、對(duì)照品溶液各1μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷－二氯甲烷－乙酸乙酯－冰醋酸（20∶5∶8∶0.5）展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，檢視。先后對(duì)28個(gè)展開系統(tǒng)進(jìn)行了比較，結(jié)果為本系統(tǒng)所顯斑點(diǎn)的顏色與分離效果最佳，明顯優(yōu)于原藥典含苯系統(tǒng)，見附圖3。

2.1.4 蓽茇 取本品粉末0.8g，加無水乙醇5ml，超聲處理30min，濾過，濾液作為供試品溶液。另取胡椒堿對(duì)照品，置棕色量瓶中，加無水乙醇制成每1ml含4mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷－乙酸乙酯－丙酮（7∶2∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的藍(lán)色熒光斑點(diǎn)；噴以10%硫酸乙醇溶液加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，檢視。本系統(tǒng)是從10個(gè)展開系統(tǒng)中比較而得，從附圖4可見，展開結(jié)果與原藥典含苯系統(tǒng)比較，主成分所顯斑點(diǎn)的顏色相當(dāng)，主成分與其他成分的分離度優(yōu)于原藥典含苯系統(tǒng)。

附圖4 蓽茇不同展開系統(tǒng)TLC對(duì)比

2.1.5 豆蔻 取豆蔻仁粉末（過三號(hào)篩）約5g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加水200ml，連接揮發(fā)油測(cè)定器，自測(cè)定器上端加水至刻度3ml，再加正己烷2～3ml，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持2h，放冷，分取正己烷液，通過鋪有無水硫酸鈉約1g的漏斗濾過，濾液置5ml量瓶中，揮發(fā)油測(cè)定器內(nèi)壁用正己烷少量洗滌，洗液并入同一量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取桉油精對(duì)照品適量，加正己烷制成每1ml含25mg的溶液，作為對(duì)照品溶液（必要時(shí)可分別加乙醇適量稀釋）。照薄層色譜法（附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷－二氯甲烷－乙酸乙酯（15∶5∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，立即機(jī)檢視。由于主成分為揮發(fā)油，展出斑點(diǎn)極易擴(kuò)散，先后對(duì)14個(gè)展開系統(tǒng)進(jìn)行了比較，結(jié)果以本系統(tǒng)為滿意。見附圖5。

附圖5 豆蔻不同展開系統(tǒng)TLC對(duì)比

2.2 系統(tǒng)耐用性試驗(yàn) 對(duì)上述5種藥材的新TLC鑒別展開系統(tǒng)進(jìn)行了不同溫度(5℃、20℃、30℃)、濕度（40%、50%、80%、90%）下的展開效果比較；進(jìn)行了不同品牌、不同類型的薄層板的展開效果比較，即用不同品牌、不同類型的預(yù)制硅膠G板、預(yù)制硅膠GF254板試驗(yàn)；進(jìn)行了不同品牌的試劑及各種試劑比例改變下的展開效果比較等耐用性考查，結(jié)果各系統(tǒng)中供試品所顯主斑點(diǎn)的顏色、位置以及與雜質(zhì)斑點(diǎn)的分離度均變化不大，令人滿意。

3 討論

3.1 新建上述5種藥材TLC鑒別系統(tǒng)，試劑毒性小、污染少，在確保分離效果的前提下，有效替代了原藥典含苯系統(tǒng)，達(dá)到了高效、環(huán)保的目的，已被新版藥典采用。

3.2 本鑒別不受藥材雜質(zhì)成分的干擾，各系統(tǒng)的分離度均優(yōu)于原藥典含苯系統(tǒng)。

3.3 中國藥典2005年版中，厚樸與厚樸花的TLC鑒別條件相同，供試液制備濃度相近，但實(shí)際上，厚樸花中厚樸酚與和厚樸酚的含量只有厚樸中含量的約十分之一。如按原來的點(diǎn)樣量，TLC斑點(diǎn)很淡。因此，現(xiàn)把供試品溶液點(diǎn)樣量修訂為10μl。

3.4 本研究共收集15批厚樸花樣品，8批次樣品的TLC色譜中沒有檢出厚樸酚與和厚樸酚的斑點(diǎn)，和HPLC結(jié)果一致?？赡芨鷺悠凡煌暾ㄖ挥谢ò辏騼?chǔ)存時(shí)間較長，或品種不對(duì)有關(guān)，有待進(jìn)一步探討。