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    熱處理結(jié)合β-氨基丁酸對(duì)蘋(píng)果采后青霉病的控制

    2011-10-13 08:07:26李永才陳松江申曉晶吳岳華
    食品科學(xué) 2011年6期
    關(guān)鍵詞:效果

    李永才,尹 燕,陳松江,畢 陽(yáng),申曉晶,吳岳華

    (甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,甘肅 蘭州 730070)

    熱處理結(jié)合β-氨基丁酸對(duì)蘋(píng)果采后青霉病的控制

    李永才,尹 燕,陳松江,畢 陽(yáng),申曉晶,吳岳華

    (甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,甘肅 蘭州 730070)

    研究熱處理、β-氨基丁酸(BABA)及其復(fù)合處理對(duì)蘋(píng)果青霉病控制效果的影響,并對(duì)其復(fù)合處理?xiàng)l件進(jìn)行優(yōu)化。研究表明45℃熱處理和BABA單獨(dú)處理均能降低處理后損傷接種Penicillium expansum的蘋(píng)果病斑直徑的擴(kuò)展,45℃熱處理8min與50mmol/L BABA處理5min其病斑直徑僅為對(duì)照的82.86%、80.76%。初步復(fù)合處理實(shí)驗(yàn)表明熱與BABA復(fù)合處理先后順序?qū)η嗝共】刂菩Ч麩o(wú)顯著性差異,處理間隔時(shí)間對(duì)控制效果有一定的影響。對(duì)復(fù)合處理?xiàng)l件進(jìn)行正交試驗(yàn)優(yōu)化,結(jié)果表明熱處理時(shí)間對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響最大,最優(yōu)處理?xiàng)l件為45℃熱處理6min、間隔10min后以50mmol/L BABA浸泡處理。驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)表明,熱與BABA復(fù)合處理能有效縮短熱處理時(shí)間并顯著地提高對(duì)蘋(píng)果采后青霉病的控制效果。

    蘋(píng)果;青霉病;熱處理;β-氨基丁酸

    擴(kuò)展青霉(Penicillium expansum)引起的青霉病是蘋(píng)果貯藏期間的主要侵染性病害之一,即使在低溫貯藏條件下蘋(píng)果感病后也會(huì)發(fā)生腐爛。到目前為止,生產(chǎn)實(shí)踐中仍主要依靠人工合成殺菌劑來(lái)防治水果采后病害的發(fā)生。但是,長(zhǎng)期使用化學(xué)藥劑導(dǎo)致病菌產(chǎn)生的抗藥性,降低了化學(xué)藥劑的防病效果,同時(shí)生產(chǎn)上頻繁使用化學(xué)藥劑造成農(nóng)藥殘毒量增加不但威脅著人類(lèi)的健康,而且會(huì)造成環(huán)境污染。因此,研究并利用化學(xué)殺菌劑的替代物來(lái)防治果蔬的病害已勢(shì)在必行[1-3]。

    β-氨基丁酸(β-aminobutyric acid,BABA)是從經(jīng)暴曬的番茄根系中分離得到的一種次生代謝非蛋白氨基酸。Oort等[4]在1960年最早發(fā)現(xiàn)用BABA處理番茄植株后能誘導(dǎo)番茄對(duì)晚疫病的抗性,通過(guò)利用擬南芥突變體作為實(shí)驗(yàn)材料開(kāi)展BABA誘導(dǎo)植物抗病性的研究,越來(lái)越顯示出BABA作為一種高效、廣譜的非蛋白氨基酸植物誘抗劑的潛能。近年來(lái),研究還發(fā)現(xiàn)BABA能誘導(dǎo)葡萄、馬鈴薯等多種作物產(chǎn)生對(duì)多種病害的抗性[5-8]。

    采后熱處理是用來(lái)控制采后果蔬的成熟衰老,減少病害與損失的一種處理方法,作為一種可替代化學(xué)防腐的安全無(wú)毒的物理方法,已在多種果蔬的采后病害控制中進(jìn)行了研究和應(yīng)用[9-10]。熱處理可通過(guò)促使病原物細(xì)胞果膠酶鈍化或相關(guān)蛋白變性、脂質(zhì)降解、激素破壞、營(yíng)養(yǎng)耗竭或有毒中間產(chǎn)物積累導(dǎo)致代謝失調(diào)而直接作用于采后病原物[11]。研究發(fā)現(xiàn),38、42℃和46℃的熱水處理能有效地抑制P. expansum孢子的萌發(fā)[12],且38℃、96h熱空氣處理能較好控制在處理前接種P. expansum的蘋(píng)果青霉病的發(fā)生[12-16]。熱處理還能通過(guò)產(chǎn)生抗菌物質(zhì)或病程相關(guān)蛋白,或提高抗性酶活性等而誘導(dǎo)果實(shí)產(chǎn)生抗病性[17-18]。邵興鋒等[19]研究發(fā)現(xiàn)熱處理后再接種病原菌能顯著降低蘋(píng)果青霉病的發(fā)病率,且能顯著提高果實(shí)組織中苯丙氨酸解氨酶(PAL)和過(guò)氧化物酶(POD)活性、木質(zhì)素和總酚含量。

    熱水和BABA處理雖然是代替化學(xué)合成殺菌劑的潛在采后病害控制方法,但其單獨(dú)使用在控制效果上相對(duì)于化學(xué)殺菌劑仍存在一定的局限性,因此必須加強(qiáng)采后病害的綜合控制方法研究。本實(shí)驗(yàn)旨在研究熱水與BABA復(fù)合處理對(duì)蘋(píng)果青霉病的防治效果,并對(duì)其最佳的復(fù)合處理方案進(jìn)行探討。

    1 材料與方法

    1.1 材料、試劑與儀器

    國(guó)光蘋(píng)果(Malus domesticaBorkh. cv. Ralls Janet)為市購(gòu),剔除病、傷果,選擇大小、果色均勻且成熟度一致的果實(shí),分組待用;病原菌擴(kuò)展青霉(Penicillium expansum)分離于腐爛的蘋(píng)果上。擴(kuò)展青霉在馬鈴薯培養(yǎng)基(馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂20g、水1000mL。115℃滅菌20min)28℃培養(yǎng)7d,用接種環(huán)在培養(yǎng)好的霉菌試管斜面上刮取適量孢子,轉(zhuǎn)移到無(wú)菌生理鹽水中,用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),并用無(wú)菌生理鹽水調(diào)整至所需濃度,待用。

    β-氨基丁酸 美國(guó)Sigma公司。

    HH- 4型恒溫水浴鍋 金壇市榮華儀器制造有限公司;超凈工作臺(tái) 蘇凈集團(tuán)蘇州安泰技術(shù)有限公司;高壓滅菌鍋 北京廣順科技發(fā)展有限公司;電熱恒溫培養(yǎng)箱 上海一恒科技有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 熱處理溫度和時(shí)間的確定

    蘋(píng)果先用體積分?jǐn)?shù)2%的次氯酸鈉溶液浸泡 2min,清水沖洗,晾干。然后分兩組處理。第1組:在2 0(常溫,對(duì)照)、40、45℃和50℃的恒溫水浴鍋中處理8min;第2組:在45℃恒溫水浴鍋中分別處理3、8、13min和18min,以不處理(0min)為對(duì)照。處理后晾干,48h后用滅菌接種器(直徑3mm),在蘋(píng)果赤道部位均勻刺4個(gè)深2mm的孔,隨后取20μL 5×105CFU/mL擴(kuò)展青霉孢子懸浮液接入孔內(nèi)。經(jīng)以上處理的果實(shí)經(jīng)聚乙烯(PE)袋包裝后,室溫(20℃±2℃)貯藏7d,測(cè)病斑直徑。

    1.2.2 BABA處理濃度的確定

    選擇均勻一致、無(wú)傷病的果實(shí),用2%次氯酸鈉浸泡2min,清水沖洗后,在0、25、50、100mmol/L BABA溶液中浸泡5min,自然風(fēng)干后,用PE袋包裝后室溫存放,48h后接種病原物,接種方法同1.2.1節(jié)。處理的果實(shí)PE袋包裝后室溫(20℃±2℃)貯藏7d,測(cè)病斑直徑。

    1.2.3 熱與BABA復(fù)合處理順序與間隔時(shí)間確定

    在1.2.1節(jié)和1.2.2節(jié)最佳條件的基礎(chǔ)上,對(duì)消毒的果實(shí)分別進(jìn)行45℃熱浸泡8min后,間隔10、15、20、25min用50mmol/L BABA浸泡處理;50mmol/L BABA浸泡后,間隔10、15、20、25min進(jìn)行45℃熱處理8min,自然風(fēng)干后,用PE袋包裝后室溫下存放,48h后接種病原物,接種方法同1.2.1節(jié)。以常溫處理為對(duì)照。處理后果實(shí)PE袋包裝后室溫(20℃±2℃)貯藏7d,測(cè)病斑直徑。

    1.2.4 熱和BABA復(fù)合處理?xiàng)l件優(yōu)選

    在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上,按L9(34)正交表設(shè)計(jì)(表1)研究熱處理溫度、BABA濃度、熱處理時(shí)間、復(fù)合處理間隔時(shí)間等因素對(duì)蘋(píng)果青霉病的控制效果。

    表1 熱及BABA復(fù)合處理正交試驗(yàn)因素水平Table 1 Factors and levels in orthogonal array

    1.3 數(shù)據(jù)處理

    試驗(yàn)結(jié)果用SPSS/PC 統(tǒng)計(jì)軟件(版本14.0)進(jìn)行鄧肯氏多重差異分析(P<0.05),對(duì)于正交試驗(yàn)采用直觀分析法分析。柱形圖中豎線(xiàn)代表標(biāo)準(zhǔn)誤,相同字母表示差異不顯著(P<0.05)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 熱處理溫度和時(shí)間對(duì)蘋(píng)果采后青霉病防治效果比較

    不同溫度和時(shí)間的熱處理對(duì)損傷接種的蘋(píng)果青霉病的擴(kuò)展均有一定影響(圖1)。其中45℃的熱處理控制效果最佳,其病斑直徑顯著低于對(duì)照(P<0.05),僅為對(duì)照的88.55%,而50℃熱處理時(shí),其病斑直徑高于對(duì)照。在對(duì)熱處理溫度篩選的基礎(chǔ)上,研究熱處理時(shí)間對(duì)蘋(píng)果青霉病的控制,結(jié)果表明45℃熱處理8min,對(duì)蘋(píng)果青霉病的控制效果最佳,其病斑直徑僅為24.17mmol/L,顯著低于其他處理和對(duì)照(P<0.05)。

    圖1 熱處理溫度(A)和熱處理時(shí)間(B)對(duì)蘋(píng)果青霉病病斑的影響Fig.1 Effect of heat treatment with different temperatures and duration time on blue mold rot lesion diameter in apple fruits

    2.2 BABA對(duì)蘋(píng)果采后青霉病的防治效果

    BABA處理后在室溫條件下貯藏7d對(duì)蘋(píng)果青霉病病斑擴(kuò)展具有一定的抑制作用。圖2表明各濃度處理后的蘋(píng)果果實(shí)青霉病病斑直徑均低于未作任何處理的對(duì)照組,其中50mmol/L BABA處理效果最佳,病斑直徑分別為23.56mmol/L,與對(duì)照(病斑直徑為29.17mmol/L)相比差異顯著(P<0.05),僅為對(duì)照的80.76%。而25mmol/L和100mmol/L BABA處理果實(shí)的病斑直徑略低于對(duì)照,差異不顯著。

    圖2 BABA濃度對(duì)蘋(píng)果青霉病病斑的影響Fig.2 Effect of BABA treatment with various concentrations on blue mold rot lesion diameter in apple fruits

    2.3 熱處理及BABA復(fù)合處理順序及間隔時(shí)間對(duì)蘋(píng)果采后青霉病的防治效果比較

    在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上進(jìn)行初步復(fù)合處理,結(jié)果表明無(wú)論先熱處理還是先BABA處理的果實(shí)的病斑直徑均顯著低于對(duì)照(P<0.05),且復(fù)合處理的病斑直徑均隨間隔時(shí)間的增長(zhǎng)呈先降低后增加的趨勢(shì)(圖3)。其中對(duì)于熱處理后BABA處理,間隔15min處理組的蘋(píng)果果實(shí)的病斑直徑最小,控制效果顯著好于其他處理(P<0.05),其病斑直徑僅為對(duì)照組的72.57%。而對(duì)于先進(jìn)行BABA處理后熱處理,間隔20min效果較好,其病斑直徑相當(dāng)于于對(duì)照組的74.67%(P<0.05)??偟膩?lái)看,復(fù)合處理先后順序不同對(duì)蘋(píng)果青霉病的控制作用效果差異不顯著,但熱處理后BABA處理效果較好。因此后面正交試驗(yàn)的復(fù)合處理順序選擇熱處理后的BABA處理。

    圖3 熱處理和BABA復(fù)合處理的不同順序和間隔時(shí)間對(duì)蘋(píng)果青霉病病斑的影響Fig.3 Effect of combined treatment with different orders and interval times on blue mold rot lesion diameter in apple fruits

    2.4 熱處理及BABA的最佳復(fù)合處理?xiàng)l件

    圖4 最優(yōu)條件下熱和BABA復(fù)合處理對(duì)蘋(píng)果青霉病病斑的影響Fig.4 Effect of combined treatment with hot water and BABA under optimal conditions on blue mold rot lesion diameter in apple fruits

    按照表1的因素水平設(shè)計(jì)L9(34)正交試驗(yàn),對(duì)復(fù)合處理?xiàng)l件進(jìn)一步優(yōu)化。由表2直觀分析可見(jiàn)各因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響的主次順序?yàn)镃>B>A>D,即熱處理時(shí)間>BABA濃度>熱處理溫度>復(fù)合處理間隔時(shí)間,其中熱處理時(shí)間對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響最大。最佳水平組合為C1B2A2D1,即復(fù)合處理對(duì)蘋(píng)果青霉病控制的最優(yōu)條件為45℃熱處理6min、用50mmol/L BABA間隔10min后浸泡處理。

    表2 熱及BABA復(fù)合處理方案正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 2 Orthogonal array layout and experimental results

    驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明以?xún)?yōu)選組合條件處理對(duì)蘋(píng)果青霉病的控制效果顯著優(yōu)于對(duì)照和熱與BABA單獨(dú)處理(圖 4)。

    3 討 論

    熱處理在果蔬采后病害的控制中已取得了一定的效果,諸如番茄預(yù)先經(jīng)38℃熱空氣處理后,能減少由灰霉菌(Botrytis cinerea)引起的爛果率[20]。38℃處理也能減少蘋(píng)果由青霉菌(P. expansum)和灰霉菌(B. cinerea)引起的爛果率[10]。芒果果實(shí)經(jīng)53℃熱水浸泡處理10min后,爛果率顯著減少[21]。52℃熱處理10min能顯著降低處理后接種炭疽病菌(Colletotrichum musae)的香蕉果實(shí)病斑直徑的擴(kuò)展[18]。但熱處理不當(dāng)容易導(dǎo)致熱傷害的發(fā)生,如高于42℃紅富士蘋(píng)果即受熱傷害,出現(xiàn)內(nèi)部崩潰現(xiàn)象[16],而過(guò)低的溫度或者較短的處理時(shí)間不能控制病害的發(fā)生。熱處理與其他方法復(fù)合控制病害的方法,可有效地降低處理溫度、縮短處理時(shí)間。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),BABA與熱復(fù)合處理,雖未能降低熱處理溫度,但與熱單獨(dú)處理相比,處理時(shí)間縮短了2min。研究還發(fā)現(xiàn)鈣處理、生物防治和電離輻射等非化學(xué)處理方法協(xié)同熱處理用于采后病害控制[22-24],效果均優(yōu)于其單獨(dú)處理。復(fù)合處理順序和間隔時(shí)間對(duì)病害的控制具有一定的影響,本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明熱與BABA復(fù)合處理先后順序?qū)刂菩Ч麩o(wú)顯著性差異,而處理間隔時(shí)間對(duì)控制效果有一定的影響,間隔15~20min效果較好。在柑橘和芒果上研究發(fā)現(xiàn),熱與電離輻射復(fù)合處理效果與其處理順序和間隔時(shí)間相關(guān),一般熱處理后24h之內(nèi)進(jìn)行輻射處理效果較好[23-24]。

    BABA具有高效、廣譜的非蛋白氨基酸植物誘抗劑的潛能。但由于抗病程度有限且BABA誘導(dǎo)的抗病性對(duì)病菌無(wú)直接殺傷作用,同時(shí)其誘抗效果受植物、病原菌及環(huán)境條件的影響而存在差異。單純用BABA 作為誘抗劑,生產(chǎn)成本高,限制了其在生產(chǎn)上的推廣應(yīng)用[5]。本研究結(jié)果表明,熱處理能有效增強(qiáng)BABA對(duì)蘋(píng)果抗病性的誘導(dǎo),有利于降低BABA的使用劑量,但有關(guān)其作用機(jī)理尚待進(jìn)一步研究。

    4 結(jié) 論

    4.1 熱和BABA單獨(dú)處理均能降低損傷接種Penicillium expansum的蘋(píng)果病斑直徑,其中,45℃熱處理8min與50mmol/L BABA處理使其病斑直徑僅分別為對(duì)照的82.86%、80.76%。

    4.2 熱處理與BABA復(fù)合處理能有效控制蘋(píng)果青霉病。復(fù)合處理中先后順序?qū)刂菩Ч麩o(wú)顯著性差異,而處理間隔時(shí)間對(duì)控制效果有一定的影響,其中熱處理后BABA處理,間隔15min處理組的果實(shí)的病斑直徑最小,控制效果顯著優(yōu)于其他處理(P<0.05),其病斑直徑僅為對(duì)照組的72.57%。

    4.3 在處理?xiàng)l件優(yōu)化試驗(yàn)中對(duì)控制效果產(chǎn)生影響的因素主次順序?yàn)闊崽幚頃r(shí)間>BABA濃度>熱處理溫度>復(fù)合處理間隔時(shí)間,其中熱處理時(shí)間對(duì)結(jié)果的影響最大。最優(yōu)處理?xiàng)l件為45℃熱處理6min、用50mmol/L BABA間隔10min 后浸泡處理。驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)表明熱處理能顯著增強(qiáng)BABA對(duì)蘋(píng)果抗青霉病的誘導(dǎo)作用,有望成為取代傳統(tǒng)化學(xué)殺菌劑的蘋(píng)果采后病害綜合防治新技術(shù)。

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    Effect of Hot Water Treatment Combined withβ-Aminonbutyric Acid on Incidence of Blue Mold Rot Disease in Postharvest Apple Fruits

    LI Yong-cai,YIN Yan,CHEN Song-jiang,BI Yang,SHEN Xiao-jing,WU Yue-hua
    (College of Food Science and Engineering, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, China)

    The effects of hot water treatment and/orβ-aminobutyric acid (BABA) treatment on the incidence of blue mold rot disease in postharvest apple fruits were studied. Combined hot water and BABA treatment conditions were also optimized by orthogonal array design. The results showed that hot water and BABA treatment alone could effectively reduce lesion diameter of apple inoculated withPenicillium expansum. The lesion diameters of apple fruits treated with 45 ℃ hot water alone for 8 min and with 50 mmol/L BABA alone for 5 min were 82.86% and 80.76%, respectively, when compared with the control.In addition, the combined order of hot water and BABA had no significant effect on disease control; however, the interval time had an obvious effect on disease control. The optimal conditions for combined hot water and BABA treatment were hot water treatment at 45 ℃ for 6 min and then 50 mmol/L BABA treatment for 5 min with an interval of 10 min. Validation experiments also indicated that combined treatment with hot water and BABA can effectively shorten duration time of heat treatment and significantly improve disease control capability for blue mold rot in postharvest apple fruits.

    apples;blue mold;heat treatment;β-aminobutyric acid

    TS255.3;S668.4

    A

    1002-6630(2011)06-0265-05

    2010-06-04

    國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(30960243)

    李永才(1973—),男,副教授,博士,研究方向?yàn)楣卟珊笊飳W(xué)。E-mail:liyongcai@gsau.edu.cn

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